40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂液相色谱分析

＊马睿 邱立鹤

（1.山东中科睿谱技术有限公司 山东 250000

2.山东科诺玛检测技术有限公司 山东 250000）

联苯肼酯英文通用名称bifenazate，化学分子式C17H20N2O3，是一种γ-氨基丁酸（GABA）抗结剂，主要防治活动期叶螨，速效性好，对幼螨和称、若螨效果好，对一些其它螨类，尤其对二斑叶螨具有杀卵作用。乙螨唑英文通用名etoxazole，化学分子式NC21H23F2NO2，对螨卵胚胎的形成和幼螨到成螨的蜕皮过程具有抑制作用，该抑制机制在成螨中无显著效果，但在螨卵及幼卵中作用显著。40%联苯肼酯·乙螨唑既有速效性，又有很好的持效期，可减缓害虫抗性的生产，还可以提高对作物的安全性。现有国行标分析方法中，《农药分析手册》为联苯肼酯、乙螨唑的单成分析方法，T/ZNX 009-2021为联苯肼酯单剂分析方法、T/SDNY 034-2022为对乙螨唑的单剂分析方法。为同时高效准确快速的分析联苯肼酯、乙螨唑两种成分，本文开发了液相色谱分析方法，并确认了该方法的精密度和准确度均满足分析要求。该方法可对40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂的有效成分准确定值。

1.试验部分

(1)仪器和试剂

仪器：岛津SPD-20A高效液相色谱仪：PDA检测器；岛津LC solution工作站；色谱柱：250mm×4.6mm（i.d.）C18不锈钢柱，粒径5μm；万分之一天平；超声波振荡器；抽滤装置；孔径为0.45μm的尼龙滤膜。乙腈：合勒化学，色谱纯；水：新蒸二次蒸馏水；联苯肼酯标准品：上海农药研究院，99.0%；乙螨唑标准品：上海农药研究院，99.0%；40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂为本公司留样复测样品。

(2)检测波长的选择

图1 乙螨唑光谱图

图2 联苯肼酯光谱图

图3 联苯肼酯、乙螨唑标准样品的高效液相色谱图

图4 40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂的高效液相色谱图

通过PDA检测器对联苯肼酯、乙螨唑标准溶液在190nm～600nm波长下进行扫描，其中，乙螨唑在190nm～300nm有吸收，联苯肼酯在190nm～330nm有吸收，详细吸收情况见图1、图2。

综合考虑助剂、溶剂的波长干扰及联苯肼酯、乙螨唑的响应值，最终选择200nm作为本次分析的波长。

(3)流动相的选择

考虑联苯肼酯、乙螨唑在不同溶剂中溶解度、色谱分离程度、保留时间等因素，选择乙腈+水=80+20（V+V）作为分析时的流动相。

(4)典型色谱图

流动相：乙腈:水=80:20（V+V）；检测波长：200nm；流速：1.0mL/min；进样体积：5μL；柱温：（30±1）℃。在上述色谱条件下：联苯肼酯的保留时间约：4.117min；乙螨唑的保留时间约：9.600min。典型液相色谱图见图3、图4。

(5)标样及被试物的配制

①标样溶液的配制

依次称取联苯肼酯标准样品0.05g（精确至0.0002g），乙螨唑标准样品0.03g（精确至0.0002g），将上述两次称量的标准品置于同一100mL容量瓶中，加入10mL乙腈于容量瓶中，超声震荡至标准品完全溶解后，冷却至室温，再加入乙腈溶液稀释至刻度线，备用。

②精密度被试物溶液的配制

称取0.2g（精确至0.0002g）被试物，置于100mL容量瓶中，加入10mL乙腈于容量瓶中，超声震荡至被试物完全溶解后，冷却至室温，再加入乙腈溶液稀释至刻度线，经孔径为0.45μm有机过滤头过滤后备用。

③准确度被试物溶液的配制

称取0.1g（精确至0.0002g）被试物，联苯肼酯标准样品0.025g（精确至0.00002g），乙螨唑标准样品0.017g（精确至0.00002g），置于同一100mL容量瓶中，加入10mL乙腈于容量瓶中，超声震荡至被试物完全溶解后，冷却至室温，再加入乙腈溶液稀释至刻度线，经孔径为0.45μm有机过滤头过滤后备用。

(6)测定过程

①分析方法的线性相关性测定

分别配制5个浓度的联苯肼酯（乙螨唑）标准品溶液，通过典型色谱图的色谱条件进行分析，平行测定每个浓度点2次，每个浓度点取平行测定两次的峰面积均值进行线性拟合。绘制标准曲线时，横坐标为联苯肼酯（乙螨唑）浓度，纵坐标为峰面积均值。

②分析方法的精密度测定

按照上述试剂溶液配制5组被试物溶液，按照典型色谱图的色谱参数设置液相色谱仪，稳定一段时间后，观察仪器基线，待基线平稳后，测试数针标样溶液，观察标准溶液色谱图中联苯肼酯（乙螨唑）峰面积，当相邻两针联苯肼酯（乙螨唑）峰面积相对标准偏差小于1.5%后，溶液顺序按照标准样品、被试物、被试物、标准样品测定。采用色谱峰面积外标法对联苯肼酯（乙螨唑）含量进行计算。统计5次测定结果的RSD。

③分析方法的准确度测定

按照上述试剂溶液配制5组被试物溶液，按照典型色谱图的色谱参数设置液相色谱仪，稳定一段时间后，观察仪器基线，待基线平稳后，测试数针标样溶液，观察标准溶液色谱图中联苯肼酯（乙螨唑）峰面积，当相邻两针联苯肼酯（乙螨唑）峰面积相对标准偏差小于1.5%后，溶液顺序按照标准样品、被试物、被试物、标准样品测定，共测定5组，采用色谱峰面积外标法对联苯肼酯（乙螨唑）含量进行计算并计算回收率。统计5次测定结果的回收率。

(7)结果计算

按照上述的方法平行测定两次，被试物中联苯肼酯（乙螨唑）的质量分数X（%）按式（1）计算：

式中：A1-标样溶液中，联苯肼酯（乙螨唑）峰面积的平均值；

A2-被试物溶液中，联苯肼酯（乙螨唑）峰面积的平均值；

m1-联苯肼酯（乙螨唑）标样的质量，g；

m2-被试物的质量，g；

P-标样中联苯肼酯（乙螨唑）的质量分数，%。

(8)允许差

要求联苯肼酯测定结果差≤0.5%、乙螨唑测定结果差≤0.3%。

2.结果与讨论

(1)分析方法的线性相关性

联苯肼酯线性回归方程y=6658.2x+699.77，线性相关系数r=0.9998；乙螨唑线性回归方程：y=11200x+44665，线性相关系数r=0.9998，相关系数均在0.999以上，表示线性关系良好（如下见图5、图6）。

图5 联苯肼酯线性关系图

图6 乙螨唑线性关系图

(2)分析方法的精密度

表1 40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂精密度测定

联苯肼酯5次测定的RSD为0.63%＜1.65%和乙螨唑5次测定的RSD为0.35%＜1.77%（如下见表1）。RSD均满足NY/T 2887-2016中的要求，该方法精密度良好。

(3)分析方法的准确度

最终测得联苯肼酯的回收率为99.23%～100.00%，平均回收率99.56%；乙螨唑的回收率为99.40%～100.56%，平均回收率99.76%（如下见表2）。回收率在98%～102%之间，均满足NY/T 2887-2016中的要求，该方法准确度良好。

表2 40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂准确度测定

3.结论

上述试验表明，40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂中有效成分质量分数的分析方法，可同时分析联苯肼酯、乙螨唑两种有效成分，可节约分析成本且快速；另外，该方法结果准确复现性好，可准确定值同类型产品。综上，该方法经济高效，且操作性强，在实际生产过程中有良好应用。