肺炎支原体肺炎患儿血清可溶性细胞间黏附分子-1、CD40配体表达及其预后相关性研究

杨颖， 刘亚昆， 董天津

肺炎支原体肺炎是肺炎支原体感染引起的一种儿童肺部炎症性疾病，约占儿童获得性肺炎的一半，目前肺炎支原体肺炎发病率呈逐年增长趋势，且主要发生于儿童及年轻人[1]。肺炎支原体肺炎可引发各种肺部病变，严重影响儿童生命健康[2-3]，因此临床上急需特异性较高的生物学指标用于评估患者预后。可溶性细胞间黏附分子-1(soluble intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1)是ICAM-1的可溶形式，可定量测量，且有利于炎症反应的激活[4]。CD40配体(CD40 ligand，CD40L)主要由活化的CD4+、CD8+T淋巴细胞产生，可调节机体炎症反应、细胞和体液免疫应答过程[5]。然而目前关于sICAM-1、CD40L与肺炎支原体肺炎相关性的研究较少，因此，本研究通过探讨sICAM-1、CD40L在肺炎支原体肺炎患儿血清中的表达及其与预后的相关性，以期为改善患儿预后提供可靠的理论依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2019年2月至2020年5月本院收治的肺炎支原体肺炎患儿146例为研究对象，根据病情严重程度将患儿分为轻症组74例和重症组72例。轻症组中男32例，女42例；年龄3～8岁，平均年龄(5.76±2.38)岁。重症组中男34例，女38例；年龄3～8岁，平均年龄(5.72±2.96)岁。同期选取健康体检儿童78例为对照组，其中男30例，女48例；年龄3～9岁，平均年龄(5.82±2.89)岁。3组研究对象性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 诊断标准 参照《儿童肺炎支原体肺炎诊治专家共识(2015年版)》中儿童肺炎支原体肺炎的诊断标准[6]。重症肺炎支原体肺炎诊断标准：临床上正规大环内酯类抗生素治疗1周无效、胸部影像学表现(胸腔积液、大片和高密度实变阴影、肺不张或浓重等)及临床症状(呼吸困难、咳嗽)加重、持续高热不退、病情较严重或合并严重肺外并发症等情况[7]，未达到此标准的MPP患儿为轻症。

1.3 纳入标准 (1)符合儿童肺炎支原体肺炎的诊断标准；(2)年龄≤12岁；(3)1个月内未使用抗炎、免疫抑制剂、干扰素、血液制品治疗者；(4)病例资料齐全者。(5)经本院临床研究伦理委员会批准，符合伦理学标准，所有研究对象家属均签署知情同意书。

1.4 排除标准 (1)合并其他感染性疾病或慢性疾病者；(2)有支气管哮喘、免疫性疾病史者；(3)合并病毒性肺炎、肺结核、细菌性肺炎等其他肺部疾病者；(4)有糖皮质激素和β2受体激动剂过敏史者。

1.5 研究方法

1.5.1 样品采集及保存 采集健康体检儿童体检当天及肺炎支原体肺炎患儿入院第二天清晨空腹静脉血，3 000 r/min离心15 min后收集血清，置于-80 ℃保存待测。

1.5.2 肺炎支原体感染的血清学检测 采用酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试验诊断肺炎支原体感染。ELISA分别检测IgG和IgM，单次测定肺炎支原体-IgM阳性即可提示肺炎支原体的近期感染，急性期和恢复期肺炎支原体-IgM或IgG抗体滴度呈4倍及以上增高或降低时，同样可确诊肺炎支原体感染。

1.5.3 血清sICAM-1、CD40L、炎性因子水平检测 采用ELISA法检测3组儿童血清sICAM-1、CD40L、C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、降钙素原(procallcitonin，PCT)水平，检测步骤严格按照试剂盒说明书进行。sICAM-1 ELISA试剂盒购自武汉益普生物科技有限公司；CD40L ELISA试剂盒购自上海科敏生物科技有限公司；CRP ELISA试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司；PCT ELISA试剂盒购自南京赛泓瑞生物科技有限公司；人肺炎支原体抗体ELISA试剂盒购自上海晶抗生物工程有限公司。

1.5.4 肺功能指标检测 采用CHESTAC-8900型肺功能仪(北京西化仪科技有限公司)检测3组儿童的肺功能指标第一秒用力呼气量(forced expiratory volume in one second，FEV1)、用力肺活量(forced vital capacity，FVC)，并计算FEV1/FVC比值。

1.6 疗效判定标准 患儿体温正常、气喘及咳嗽症状缓解、肺部听诊湿啰音消失或减少、影像学胸片提示肺部病灶有吸收或消失，即认为治疗有效，归为预后良好组。患儿体温无明显下降、肺部体征及咳嗽等症状无变化或加重、影像学胸片提示肺部病灶无吸收或加重、患儿需转至上级医院治疗或死亡，即认为治疗无效，归为预后不良组[8]。

2 结果

2.1 3组血清sICAM-1、CD40L水平比较 重症组血清sICAM-1、CD40L水平高于轻症组和对照组，轻症组血清sICAM-1、CD40L水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组血清sICAM-1、CD40L水平比较

2.2 3组血清炎性因子及肺功能指标比较 重症组血清CRP、PCT水平高于轻症组和对照组，FEV1、FEV1/FVC低于轻症组和对照组；轻症组血清CRP、PCT水平高于对照组，FEV1、FEV1/FVC低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3组血清炎性因子及肺功能指标比较

2.3 肺炎支原体肺炎患儿血清sICAM-1、CD40L与炎性因子及肺功能指标相关性 Pearson法分析结果显示，肺炎支原体肺炎患儿血清sICAM-1、CD40L与CRP、PCT呈正相关，与FEV1、FEV1/FVC呈负相关(P<0.05)。见表3。

表3 肺炎支原体肺炎患儿血清sICAM-1、CD40L与炎性因子及肺功能指标相关性

2.4 肺炎支原体肺炎患儿不同预后血清sICAM-1、CD40L、炎性因子水平及肺功能指标比较 轻症与重症肺炎支原体肺炎患儿预后不良组血清sICAM-1、CD40L、CRP、PCT水平高于预后良好组，FEV1、FEV1/FVC水平低于预后良好组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 肺炎支原体肺炎患儿不同预后血清sICAM-1、CD40L、炎性因子水平及肺功能指标比较

2.5 影响肺炎支原体肺炎患儿预后的多因素Logistic回归分析 将肺炎支原体肺炎患儿是否发生不良预后作为因变量，以sICAM-1、CD40L、CRP、PCT、FEV1、FEV1/FVC为自变量进行Logistic回归分析，结果显示sICAM-1、CD40L是影响肺炎支原体肺炎患儿预后不良的独立危险因素(P<0.05)。见表5。

表5 影响肺炎支原体肺炎患儿预后的多因素Logistic回归分析

3 讨论

肺炎支原体肺炎的发病机制尚不明确，但炎症是促进其疾病恶化发展为恶性疾病的重要因素，且其发病机制可能与机体免疫损害也有重要联系[9-10]。肺炎支原体肺炎患儿若不及时治疗，可能会造成神经系统、心血管系统损害等多系统多器官并发症，引起患儿病情恶化，甚至会引起死亡等不良预后[11]。因此，合理、有效的早期评估肺炎支原体肺炎患儿预后，对于改善治疗效果、降低不良预后发生率有重要意义。

sICAM-1是一种单链跨膜糖蛋白和免疫球蛋白，在成纤维细胞、内皮细胞等细胞表面广泛表达[12]。sICAM-1能通过释放炎性介质参与炎症反应，且能黏附分子参与机体免疫应答，并可协同激活细胞免疫[13]。本研究结果显示，随着肺炎支原体肺炎发生及患儿病情加重，血清sICAM-1水平呈上升趋势，与杜莉等[14]研究结果一致。提示sICAM-1可能通过高表达参与疾病的发生、发展，推测sICAM-1表达上调后可介导炎症细胞在支气管腔中聚集，进而释放炎症介质，参与炎症反应，加速患者病情发展。且本研究中轻症与重症预后不良患儿血清sICAM-1水平高于预后良好患儿，且sICAM-1是影响肺炎支原体肺炎患儿预后不良的独立危险因素。提示sICAM-1不仅与病情进展有关，还与预后有密切联系，sICAM-1高表达不利于其预后。

CD40L又称肿瘤坏死因子相关激活蛋白，可与其相应受体CD40共同激活T细胞，调节T细胞与B细胞的相互作用，参与机体免疫应答[15]。CD40-CD40L同时调节多种炎症反应，促进炎症因子释放，诱发炎症疾病[16]。本研究结果中，重症肺炎支原体肺炎患儿血清CD40L水平高于轻症患儿和健康儿童，轻症患儿CD40L水平高于健康儿童，轻症与重症预后不良患儿CD40L水平高于预后良好患儿，且CD40L是影响肺炎支原体肺炎患儿预后不良的独立危险因素。与卞相丽等[17]研究结果基本一致，提示CD40L的高表达可能与肺炎支原体肺炎的发生、发展有密切联系，其可能的作用机制为：肺炎支原体感染后，CD40L与其相应受体CD40结合增加，参与T细胞与B细胞的调节，进而通过影响机体免疫应答参与肺炎支原体肺炎的发病，加速病情进展，进而影响患儿预后；或者通过促进炎症介质的释放，诱导肺炎支原体肺炎的发生。研究表明，CRP、PCT、FEV1、FEV1/FVC对于肺炎支原体肺炎病情、肺功能改变的判断有重要意义[18-19]。而本研究中随着患儿病情由轻症到重症，血清CRP、PCT水平升高，FEV1、FEV1/FVC降低。提示与轻症患儿相比，重症患儿肺部炎症加深、肺功能损害加重，临床中CRP、PCT、FEV1、FEV1/FVC指标的改变对肺炎支原体肺炎病情程度的判定具有重要意义。此外，预后不良患儿血清CRP、PCT水平高于预后良好患儿，FEV1、FEV1/FVC低于预后良好患儿。提示治疗无效的患儿更易发生混合感染，出现坏死性肺炎，可遗留肺结构和功能损害，使得炎症指标CRP、PCT水平升高，肺功能指标FEV1、FEV1/FVC降低。且本研究中血清sICAM-1、CD40L与CRP、PCT、FEV1、FEV1/FVC均有一定的相关性。进一步提示sICAM-1、CD40L与肺炎支原体肺炎病情密切联系，可能对预后评估有重要指导意义。

综上所述，血清sICAM-1、CD40L表达水平随肺炎支原体肺炎发生及患儿病情加重而呈上升趋势，且与炎症因子及肺功能指标均呈一定的相关性，并与患儿预后密切相关，表明sICAM-1、CD40L与疾病的发生、发展密切相关，可用于评估预后。但本研究中sICAM-1、CD40L在肺炎支原体肺炎中的病理、生理机制仍不十分明确，需进一步深入研究。且因收集患者数量有限，结果可能存在一定的局限性，有待进一步加大样本量进行验证。