不同储存时间血液制备洗涤红细胞效果分析

黄春柳

（惠州市中心血站，广东 惠州 516003）

临床使用的红细胞制品中，较常用的是洗涤红细胞，即使用等渗溶液洗涤悬浮红细胞或全血，经过3～6次洗涤，将部分非红细胞及大部分血浆成分有效去除后制备的血液制品。洗涤红细胞主要用于肾功能不全、血浆蛋白过敏以及有非溶血性发热反应患者的输血治疗，所以洗涤红细胞质量会对临床用血安全造成严重影响[1]。有研究证实，红细胞离体后，随着储存时间的不断延长，会出现一定的储存损伤[2]，但目前《全血及成分血质量要求》[3]中，仅对用于制备洗涤红细胞的全血保存期做出明确规定，对制备洗涤红细胞的血液储存时间没有要求。基于此，本研究就血液储存时间对洗涤红细胞制备效果造成的影响做如下分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究所用血液样本均选自2018年1—11月惠州市中心血站采用ACD-B方保养液采集的全血制备的400 mL悬浮红细胞血液样本，并依据保存时间进行分组。将保存时间＜7 d的样本设为甲组，7～14 d的设为乙组，15～21 d的设为丙组，在每组样本中各随机选取35例。悬浮红细胞袋无破损、渗流，血液外观无异常，且均在有效期内。

1.2 方法

研究所用的材料与仪器：一次性使用塑料血袋（北京安通医疗器械有限公司），四联袋0.9%氯化钠溶液（兰州伟慈制药有限责任公司），血浆游离血红蛋白试剂盒、脑脊液与尿蛋白测定试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供。

iChem-530全自动生化分析仪（深圳市库贝尔生物科技有限公司）、GF45全自动血液成分分离机（辽阳友联制药机械有限公司）、FA2204B分析天平（郑州万博仪器设备有限公司）、DT5-6离心机（北京时代北利离心机有限公司）、HH-S3三用恒温水浴箱（上海梅香仪器有限公司）、LBY-BX激光衍射红细胞变形仪（北京普利生仪器有限公司）。

洗涤红细胞制备：将洗涤溶液联袋分别标记为1、2、3、4号，将1、2号溶液挤进3、4号袋中，排空1、2号袋备用，并使用无菌接合机将洗涤溶液联袋与待洗涤红细胞悬液袋相连，将100 mL洗涤溶液移至红细胞袋内，夹闭导管，摇匀后，以3 500 r/min的速度离心5 min，之后置分浆夹内，提取上清液后移至空袋，再次将150 mL洗涤溶液加入红细胞袋中，使其与红细胞组织充分融合，夹闭导管。经过3次离心、洗涤后，加入适量0.9%氯化钠溶液，充分摇匀，经热合断离后装入专用配血管，留样检测。每组样本均在洗涤1 h后，对其红细胞回收率，白细胞及血浆蛋白清除率，洗涤红细胞容量，血红蛋白、上清蛋白质含量，溶血率，洗涤前后红细胞变形指数进行检测。

血红蛋白与白细胞比容由全自动血细胞计数仪进行检测，与洗涤后血液重量进行对比，计算血容量；洗涤红细胞容量=（洗涤后重量-空袋重量）/血液比重；红细胞回收率=洗涤后红细胞浓度/洗涤前红细胞浓度×100%；血浆蛋白清除率=（{1-血细胞比容）×洗涤前血浆蛋白含量}×100%；白细胞清除率=（{1-血细胞比容）×洗涤前白细胞含量}×100%；溶血率=（{1-血细胞比容）×血浆}/总血红蛋白浓度×100%；上清蛋白质含量=上清蛋白质浓度×容量×10-5；血红蛋白含量=血红蛋白浓度（g/L）×容量×103。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 3组洗涤红细胞回收率、溶血率、血浆蛋白及白细胞清除率比较

3组洗涤红细胞回收率、血浆蛋白清除率比较差异无统计学意义（P＞0.05）；与丙组相比，甲、乙组白细胞清除率较高、溶血率较低，且差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 3组洗涤红细胞回收率、溶血率、血浆蛋白及白细胞清除率比较（±s，%）

表1 3组洗涤红细胞回收率、溶血率、血浆蛋白及白细胞清除率比较（±s，%）

组别 血浆蛋白清除率99.12±0.53 99.08±0.87 99.01±0.46 0.261 0.771甲组乙组丙组F值P值35 35 35 n 红细胞回收率83.06±3.12 82.97±5.26 84.11±4.73 0.706 0.496白细胞清除率89.41±2.87 88.02±3.46 86.54±3.12 7.223 0.001溶血率0.11±0.05 0.12±0.07 0.18±0.10 8.649 0.001

2.2 3组洗涤红细胞容量、血红蛋白及上清蛋白质含量比较

比较3组洗涤红细胞容量、血红蛋白及上清蛋白质含量，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 3组洗涤红细胞容量、血红蛋白及上清蛋白质含量比较（±s）

表2 3组洗涤红细胞容量、血红蛋白及上清蛋白质含量比较（±s）

组别 洗涤红细胞容量（mL）249.83±8.32 248.72±9.05 248.91±8.14 0.170 0.844 n甲组乙组丙组F值P值35 35 35血红蛋白含量（g）49.04±7.87 49.00±7.96 48.54±7.53 0.045 0.956上清蛋白质含量（g）0.25±0.17 0.27±0.16 0.33±0.15 2.364 0.099

2.3 3组洗涤前后红细胞变形指数比较

甲、乙组洗涤后红细胞变形指数与洗涤前相比差异无统计学意义（P＞0.05）；丙组洗涤后红细胞变形指数低于洗涤前，差异有统计学意义（P＜0.05）；3组洗涤前红细胞变形指数比较差异无统计学意义（P＞0.05），而洗涤后红细胞变形指数比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 3组洗涤前后红细胞变形指数比较（±s）

表3 3组洗涤前后红细胞变形指数比较（±s）

时间n F值P值洗涤前洗涤后35 35 2.100 19.091 0.128 0.001 t值P值甲组0.42±0.03 0.41±0.02 1.641 0.105乙组0.40±0.04 0.39±0.03 1.183 0.241丙组0.41±0.05 0.37±0.03 4.058 0.001

3 讨论

输血是临床经常使用的治疗方案，而洗涤红细胞是常用的红细胞制品，在治疗因血浆蛋白、非溶血性发热反应引起的过敏反应中发挥重要作用[4]。使用0.9%氯化钠溶液洗涤悬浮红细胞，可清除大部分白细胞、血小板以及血浆成分，应用于有特殊输血要求的患者，避免出现过敏、非溶血性高热等，保障临床输血安全。新国标对成品洗涤红细胞的上清蛋白质及血红蛋白含量做出明确规定，并增加了溶血率低于0.8%的要求，但没有规定血液储存时间。有研究证实，用于制备洗涤红细胞的血液在保存过程中，受多因素影响会使红细胞出现不同程度的保存受损[5-6]，并且产生潜在有害物质，对血液质量造成影响，进而给临床用血安全带来隐患[7]。

3.1 储存时间对洗涤红细胞制备质量的影响

本研究结果显示，甲、乙组白细胞清除率高于丙组，溶血率低于丙组（P＜0.05），而3组血浆蛋白清除率、洗涤红细胞回收率、洗涤红细胞容量、血红蛋白及上清蛋白质含量无明显差异（P＞0.05）。由此表明，原料血储存时间越长，制备的洗涤红细胞溶血率越高，白细胞清除率越低。分析原因可能是红细胞脆性会随着储存时间的延长而升高，在制备过程中，因机械碰撞而遭到破坏，并且红细胞渗透压在去除保养液以及原血浆后，也容易发生改变，进而出现溶血现象[8]。血液在储存过程中，红细胞不可避免地会出现储存损伤，产生棘形红细胞，使红细胞囊泡化，寿命相应缩短，影响其运输与释放氧的能力，影响制备质量[9]。相关研究表明，储存时间在10 d内的红细胞结构较完整，且生理功能正常，细胞膜承受离心压力的能力较强，不易在离心过程中受到损伤。为了保证洗涤红细胞质量，应使用14 d的库存血制备洗涤红细胞，同时在制备过程中，严格按照要求操作，重视操作的规范性，保证制备的洗涤红细胞与国家标准相符。

3.2 储存时间对洗涤红细胞变形指数的影响

本研究结果显示，甲、乙组洗涤前红细胞变形指数与洗涤后相比无显著性差异（P＞0.05），丙组洗涤后红细胞变形指数低于洗涤前（P＜0.05）；3组洗涤前红细胞变形指数无显著性差异（P＞0.05），而洗涤后红细胞变形指数差异有统计学意义（P＜0.05），表明红细胞变形能力会随原料血储存时间延长而逐渐降低。可能是因为红细胞具有变形性，库存血的流变特征会因储存时间延长而受到影响，尤其是红细胞的聚集性以及变形性，所以导致红细胞变形性降低，进而影响其运氧能力，降低洗涤红细胞制备质量。而红细胞变形性的降低，也会导致洗涤红细胞在经过毛细血管时遭到破坏，降低输血治疗效果，甚至对患者的凝血机能造成影响[10]。

红细胞变形程度对红细胞制品质量产生影响，可能与血液储存时间延长、制备过程中红细胞受损有关。为了保障临床治疗效果，应保证制备洗涤红细胞的库存血储存时间在14 d内。

综上所述，原料血储存时间可影响洗涤红细胞制备质量，随着储存时间的延长，溶血率升高，红细胞变形能力降低，建议使用储存时间在14 d内的血液制备洗涤红细胞，以保障临床输血安全与治疗效果。