30%联苯肼酯·四螨嗪悬浮剂液相色谱分析

苑志军，徐海燕

（上海生农生化制品股份有限公司，上海201989）

四螨嗪是一种新型高效杀螨剂，其对叶螨的卵和幼、若螨触杀效果好，不能触杀成螨，但成螨触药后产卵量减少，卵的孵化也受到抑制。联苯肼酯是一种新型选择性叶面用喷雾药剂，其对螨的各个生活阶段有抑制效果，且持效期长。为了提高检测准确性和检测效率，找到适合本公司产品的分析方法，经过多次分析条件筛选，采用高效液相色谱法对联苯肼酯和四螨嗪混剂同时进行分离测定，方法简便可行，适用于生产质量控制。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪，具有紫外检测器和自动进样器，Agilent 1260色谱工作站，色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18 250 mm×4.6 mm(id)不锈钢柱，内装C18填充物，粒径5 μm；过滤器，滤孔膜径约0.45 μm；超声波清洗器。

试剂：乙腈，色谱纯；水，新二次蒸馏水；联苯肼酯标样，已知质量分数98.2%；四螨嗪标样，已知质量分数97.0%；试样，30%联苯肼酯·四螨嗪悬浮剂，自制；空白制剂：将除原药外的所有助剂混匀，自制。

1.2 色谱条件

流动相：乙腈+水=50+50（V/V）；柱温：30℃；流速：1.2 mL/min；检测波长：270 nm；进样体积：5 μL；保留时间：联苯肼酯8.8 min，四螨嗪20.9 min；以上操作参数是典型的，可根据不同仪器特点对给定操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。在上述条件下，联苯肼酯和四螨嗪典型高效液相色谱图如图1、图2所示。

图1 联苯肼酯·四螨嗪标样高效液相色谱图

图2 30%联苯肼酯·四螨嗪悬浮剂高效液相色谱图

1.3 测定步骤

1.3.1 标样溶液的配制

称取联苯肼酯和四螨嗪标样各0.05 g（精确至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，置于超声水浴中振荡15 min，取出冷却至室温，备用。

1.3.2 试样溶液的配制

称取约0.35 g的试样（精确至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，置于超声水浴中振荡15 min，取出冷却至室温后用0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。

1.3.3 测定

在上述色谱条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针联苯肼酯和四螨嗪的相对响应值变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样测定。

1.3.4 计算

将测得的两针试样溶液以及试样溶液前后两针标样溶液中联苯肼酯（四螨嗪）峰面积分别进行平均。联苯肼酯（四螨嗪）质量分数X（%）按式（1）计算：

式中：A1—前后两次进样测得的同一标样溶液中联苯肼酯（四螨嗪）峰面积的平均值；A2—前后两次进样测得的同一试样溶液中联苯肼酯（四螨嗪）峰面积的平均值；m1—联苯肼酯（四螨嗪）标样的质量，g；m2—试样的质量，g；P—联苯肼酯（四螨嗪）标样的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 波长的选择

利用DAD检测器对联苯肼酯和四螨嗪分别进行扫描。从图3、图4可看出，联苯肼酯在230 nm、270 nm都有吸收峰，四螨嗪270 nm处有吸收峰，考虑到分离好且避免溶剂及杂质干扰和峰面积、峰高的比例，并且能直接进行配药定量分析，故选择270 nm作为检测波长。

图3 联苯肼酯的光谱图

图4 四螨嗪的光谱图

2.1.2 色谱柱和流动相的选择

分离柱采用常用的C18柱，从分离时间和效果考虑，选定250 mm×4.6 mm(id)C18不锈钢柱。分别用乙腈和水配成不同的流动相，反复筛选进样，得到不同的分离效果图。经过多种分离情况对比，选定流动相为乙腈+水=50+50（V/V），流速：1.2 mL/min时，有效成分与杂质互不干扰分离，峰形对称，基线平稳，保留时间适宜。

2.2 方法线性相关性

准确称取联苯肼酯标样（含量为98.2%）1.25 g、四螨嗪标样（含量为97.0%）1.25 g于250 mL容量瓶中，加入乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。准确吸取2 mL、5 mL、10 mL、15 mL、20 mL样品置于5只100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀后进样分析，得其响应值。以标准液质量浓度为横坐标，标准液峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得联苯肼酯标准曲线为：Y=6 741.4X+3.038 9，相关系数r=1.000 0，表明联苯肼酯在质量浓度0.098 2～0.981 6 g/L范围内，峰面积与质量浓度间线性关系良好；得四螨嗪标准曲线为：Y=10 896X+13.56，相关系数r=1.000 0，表明四螨嗪在质量浓度0.098 3～0.982 8 g/L范围内，峰面积与质量浓度间线性关系良好。线性相关性测定结果见表1、图5、图6。

表1 联苯肼酯和四螨嗪线性相关性

图5 联苯肼酯液相色谱线性关系图

图6 四螨嗪液相色谱线性关系图

2.3 方法的准确度试验

按照配方比例，称取0.28 g（精确至0.000 2 g）空白制剂样品置于100 mL容量瓶中，分别添加0.08 g（精确至0.000 2 g）含量为97.0%的四螨嗪和0.04 g含量为98.2%的联苯肼酯标准品，得到5个实验室合成样品，然后按上述色谱条件测定其含量，计算回收率，联苯肼酯平均回收率为100.26%，四螨嗪平均回收率为100.30%（见表2）。

2.4 方法的精密度试验

分别称取30%联苯肼酯·四螨嗪悬浮率样品6份，按上述方法进行6次平行测定，四螨嗪含量平均值为9.95%，标准偏差0.039，变异系数0.4%；联苯肼酯含量平均值为19.89%，标准偏差0.097，变异系数0.49%，说明该方法精密度较高（见表3）。

表2 回收率结果

表3 精密度结果

3 结论

综上所述，该分析方法准确度、精密度高，线性关系良好，是分析30%联苯肼酯·四螨嗪悬浮剂中有效成分联苯肼酯和四螨嗪的一种准确、可靠的方法。