复方甘草黄酮乳膏在低密度聚乙烯复合软膏管中的稳定性研究

成小红，蔡果（中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院药剂科，江苏 南京 210042）

复方甘草黄酮乳膏为我院自制的特色医院制剂，主要用于治疗黄褐斑、雀斑等皮肤色素沉着性皮肤病。其主要成分为甘草黄酮，维C 异多酯和维生素E，其他成分为液状石蜡、硬脂酸、十八醇、平平加、羟苯乙酯、无水亚硫酸钠、甘油等。 甘草黄酮溶液是从特定品种天然植物甘草中提取的天然美白剂，主要成分为光甘草定，有强抑制酪氨酸酶的活性，功效强于熊果苷、曲酸、维生素C 和氢醌，又能抑制多巴色素互变和DHICA 氧化酶的活性，是一种快速、高效、绿色的美白祛斑物质。 具有与SOD（过氧化物歧化酶）相似的清除氧自由基的能力。具有与维生素E 相近的抗氧自由基能力。 能显著减少由紫外照射引起的色素沉着［1］。其化学结构式为：（见下图）。因其结构中含酚羟基，对有紫外光线和储存温度高的情况下易氧化失效，需在低温4℃~10℃和避光密闭保存［2］。为了防止上述因素对制剂质量的影响，我院制剂室在分装本品时，采用五层塑料复合软管作为内包装材料，其具体结构由外往里依次为：PE（外层）、ADMER（粘合层）、EVOH（阻隔层）、ADMER（粘合层）和PE（内层）， 为了考察该软管对复方甘草黄酮乳膏内在质量的影响，本文对此材质复合软膏管包装的复方甘草黄酮乳膏进行稳定性考察。 报道如下。

1 仪器与试药

恒温箱（型号BPG-9140A，上海一恒)；Waters2695高效液相色谱仪；System.色谱工作站；Waters.2487紫外检测器；Waters 色谱柱Ultimate.XB-C18(4.6×250 mm，5 μm)；电子分析天平（厂家：瑞士Mettler-Toledo 公司，型号：XPR56DR/AC）；光甘草定(CFS，含量98%，中科质检生物技术有限公司）批号：201901；甲醇(色谱纯，生产厂家：美国)；乙腈(色谱纯，生产厂家：美国)；复方甘草黄酮乳膏(本院制剂室生产，制剂批准号：苏药制字H04001026）；批号：201019-1、201019-2、201019-3；药用聚丙烯软管(佛山市南海新宝德塑料有限公司）；其他原辅材料、化学试剂均符合药用标准或分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品的配制、包装、储存 配制：按我院复方甘草黄酮乳膏的标准配制规程规定的方法进行配制。即取十八醇、液状石蜡、硬脂酸，加热熔化，温度在约80℃左右，为油相；另取甘油与适量纯化水混合，加热至约80℃时，加入平平加等溶解为水相；将油相缓缓加入水相中，不断搅拌使乳化，待温度降至40℃左右时，加入甘草黄酮溶液，搅拌均匀至冷凝即得。 包装：分装于有阻隔层的复方聚丙烯软管中。 储存：遮光，密闭，4℃~10℃冰箱冷藏。

2.2 考察方法

2.2.1 性状 依据《中国药典》2020 版四部0100 制剂通则和0109 软膏剂.乳膏剂要求，基质应均匀、细腻、无酸败、异臭、变色、变硬等变质现象。 乳膏剂不得有油水分离及胀气现象；软管材质不得影响内容药品的性状。 本品为浅或微棕色乳膏。

2.2.2 微生物限度 依据(《中国药典》2020 版四部通则1105、1106、1107)非无菌产品微生物限度检查，每1 g 需氧菌总数不得过100 cfu，每1 g 霉菌和酵母菌总数不得过10 cfu，每1 g 不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌［3］。

2.2.3 含量测定 参考有关资料，采用高效液相色谱法测定该乳膏中主药光甘草定的含量［4-5］。

2.2.3.1 色谱条件 色谱柱为：Ultimate.XB-C18（250×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙晴：1%冰醋酸为53:47，检测波长为：280 nm；柱温：32℃，进样量；10 ul，流速：1 ml/min。

2.2.3.2 对照品溶液配制 精密称定光甘草定对照品68.4000 mg，置10 ml 棕色容量瓶中，以70%甲醇水溶解并稀释至刻度作为母液； 再精密移取1ml 置于100 ml 容量瓶中， 加70%甲醇水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(含光甘草定67.032 μg/ml)，过滤，备用。

2.2.3.3 供试品溶液配制 精密称取复方甘草黄酮乳膏10 g，加适量70%甲醇水溶解，过滤置于50 ml棕色容量瓶中，以70%甲醇水洗涤，过滤，加70%甲醇水至刻度，摇匀，备用。

2.2.3.4 标准曲线的制作 分别精密移取0.3，0.9，1.5，2.1，2.7 ml 对照品溶液， 置于100 ml 棕色容量瓶中，以70%甲醇水稀释至刻度，摇匀，过滤。 按

2.2.2.1 色谱条件进样， 光甘草定浓度：20.1096 μg/ml、60.3288 μg/ml、100.548 μg/ml、140.7672 μg/ml、18 0.9864 μg/ml； 对应的峰面积为：532 397.069、1 597 280.83、2 662 164.59、3 727 048.34、4 791 932.1。以峰面积为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线,得回归方程为A=26477C-44.81，其中：A为峰面积、C 为浓度（μg/ml）；r=0.9 999，甘光草定在20.1096~180.9864 μg/ml 浓度范围内浓度与峰面积线性关系良好。

2.2.3.5 精密度试验 取对照品溶液适量，按2.2.2.1色谱条件进样测定，重复操作6 次，记录光甘草定的峰面积，为RSD=0.85%，表明精密度良好。

2.2.3.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按2.2.2.1色谱条件，分别在0，2，4，8，10，24 h 进样测定，记录光甘草定的峰面积，结果：光甘草定峰面积RSD=1.28%，说明供试品在24 h 内基本稳定。

2.2.3.7 重复性试验 取供试品溶液，每次进样量1 μL，按2.2.2.1 色谱条件进行6 次测定，记录峰面积，结果:光甘草定峰面积RSD=1.86%，说明此方法重复性良好。

2.2.3.8 加样回收试验(n=3） 取复方甘草黄酮乳膏，称取9 份，每份为10 g，每3 份为一组，分别加入浓度为67.032 μg/ml 的光甘草定对照品溶液，第一组加入0.5 ml(含光甘草定33.516 mg)，第二组加入1 ml(含光甘草定67.032 mg)，第3 组加入1.5 ml(含光甘草定100.548 mg)，分别以70%甲醇水定容到100 ml 棕色容量瓶中，过滤，按2.2.2.1 色谱条件进样，测得：第一组回收率为99.81%，第二组回收率为：98.86%，第三组回收率为98.92%，光甘草定平均回收率为99.17%，RSD=0.83%。

2.2.3.9 样品含量测定 取连续生产的3 批医院制剂，每批精密称取样品2 份，按照2.2.3.3 进行样品处理后,按2.2.2.1 色谱条件进样，测得复方甘草黄酮乳膏中光甘草定的含量。 见表1。

表1 3 批复方甘草黄酮乳膏中光甘草定含量测定结果

3 稳定性考察

3.3.1 影响因数试验 将3 批分装好的复方甘草黄酮乳膏原包装，分别进行高温(60℃)试验、高湿度(25℃、90%±5%)试验、强光照射(30001x)试验，分别于0，5，10 d 取样进行考察。 见表2~4。

表2 影响因数试验结果（批号201019-1）

表3 影响因数试验结果（批号201019-2）

影响因素试验结果表明：复方甘草黄酮乳膏在高温、强光照射条件下易氧化变质呈土棕色，膏体也随之油水分层；湿度对药膏质量影响小。故加速试验需在储存条件：温度4℃~10℃、软管遮光密闭条件下进行。

3.3.2 加速试验 取3 批复方甘草黄酮乳膏，在温度4℃~10℃、相对湿度（高湿）90%±5%的条件下放置6 个月，分别于0，1，2，3，6 个月末取样进行考察。 见表5~7。

表5 加速试验结果（201019-1）

表4 影响因数试验结果（批号201019-3）

表6 加速试验结果（201019-2）

表7 加速试验结果（201019-3）

加速试验结果表明：加速试验条件(温度4℃~10℃、相对湿度90%±5%)下放置6 个月，样品的性状、微生物限度检查、主药含量等均符合质量标准规定。

3.3.3 长期试验 将3 批复方甘草黄酮乳膏，在温度4℃~10℃、 相对湿度60%±10%的条件下放置l2 个月，分别于0，3，6，9，12 个月末，随机取样进行考察。见表8、9、10。

表8 长期试验结果（201019-1）

长期试验结果表明：长期试验条件（温度4℃~10℃相对湿度60%±10%）下放置12 个月，样品的性状、微生物限度检查、主药含量等均符合质量标准规定。

表9 长期试验结果（201019-2）

表10 长期试验结果（201019-3）

4 讨论

4.1 光甘草定对温度、光线、氧敏感，性质不稳定，易氧化变质，故在配制操作过程中避免高温，尽量低温加入，在贮藏时要遮光、低温、密闭保存；

4.2 将复方甘草黄酮乳膏包装于有阻隔层的复方聚丙烯复合软管中， 较普通软管防透光性能大大加强、有效隔绝了光线对制剂质量的影响，同时，能有效防止药膏失水、渗透、酸败；隔绝了药品与空气中氧的接触，防止药品氧化，从多方面保证药品质量；

4.3 通过稳定性试验结果考察表明：将复方甘草黄酮乳膏分装在此复方聚丙烯复合软管中， 放置在冰箱4℃~10℃，密闭保存，12 个月内质量稳定，故其有效期可以至少12 个月。