AFP-L3、GP-73在PLC早期诊断中的应用及其与HBV-DNA载量、肝功能的关系

郭 虹 马孝武 祁 冉

肝癌属于肝脏恶性肿瘤，根据其特点可分为两类，一类是继发性，另一类是原发性[1]。原发性肝癌(primary liver cancer，PLC)在我国每年死亡人数大概有三十多万，占全球原发性肝癌死亡人数的半数以上，而且其5年生存率不足十分之一，是病死率极高的恶性肿瘤[2]。由于PLC早期无明显的特征，确诊时大部分已发展至中晚期，影响预后[3]。因此，早期诊断对于PLC的早期治疗及预后改善意义重大。甲胎蛋白是广泛用于肿瘤诊断的标志物，而甲胎蛋白异质体L3(alpha fetoprotein-L3，AFP-L3)为甲胎蛋白的异质体，具有更高的灵敏度和特异度。2005年英国学者首先发现高尔基体糖蛋白73(Golgi Protein 73，GP-73)与PLC具有很大关联，在Block随后的研究报道中发现GP-73对于甲胎蛋白低浓度及阴性患者有很好的实用性[4]。因此，AFP-L3和GP-73有可能成为PLC早期诊断的标志物。乙型肝炎病毒DNA(hepatitis B virus DNA，HBV-DNA)是导致PLC的主要诱因，与PLC的恶化程度有关[5]。分析AFP-L3和GP-73与HBV-DNA载量和肝功能的关系，有助于评估PLC疾病的进展。本研究探讨AFP-L3和GP-73在PLC早期诊断中的应用及其与乙肝病毒DNA(HBV-DNA)载量、肝功能的关系，旨在为临床治疗PLC提供诊断和评估参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院于2018年6月至2020年4月收治的PLC患者94例为PLC组。纳入标准：①经病理及组织学检查确诊为PLC；②年龄>18周岁。排除标准：①合并心肾肺等脏器功能不全患者；②合并全身慢性疾病、免疫缺陷和其他恶性肿瘤患者；③精神类疾病患者；④合并其他类型肝脏疾病患者；⑤接受过化疗治疗患者；⑥有肝脏手术史患者。另取94例同期健康体检者为健康组。其中PLC组男性56例，女性38例；年龄30～73岁，平均(49.26±8.64)岁；病程4～17个月，平均(11.58±2.13)个月。健康组男性49例，女性45例；年龄31～73岁，平均(49.43±8.79)岁。两组患者的基础资料差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

采集入院后两组的空腹静脉血，分离血清。①使用罗氏化学发光法(试剂盒购自罗氏公司)测定两组的AFP-L3水平；酶联免疫吸附法(试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司)测定GP-73水平。②使用荧光定量PCR扩增仪(西安天隆科技有限公司)测定PLC组的HBV-DNA水平。DNA高载量组，HBV-DNA水平104～108copy/mL；DNA低载量组，103～104copy/mL；DNA阴性组，<103copy/mL[6]。③使用全自动生化分析仪(美国伯乐公司)测定两组的谷氨酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)和总胆红素(total bilirubin，TBIL)水平。

1.3 观察指标

①两组AFP-L3和GP-73水平比较；②AFP-L3和GP-73在PLC诊断中的效能评价；③不同HBV-DNA水平受试者AFP-L3和GP-73水平比较；④两组肝功能指标比较；⑤AFP-L3和GP-73水平与肝功能指标的相关性。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组AFP-L3和GP-73水平比较

PLC组AFP-L3和GP-73水平高于健康组(P<0.05),见表1。

表1 两组AFP-L3和GP-73水平比较

2.2 AFP-L3和GP-73在PLC诊断中的效能评价

AFP-L3诊断PLC的AUC为0.750，GP-73诊断PLC的AUC为0.899，两者联合诊断PLC的AUC为0.935，高于单独诊断(P<0.05)，见图1、表2。

表2 AFP-L3和GP-73单独及联合诊断在PLC中的效能

图1 AFP-L3和GP-73单独及联合诊断在PLC中的ROC曲线

2.3 不同HBV-DNA载量受试者AFP-L3和GP-73水平比较

DNA高载量组AFP-L3和GP-73水平高于低载量组(P<0.05)；DNA低载量组AFP-L3和GP-73水平高于阴性组(P<0.05)。见表3。

表3 不同HBV-DNA载量受试者AFP-L3和GP-73水平比较

2.4 两组肝功能指标比较

PLC组ALT、AST和TBIL水平高于健康组(P<0.05)。见表4。

表4 AFP-L3水平与肝功能指标的相关性

2.5 AFP-L3水平与肝功能指标的相关性

AFP-L3与ALT和AST呈正相关(P<0.05)，与TBIL无关(P>0.05)，见表5。

表5 AFP-L3水平与肝功能指标的相关性

2.6 GP-73水平与肝功能指标的相关性

GP-73与ALT、AST和TBIL均呈正相关(P<0.05)，见表6。

表6 GP-73水平与肝功能指标的相关性

3 讨论

PLC是全球范围的恶性肿瘤，尤其在亚、非、欧等地区患病人数较多，我国也是PLC的多发地区，每年因肝癌死亡的人数在恶性肿瘤中占有很高比重[7]。早期PLC主要通过磁共振、超声检查等影像学检测，可以准确定位，对患者皮肤损害小，而且使用简便，但是它对肝癌的灵敏度不高，会存在不可忽略的误差[8-9]。甲胎蛋白是在临床应用较多的血清学标志物，对早期的PLC灵敏度为40%～60%，不满足精确诊断的要求，而且在肝硬化、慢性肝炎等肝疾病中，水平也会很高，容易造成误诊[10]。因此，需要寻找更为合适的指标用于PLC的早期诊断。

AFP-L3不会受到甲胎蛋白含量的干扰，也不会因患者性别和年龄的差异而含量不同，灵敏度和特异性比甲胎蛋白更高，在甲胎蛋白阴性肝癌患者中，灵敏度也有40%，特异度达到80%以上，诊断疾病的优点较甲胎蛋白更明显[11-12]。本研究结果显示，PLC组AFP-L3高于健康组，与杨永昌等[13]研究结果一致，提示AFP-L3与疾病发生有关；AFP-L3诊断PLC的AUC为0.750，提示AFP-L3具有诊断价值，可用于PLC早期诊断。周锐峰等[14]通过比较乙肝病毒DNA载量与PLC肿瘤体积倍增时间的关系，发现乙肝病毒DNA载量与早期PLC的疾病进展呈正相关。林晓渊[15]研究发现，随着DNA载量的增加，PLC患者AFP-L3水平也升高，本研究结果与其一致。DNA高载量组AFP-L3水平高于低载量组，DNA低载量组AFP-L3水平高于阴性组，提示AFP-L3可以评估PLC的疾病进展。在PLC患者的肝癌组织中，进行乙肝病毒DNA的复制过程，引起连锁反应，致使内质网和高尔基体等肝细胞细胞器受到破坏，从而引起AFP-L3水平升高。随着DNA载量的增加，AFP-L3水平呈上升趋势，说明AFP-L3水平可以体现PLC患者肝功能损伤程度，进而与疾病的进展有关。方非[16]研究结果显示，AFP与肝功能指标存在密切联系。本研究结果显示，PLC组ALT、AST和TBIL水平高于健康组，说明ALT、AST和TBIL均与肝功能损伤程度正相关；AFP-L3与ALT和AST呈正相关，进一步提示AFP-L3可以评估PLC的疾病进展。

有近期研究报道，GP-73在正常肝脏组织中几乎不表达，但是当肝脏出现炎症、硬化和病变时，表达水平会显著增高，在肝癌中的表达曲线甚至会出现峰值[17]。赵惠柳等[18]研究发现，GP-73在PLC患者中的表达水平显著较健康人群更高，因此可将GP-73作为PLC早期诊断的血清标志物。本研究结果显示，PLC组GP-73高于健康组，且GP-73诊断PLC的AUC为0.899，提示GP-73与疾病发生有关，且具有诊断价值，可用于PLC早期诊断。HBV-DNA、ALT、AST和TBIL均与肝脏损伤程度有关，分析AFP-L3、GP-73水平与HBV-DNA、ALT、AST和TBIL的关系，有助于对PLC疾病的恶化程度作出判断，从而更好地对症治疗。结果显示，DNA高载量组GP-73水平高于低载量组，DNA低载量组GP-73水平高于阴性组，且GP-73与ALT、AST和TBIL均呈正相关，提示GP-73可以间接反映PLC患者的肝功能损伤程度，能用来评估PLC的疾病进展。

为了进一步探讨AFP-L3、GP-73和PLC疾病的关系，采用ROC曲线分析AFP-L3和GP-73单独及联合在PLC中的诊断效能。结果显示，两者联合诊断的AUC高于单独诊断，提示AFP-L3和GP-73两者联合诊断价值更高。王翠晓等[19]研究同样发现，联合检测可以提高原发性肝癌的诊断效能，本研究结果与其基本一致。在单独的AFP-L3检测诊断时，由于AFP-L3分泌浓度不高或者病灶较小而无法检测出现呈现假阴性，在乙肝病毒恰好停留在活动期时，AFP-L3有可能呈现假阳性。单独的GP-73检测时同样会出现灵敏度不高的缺点，而血清AFP-L3和GP-73联合检测能够优势互补，发挥协同效应，提高诊断效能。

综上所述，AFP-L3和GP-73均可用于PLC早期诊断，且两者联合诊断价值更高，血清AFP-L3和GP-73与HBV-DNA载量和肝功能密切相关，可以用来评估疾病的进展。