耳针治疗对慢性心力衰竭大鼠血清BNP、ET-1和IL-6的影响

吴咚咚，谭曾德，周亚滨，李岩

（黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040）

心力衰竭是指由多种原因致心肌收缩力减弱，不能将心室内的血液充分排出，从而出现动脉系统供血不足和静脉系统淤血，由于各脏器因静脉淤血所引起的临床症状最为明显，故称充血性心力衰竭［1］。中医学将慢性心力衰竭归为“惊悸”“怔忡”“喘证”“痰饮”“水肿”范畴。病机为心、肺、肾阳气虚衰，血行无力，水湿不化，痰湿泛溢，外邪内侵。病位在心，涉及肺、脾、肾等脏器［2］。耳针取“心”“定喘”“肺”“肾”“神门”“交感”“内分泌”，可用针刺、按压及埋针等方法治疗慢性心力衰竭，临床疗效较好，但其作用机制未明确［3］，故本实验将研究耳针治疗对慢性心力衰竭（CHF）模型大鼠血清BNP、ET-1 和IL-6 的影响，初步阐明耳针治疗慢性心力衰竭的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级健康雄性SD大鼠40只，体质量（200±20）g，8 周龄，由青龙山动物繁殖中心提供，饲养于黑龙江中医药大学附属第一医院动物实验中心。环境温度（23±1.5）℃，相对湿度（50±3.5）%，全部大鼠分笼饲养，自由饮食。本研究符合实验动物伦理学标准。

1.2 仪器与试剂

水合氯醛（天津市大茂化学试剂厂，规格：500 g/瓶，批号：20190507）；注射用盐酸阿霉素（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，规格：100 mg/瓶，批号：D107159）；BNP、ET-1和IL-6试剂盒（上海信裕生物科技有限公司）。

彩色多普勒超声显像仪（美国西门子）；中研太和牌一次性使用无菌耳穴揿针（北京中研太和医疗器械有限公司，规格：100 支/盒）；彩色超声诊断系统（Philips Ultrasound 公司，型号：iE33）；多功能酶标仪（美国伯腾仪器有限公司）。

1.3 动物分组与模型建立

选取40只健康雄性SD大鼠，依据随机数字表随机分为对照组、模型组、假耳针治疗组和耳针治疗组，各10只。大鼠均适应性喂养1周后，除对照组外，其余3组采用腹腔注射阿霉素的方法制备CHF模型（每次称取注射用盐酸阿霉素14 mg 溶于7 mL 生理盐水中，稀释成2.0 mg/mL 的溶液，每次给药剂量为1.25 mg/kg，即0.625 mL/kg，每周2次，连续6周）。对照组10只，腹腔注射溶剂。

1.4 实验方法

对照组和模型组不予任何治疗；耳针治疗组和假耳针治疗组分别予以耳针和假耳针治疗2个月。

1.4.1 耳针治疗组

耳穴选穴：取大鼠耳穴“心”“肺”“肾”“神门”，穴位定位参照文献［4］。

操作方法：耳穴周围皮肤用75%乙醇棉球消毒，运用血管钳夹住一次性无菌揿针［规格为0.2 mm ×1.5 mm，SEIRIN 株式会社，进口注册号：国食药监械（进）字2012 第2272550 号（更）］，并固定大鼠耳廓，绷紧施术部位皮肤，将揿针固定留置于所选大鼠耳穴上12 h，每日1 次，两耳交替治疗，30 d 为1 个疗程，共治疗2个疗程，两个疗程之间休息1 d。由具有10年以上针灸治疗临床经验的针灸师进行操作。

1.4.2 假耳针治疗组

耳穴选穴：取大鼠耳穴“心”“肺”“肾”“神门”，穴位定位参照文献［4］。

操作方法：将一次性无菌揿针剪去针头使用，耳针的规格和具体操作同耳针组。

1.5 超声心动图检测心功能

采用彩色多普勒超声显像仪进行超声心动图检测，探头频率为12 MHz，取心律稳定时的连续10 个心动周期测量获得实验大鼠的LVIDd、LVIDs、LVFS 和LVEF等指标。

1.6 组织病理学检查

实验结束后处死大鼠，取大鼠心尖放入4%多聚甲醛溶液中固定24 h，按说明书步骤将组织进行脱水、透明、浸蜡包埋、切片，并进行HE染色。

1.7 血液标本的采集及BNP、ET-1和IL-6检测

实验结束后处死大鼠，打开腹腔后进行腹腔静脉采血，分别采集2、1.5 mL，4 500 rpm 离心10 min，取上清液，ELISA 试剂盒检测血浆中BNP、ET-1 和IL-6含量，严格按照说明书进行操作。

1.8 统计学方法

采用SPSS26.0 软件进行数据处理及分析。计量资料采用均数±标准差表示，若数据符合正态分布且方差齐性，组间比较采用单因素方差分析，并采用LDS进行两两比较，组内比较采用配对t检验；若数据不符合正态分布采用秩和检验。计数资料采用频数描述，采用卡方/Fisher's 精确检验，等级资料采用秩和检验。统计检验均采用双侧检验，检验水准α = 0.05，P＜0.05代表具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠心肌组织HE染色结果

对照组大鼠心肌组织纹理清晰，心肌走形规整，排列平行，心肌细胞明显，细胞核清晰，胞体无水肿。模型组心肌细胞可有水肿、空泡现象，炎细胞浸润明显，心肌纤维断裂明显。而假耳针和耳针治疗组心肌断裂细胞水肿均较模型组减轻。见图1。

2.2 各组大鼠治疗后超声心动图指标比较

与对照组比较，耳针治疗组、假耳针治疗组和模型组大鼠LVIDd 和LVIDs 显著提高（P＜0.05），LVFS 和LVEF 显著降低（P＜0.05）；与模型组相比，耳针治疗组和假耳针治疗组的LVIDd、LVIDs、LVFS 和LVEF 水平相似，无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各组大鼠超声心动图指标比较（±s）

表1 各组大鼠超声心动图指标比较（±s）

注：与对照组比较，*P ＜0.05。

组别对照组模型组假耳针治疗组耳针治疗组n 10 10 10 10 LVIDd（mm）5.94±0.48 6.63±0.45*6.62±0.47*6.61±0.45*LVIDs（mm）3.41±0.52 4.18±0.62*4.15±0.56*4.09±0.58*LVFS（%）46.07±5.32 35.18±8.46*37.35±7.08*38.62±6.52*LVEF（%）82.56±4.69 57.28±4.76*60.21±3.47*62.86±4.25*

2.3 各组大鼠BNP、ET-1和IL-6含量比较

与对照组比较，模型组、假耳针治疗组和耳针治疗组血清BNP、ET-1 和IL-6 含量升高（P＜0.05）；与模型组比较，假耳针治疗组和耳针治疗组血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低（P＜0.05）；与假耳针治疗组比较，耳针治疗组血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低更明显（P＜0.05）。见表2。

表2 各组大鼠BNP、ET-1和IL-6含量比较（±s，n=10）

表2 各组大鼠BNP、ET-1和IL-6含量比较（±s，n=10）

注：与对照组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01；与模型组比较，△P ＜0.05；与假耳针治疗组比较，#P ＜0.05。

组别对照组模型组假耳针治疗组耳针治疗组BNP（ng/mL）33.81±7.85 74.25±6.94**60.19±6.36*△43.92±8.13*△#ET-1（pg/mL）35.92±8.78 94.26±10.97**57.83±11.32*△46.28±9.75*△#IL-6（pg/mL）21.96±5.63 56.72±6.38**47.15±6.24*△34.08±5.95**△#

3 讨论

心力衰竭是心脏肌肉受损或负荷过度，以至于无法输送足够的血液供给身体的需要，是大多数心脏疾病的最终阶段［5-6］。慢性心力衰竭也称慢性充血性心力衰竭，多由心瓣膜病以及高血压、冠心病等引起。左心衰竭最常见，临床表现有不同程度的呼吸困难、咳嗽、咳痰、咯血、肺部湿性啰音，乏力、疲倦、头昏、心慌，尿少和肾功能损害等。右心衰竭临床表现有消化道症状如腹胀、食欲不振、恶心、呕吐，呼吸困难，水肿，颈静脉充盈、怒张，肝肿大等。且心力衰竭患者多有心脏扩大［7］。中医学认为［8-10］，由心阳亏虚引起者，表现为胸闷气短、心悸、口唇紫绀、面色苍白、汗出肢冷、倦怠乏力、舌淡胖、脉沉细或结代，治宜温补心阳；由心阴亏虚引起者，表现为胸闷、心悸不宁、五心烦热、少寐多梦、头晕目眩、口干、面颊烘热、舌红少津、脉细数或结代，治宜滋阴养心；由心血瘀阻引起者，表现为心悸怔忡、胸闷心痛、面唇紫暗、舌紫暗或有瘀斑、脉细涩或结代，治宜活血化瘀；因水气凌心引起者，表现为心悸怔忡、胸闷脘痞、咳吐痰涎、恶心呕吐、面浮足肿、不能平卧、尿少、苔白腻或白滑、脉弦滑、治宜温阳利水。

《灵枢·口问》曰：“耳者，宗脉之所聚也”“五脏六腑，十二经脉有络于耳者”，故耳与五脏六腑均有关系。本研究选取治疗慢性心力衰竭的常用耳穴“心”“肺”“肾”“神门”，以达到平衡心之阴阳，调和心之气血之功。

临床通常通过血常规检查、尿素氮、肌酸酐、电解质、血清蛋白、血糖、肝功能、尿液检查及脑钠肽（BNP）来协助诊断心力衰竭［11］。使用超声心动图检测心功能，可实时地观察心脏的构造及收缩功能，清楚地辨别是否有心室扩大、心肌肥厚、心肌收缩异常或心包膜疾病，也可计算出左心室射出分率（LVEF）来评估心脏的收缩功能［12-13］。当各种导致心室内压力升高时，该压力便牵张心肌细胞使其分泌BNP。理论上，BNP 的测定可判断患者有无心室内压力的升高［14］。内皮素-1（ET-1）可促进心肌细胞和成纤维细胞的病理性增殖，使胶原纤维分泌增加，并在心肌间质和血管周围沉积，使血管壁增厚、管腔狭窄，心肌细胞可被伸入的胶原分隔，细胞间连接的网络增粗变密，引起室壁顺应性下降，舒张、收缩功能均受损［15］。慢性心力衰竭患者心肌细胞存在严重的炎症反应，而在心衰的众多炎症递质中，IL-6 是最重要的物质之一，参与CHF 的病理、生理进程。

本研究对实验大鼠进行不同方法处理与治疗，与模型组比较，假耳针治疗组和耳针治疗组血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低（P＜0.05）；与假耳针治疗组比较，耳针治疗组血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低更明显（P＜0.05）。结果表明，耳针治疗能够抑制BNP、ET-1 受体表达和炎症因子IL-6 等多途径抑制心肌纤维化，保护心功能。但本研究也存在一定的局限性，由于纳入本实验的相关数据偏少，未能很好地控制影响因素，希望今后多进行相关的研究予以弥补。