副波长对免疫比浊法检测尿微量清蛋白精密度的影响

钟富军 ，王丽 ，唐友东 ，曾妍

1.四川省成都市青羊区第九人民医院检验科，四川成都 610091；2.峨眉山市中医医院检验科，四川峨眉山 614200

尿微量清蛋白（mALB）是人体尿液中一种含量极少的白蛋白， 在正常人体中所含的尿微量清蛋白一般低于＜20 mg/L[1]。一旦超过20 mg/L，则表明人体肾脏功能出现异常。目前，随着临床对尿微量清蛋白的认识， 其已成为反映肾脏疾病及病变程度的重要指标[2]。 近年来，尿微量清蛋白已逐渐成为临床实验室的常规检测指标之一， 且全自动化分析仪的普及也最大限度地提高了工作效率和检测结果的精密度， 其中免疫透射比浊法因具有操作简便、 灵敏度高、精确度高、稳定性好、测定时间快及可应用于仪器自动分析等优点， 已成为尿微量清蛋白的常用检测方法[3]。由于目前市场上的全自动化分析仪越来越多，不同产商所生产的相关仪器、试剂也不尽相同，对副波长的要求也参差不齐， 甚至有些产商并未给出相关副波长参数和说明， 影响临床检测患者尿微量清蛋白的精密度[4]。 基于此，该研究收集2020 年1月—2021 年1 月在该院住院治疗的50 例患者的尿液标本， 并运用免疫比浊法检测其尿微量清蛋白精密度过程中加入副波长后对其产生的影响。 旨在提高免疫透射比浊法检测尿微量清蛋白的精密度，为患者临床诊治提供更加科学的依据。 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

50 例患者中男 28 例，女 22 例；年龄 30～71 岁，平均（50.05±5.34）岁。所有患者和或家属均知悉该研究内容，且自愿参与，并签署知情同意书。 该研究已通过医学伦理委员会批准进行。 纳入标准：高血压、糖尿病、 肾脏疾病者； 已有尿微量白蛋白增高的患者；临床资料完整者。 排除标准：合并有发热、血尿、尿路感染等患者；1 个月内有去甲肾上腺素注射史者；合并肿瘤、全身性疾病者；临床资料缺失者。

1.2 方法

尿微量清蛋白浓度检测：采用免疫比浊法检测，免疫透射比浊法尿微量清蛋白（mALB）检测试剂盒为深圳迈瑞生物医疗有限公司提供， 仪器为深圳迈瑞BS600 型自动生化分析仪（尿微量蛋白波长参数：主波长340 nm，副波长700 nm）。收集患者晨尿10 mL，以1 500 r/min 离心10 min，然后取其上清液分成4 份，2～8℃保存。检测其尿微量清蛋白，并分为A（10 mg/L）、B（100 mg/L）、C（200 mg/L）、D（400 mg/L）4 组，每个浓度重复检测5 次，连续5 d，共检测25 次，记录结果，取每个浓度检测结果的平均值，计算批内精密度和总精密度。

精密度测定： 参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）颁布的医学实验室精密度和准确度的验证指南（EP15-A2），在副波长加入前后，对4 个不同浓度标本均进行连续5 d 的检测，且每个标本每日检测5次，记录每次检测结果，取其平均数。在检测过程中，加入质控标本， 如若在同一时间段检测时有标本超出正常范围，则应停止检测，并检查其中问题，加以纠正，将此标本纳入下一次检测。

1.3 精密度验证判断

在获取尿微量清蛋白时， 记录厂商声明精密度界限， 以此作为检测标准， 然后根据精密度测定方法， 获取不同浓度标本在副波长加入前后的批内精密度和总精密度，并与厂商声明精密度界限对比。若低于厂商声明精密度界限，则表示验证通过，反之表示不合格， 需进一步查找原因， 同时与厂商取得联系，共同纠正。

1.4 统计方法

将研究获得数据录入Excel 数据库，运用SPSS 19.0 统计学软件分析数据，计数资料采用频数或率（%）表示。

2 结果

根据检验结果发现， 产商声明精密度界限为5%，在副波长添加前，4 组患者尿微量清蛋白精密度和总精密度验证结果均高于5%； 而在副波长添加后，4 组患者尿微量清蛋白精密度和总精密度验证结果中，A 组、B 组及C 组批内精密度验证结果亦高于5%， 但C 组总精密度和D 组验证结果则低于5%。 见表 1 、表 2。

表1 副波长添加前患者尿微量清蛋白精密度验证结果

表2 副波长添加后患者尿微量清蛋白精密度验证结果

3 讨论

白蛋白是主要的血浆蛋白， 其作为结合和转运蛋白，结合脂肪酸、胆红素、激素等并运输这些物质到全身各部位完成其重要生理功能； 其次白蛋白还具有维持血浆胶体渗透压平衡的作用[5-6]。 正常肾小球可滤过低分子量的蛋白质， 经近端小管重吸收，24 h 的白蛋白排出量低于30 mg, 尿蛋白定性为阴性； 当尿白蛋白量超过300 mg/24 h, 尿蛋白定性阳性。 尿微量白蛋白是指24 h 尿液中的白蛋白为30～300 mg。 正常人24 h 内尿白蛋白排出量很少，约为30 mg，即排出量为 20.8 μg/min。 白蛋白是尿蛋白的主要成分，约占40%～50%[7]。尿中白蛋白排泄量与肾小球滤过量成正比， 尿白蛋白排出过多主要反映肾小球损伤造成的滤过增加。 而尿微量白蛋白尿是指常规方法无法检出，但是高于正常的白蛋白尿。尿微量白蛋白的增加是肾损害的早期指标， 其增加对各种肾脏病及高血压、 糖尿病的早期肾损害的诊断有重要价值，是临床诊断的标准及治疗的靶目标[8]。 以往对于尿微量白蛋白的检测多为以患者24 h 内的尿液标本进行检验，但其实际效果并不理想，且因诸多因素干扰导致检测结果并不准确[9]。 而近年来，以检测清晨第一次尿或任意一次尿液中白蛋白与肌酐比值代替24 h 尿蛋白定量，可避免尿量变化对结果的影响[10]。 免疫比浊法是目前常用的用于测定抗原-抗体结合的动态检测方法， 其原理为， 在稀释系统中，抗原-抗体结合反应，稀释成一定比例后形成复合物， 再通过聚乙二醇等聚合物作用， 从液相中析出，形成微粒，使其与反应液混浊，并逐渐沉积于反应液中。 最后检测复合物中抗原含量， 若抗原量增加， 复合物量也随之增加， 反应液混浊度也随之增加。 检测反应液浑浊度，与标准样本比较，即可计算出样品中抗原含量[11]。 在尿微量清蛋白检测中，主要是通过尿液中的mALB 与试剂中特异性的mALB 抗体结合，形成抗原抗体复合物而产生浊度，其浊度与mALB 的含量成正比. 通过测定特定波长的吸光度，参照校准曲线计算出mALB 的浓度[12]。

该研究结果显示，以产商声明精密度界限（5%）作对比，在副波长添加前，4 组患者尿微量清蛋白精密度和总精密度验证结果均高于5%；而在副波长添加后，4 组患者尿微量清蛋白精密度和总精密度验证结果中，A 组、B 组及C 组批内精密度验证结果亦高于 5%，但 C 组总精密度（4.54）和 D 组（3.05）验证结果则低于5%。 在实验过程中，副波长的添加能够大大减少各种因素对实验结果的干扰，例如噪声、标本溶血、混浊等，并可减少散光影响[13]。 之后通过生化分析仪，对整个检测过程进行全程监测，记录副波长加入后的标本反应情况，及在不同浓度标本中发热波长、吸光度值。最后记录相关的数据，从而了解不同浓度标本在副波长加入后的精密度和总精密度[14]。 从研究结果得知，在未加入副波长前，产商声明精密度界限值均显著低于各个浓度标本的精密度和总精密度。 加入副波长后，浓度为200 mg/L 的尿微量清蛋白总精密度及浓度为400 mg/L 的尿微量清蛋白批内精密度和总精密度的验证结果却较产商声明精密度界限更低。 说明添加副波长后相关的干扰因素得以消除或降低，检测值的稳定性得以明显改善。 但从结果中也发现，加入副波长后，浓度为10 mg/L、100 mg/L 的尿微量清蛋白批内精密度和总精密度， 及浓度为200 mg/L 的尿微量清蛋白批内精密度的验证结果仍然高于产商声明精密度界限。其原因可能是在低浓度区间， 检测值的稳定性较差[15]。从研究结果中可以看出， 未加入副波长前和加入副波长后相比，随着尿微量清蛋白浓度的增加，检验精密度值越趋于产商声明精密度界限，尤其是浓度在＞200 mg/L 时。 说明副波长对浓度越高的尿微量清蛋白标本所产生的影响更大， 而对浓度较低的尿微量清蛋白标本所产生的影响较小。

目前， 国内外对尿微量清蛋白的具体精密度界限尚无统一定论，而在卫生行业也无相应的标准，同时不同厂商对此精密度的说明也不一致， 甚至没有具体说明， 这就导致对于尿微量清蛋白检测的精密度界限存在一定争议。 但在我国，有相关实验提出，尿微量清蛋白精密度误差应在总误差的30%以下，并提出总精密度应低于10%，批内精密度低于7.5%[16]。 参照此标准，结合该研究结果发现，副波长加入前，与检验精密度值相比，C 组（200 mg/L）尿微量清蛋白批内精密度、D 组（400 mg）尿微量清蛋白批内精密度和总精密度检验结果均更低， 而加入副波长后，浓度为 100 mg/L（A 组）、200 mg/L（B 组）、400 mg/L（D 组）的尿微量清蛋白批内精密度和总精密度均低于检验精密度值。 虽然部分标本精密度高于产商声明精密度界限， 但却没有超出相关检验室的精密度界限[17]。 而对于高于相关检验室精密度界限的标本，其原因可能是由于仪器设备所致，也可能是由于标本的问题对检测结果造成的误差， 也不排除部分试剂精密度性能指标存在虚标的情况[8,18]。

综上所述， 免疫透射比浊法检测尿微量清蛋白精密度过程中加入副波长， 可显著提高检验结果的精密度，对患者的临床诊断、治疗及预后均有重要意义。但在临床检验工作中，不能过分依赖仪器的检测结果，当对结果产生怀疑时应结合病史、临床其他检查结果综合起来进行判断。