外周血有核红细胞项目的性能验证及临床意义探讨

程瑜，先洁，黄佳佳，李月

1.重庆医科大学附属第二医院检验科，重庆 400010；2.重庆医科大学附属第一医院病理科，重庆 400016

有核红细胞(nucleated red blood cell,NRBC)是一种幼稚的骨髓红系细胞，健康成年人血液中无NRBC,但在新生儿或幼儿血液中可见[1-3]。一旦成年人外周血中出现NRBC，则多为病理状态[4-6]，常见于血液系统疾病，如溶血性贫血、急慢性白血病等。由于外周血NRBC具有细胞核，血液分析仪可能会将其当作白细胞，而干扰白细胞计数[7-8],所以检测NRBC以校正白细胞计数对保证血液分析结果的可靠性具有关键意义。大量研究报道NRBC增多与病死率升高和疾病预后不良密切相关，故检测NRBC亦有重要的临床作用[9-11]。

ISO15189 CNAS-CL02:2012《医学实验室质量和能力认可准则》要求实验室应在设备安装和使用前验证其性能并符合相关检验的要求[12]。为了解XN-3000对外周血NRBC计数的准确性和可靠性，该研究参考WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》等[13]指南文件对XN-3000检测的NRBC进行项目性能验证，并进一步分析临床患者样本的NRBC百分率与疾病（非血液系统疾病）转归的相关性。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

所用标本均来自重庆医科大学附属第二医院住院患者；仪器提示有核红细胞阳性，且入组对象为非血液系统疾病患者。

1.2 仪器与耗材

日本SYSMEX全自动血细胞分析仪XN-3000及原装配套的试剂、校准品和质控品，BASO瑞氏吉姆萨染液，Olymus光学显微镜。

1.3 方法

标本性能验证方案参考相关指南文件，判断标准由于没有国家标准、行业标准，研究采用厂家说明书有核红细胞计数的性能要求。

1.3.1 仪器检测NRBC血液采集后2 h内完成测定。仪器按计划进行校准，检测前按要求进行每日室内质控，在控后按标准规程检测样本。

1.3.2 携带污染率 将混匀的高浓度血液样本连续测定3次，其测定值分别为H1、H2、H3；再连续测定低浓度血液样本3次，其测定值分别为L1、L2、L3。按公式计算携带污染率（CR=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%）。

1.3.3 精密度 批内精密度：取含高、中、低3个水平NRBC%的新鲜全血,按常规检测方法连续重复检测11次,取后10次结果计算均值（Mean）、变异系数(Coefficient of Variation,CV)和标准差(Standard Deviation,SD)；批间精密度：取含高、中、低3个水平NRBC%的新鲜全血，每天检测1次，计算连续6 d的NRBC%数据的变异系数。

1.3.4 线性范围 选取1份高值NRBC%的全血样本（H），用仪器的稀释液分别按照0%、20%、40%、60%、80%、100%的比例进行混合配置，每个稀释度测定2次计算平均值，将实测值与理论值求偏差，计算Y=aX+b，验证线性范围。

1.3.5 NRBC百分率与病死率的相关性分析 选择在该院住院期间外周血NRBC＞0的患者进行回顾性研究。收集入组患者的基本信息、预后结果，分成80例死亡组与197例好转组，将两组的NRBC%进行分析。

1.3.6 NRBC百分率的趋势性分析 分析死亡组与好转组的多次检测结果，对死亡组与好转组的NRBC%作趋势性分析。

1.4 统计方法

应用SPSS 23.0统计学软件分析数据，计量资料用（±s）表示，比较采用t检验，协方差统计采用多次测定数据的趋势性分析；计数资料采用频数或率（%）表示，比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 携带污染率

SYSMEX XN-3000检测高、低浓度NRBC的携带污染率=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%=0.12%（厂家标准≤2.0%），故该检测系统携带污染率可接收，见表1。

2.2 精密度验证

SYSMEX XN-3000检测NRBC批内精密度（低、中、高值）变异系数分别为6.11%、3.35%、0.88%；批间精密度（低、中、高值）变异系数分别为5.34%、3.54%、1.43%。结果均符合厂家要求（厂家标准≤25%），故该检测系统精密度可接收，见表2、表3。

表3 XN-3000全自动血细胞分析仪NRBC批间精密度低、中、高值验证结果

2.3 线性范围验证

SYSMEX XN-3000检测NRBC的线性范围回归方程Y=0.997 9X+0.519 4，a值（斜率）为0.997 9，r2为0.997 6，结果均符合厂家要求（厂家标准：a值在1±0.05范围，r≥0.975或r2≥0.95），故检测项目线性区间可接受，见表4。

表4 XN-3000全自动血细胞分析仪线性范围验证结果

2.4 NRBC百分率与病死率的关系分析

将收集的80例死亡组与197例好转组的NRBC%（若有多次检测结果，取最后一次数据）进行t检验，分析两组的差异性，两组差异有统计学意义（t=-4.332，P＜0.05）。

2.5 NRBC百分率的趋势性分析

将收集的进行多次检测（2～6次不等）的17例死亡组与25例好转组的NRBC%进行协方差分析，分析两组趋势性变化，两组差异有统计学意义（F=6.326，P=0.022）。

3 讨论

全自动血液分析仪计数外周血NRBC是近年发展起来的一项新技术,已开始应用于临床,为临床实验室简便、快速准确地计数NRBC提供了重要依据。目前国内外开始使用SYSMEX XN-3000血液分析仪(简称XN-3000)对外周血中NRBC进行计数，其原理是利用荧光染色对细胞核进行染色，流式法测定侧向荧光强度(反映细胞核酸含量多少)和前向散射光强度(反映细胞体积大小)，将其与白细胞、红细胞以及血小板区别。

该次性能验证参照参考WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》，对SYSMEX XN-3000检测NRBC的携带污染率、精密度、线性范围等性能指标进行验证。但因新鲜全血标本中NRBC受储存条件、时间影响较大，所以实验中批间精密度只计算连续6 d的NRBC%数据的变异系数。由于NRBC的性能验证暂时没有国家标准、行业标准，该研究采用厂家说明书的标准。该研究结果显示,该项目的携带污染率为0.12%，≤2.0%的厂家标准，说明不同浓度间的交叉污染很小；批内、批间精密度的变异系数均≤25%，也达到厂家说明书的标准；回归曲线为Y=0.997 9X+0.519 4，r2=0.997 6均在1±0.05范围内，r≥0.975，说明线性良好，可报告范围满足临床要求。说明XN-3000具有精密度高、线性范围宽、简单快速等优点。

临床病例分析的结果显示，80例死亡组的NRBC%明显高于197例好转组的NRBC%，该结果与相关学者研究符合[14-15]。NRBC%趋势性分析发现，进行多次检测的死亡组，其NRBC%呈上升趋势，多次检测的好转组的NRBC%呈下升趋势或者先升后降的趋势。患者的NRBC%的持续升高与其预后不良有一定关系[16-19]。在整个病情进展过程中，NRBC%持续降低与病情好转的差异有统计学意义。

该课题的启动，也是源于重庆市物价局在2018年4月20日批准有核红细胞计数收费标准（CAAY1000）的启动。有核红细胞计数的正常参考范围为0，临床大部分样本的有核红细胞计数结果均为0，故不推荐每个样本的血常规均出具有核红细胞计数的结果，这无疑会增加患者的经济支出，且对大多数患者的临床诊断治疗与预后没有辅助意义。根据第3版《全国临床检验操作规程》，推荐NRBC%≥1%的结果报告给临床。实验室在收取该项目费用前，一定要做项目的性能验证和每日室内质控，期待不久的将来卫健委临检中心组织该项目的实验室间质量评价活动，完善正确度验证，以确保结果的准确性。