育龄妇女不同同型半胱氨酸水平及叶酸服用对预防胎儿出生缺陷的影响

梁文

(西安市北车医院妇产科，陕西 西安 710086)

出生缺陷通常是指胎儿在子宫内部出现结构或者染色体异常现象，其发生率约占活产儿的3%左右，不仅影响胎儿的正常生长发育，同时降低我国人口的出生质量。而同型半胱氨酸(HCY)属于蛋氨酸与半胱氨酸代谢期间的中间产物，其水平在妊娠结局、血管内皮损伤、胎儿出生缺陷上具有重要意义[1]。而叶酸能够为HCY的代谢提供甲基，并成为治疗同型半胱氨酸血症的重要药物。目前临床已有文献[2]证实，血清HCY水平与叶酸代谢相关基因多态性息息相关，且不同基因型患者的HCY水平存在较大差异。另有报道[3]指出，妊娠前3个月，积极补充叶酸可有效改善孕妇机体HCY水平，从而防止胎儿出生缺陷的出现。但临床缺少关于HCY水平与叶酸服用的相关性报道，由此本文展开实验，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2017年1月至2020年1月我院纳入的92例孕妇，年龄23～36岁，平均(30.59±1.41)岁；体质量20～27 kg/m2，平均(24.23±1.05)kg/m2。纳入标准[4]：均属于健康孕妇，并在我院进行常规产检；无产科并发症或者不良孕产史；基础信息完整，中途未退出；孕妇与家属知晓同意。剔除标准：实验前使用影响维生素B12或者叶酸吸收的药物；具备恶性肿瘤、肝肾疾病、自身免疫性疾病、严重并发症者；存在妊娠神经管缺陷。

1.2方法 收集所有孕妇的外周血标本，通过离心抽取中间单个核细胞层，转移至存放红细胞裂解液的试管内，依据说明书要求检测MTHFRA1298C、MTHFRC677T、MTRRA66G基因多态性，并依照每个基因位点的具体状况，判断叶酸的服用能力，结果0级无风险，叶酸使用能力正常；1～2级低风险；3～5级中等风险；6～8级高风险。将其中0～2级孕妇纳入甲组，提供400 μg/d的叶酸；而3～8级纳入乙组，提供800 μg/d的叶酸，期间可依照HCY水平来调整剂量，给药至孕3个月。抽取所有孕妇的血液样品，12 000 r/min离心15 min，并保存上层清液至EP管，加入等体积的异丙醇，摇晃均匀后冷冻保存10 min；将样品以12 000 r/min离心15 min，去除上层清液，管内白色沉淀物即为DNA，选择75%酒精对沉淀物进行洗涤；将样品以12 000 r/min离心10 min，去除上层清液，管内白色沉淀物即为RNA，室温放置5 min；选择30 μL的DEPC水溶解沉淀物，并选择超微量分光光度技术对DNA含量进行检测，选择2 μL缓冲液与DNA混合物，放入1.5%琼脂糖凝胶，调整电压120 V，执行电泳操作，时间150 min，使凝胶在紫外凝胶分析仪中曝光，检查RNA条带，评价RNA降解情况，选择荧光实时定量PCR仪器，对MTHFRA1298C、MTHFRC677T、MTRRA66G的DNA水平进行检测，遵照连接酶检测反应实施分型，并选择相应软件实施基因分型。叶酸服用前、孕早期、孕中期，均收集孕妇的静脉血，3 000 r/min离心10 min，保留上层清液，置于-80℃条件下待检，最后按照酶联免疫法及试剂盒说明书要求检测血清HCY。

1.3观察指标 分析所有孕妇的基因分型结果，并对比不同基因型孕妇的HCY水平，记录叶酸服用前、孕早期、中期的HCY水平，并记录两组胎儿出生缺陷的发生率。

2 结 果

2.1所有孕妇的不同基因的分型 经检查发现，MTHFRA1298C基因型是AA 47例(51.09%)、CC 12例(13.04%)、AC 33例(35.87%)，MTHFRC677T是CC 7例(7.61%)、TT 51例(55.43%)、CT 34例(36.96%)，MTRRA66G是AA 52例(56.52%)、GG 35例(38.04%)、AG 5例(5.43%)。

2.2不同基因分型的HCY水平比较 不同基因分型上的HCY水平差异显著(P<0.05)。见表1。

表1 不同基因分型的HCY水平比较

2.3两组孕妇不同时间点的HCY水平比较 甲组在叶酸服用前的HCY上与乙组对比差异显著(t=10.875，P<0.05)，但两组孕早期、中期的HCY水平相比无差异(t=0.503、0.441，P>0.05)。见表2。

表2 两组不同时间点的HCY水平比较

2.4两组胎儿出生缺陷的发生率比较 甲组无先天性心脏病、神经管畸形、唐氏综合征、四肢畸形、唇腭裂等缺陷发生，乙组先天性心脏病、神经管畸形、唐氏综合征、四肢畸形、唇腭裂各有1例，两组胎儿出生缺陷的发生率比较差异无统计学意义(χ2=3.033，P>0.05)。

3 讨 论

临床研究[5]指出，随着HCY水平的不断增加，胎儿出生缺陷的风险随之升高，其中HCY存在一定毒性能力，当机体中HCY水平升高后，可直接牵连血管内皮细胞受损，并对血小板进行刺激，使其出现增殖现象，并形成血栓，可造成胎盘栓塞，并切断机体吸收营养物质，同时还可阻碍代谢物质排出，对胎儿新陈代谢造成极大影响。另外，HCY水平升高后，可妨碍S腺苷蛋氨酸产生，造成DNA甲基化，使染色体分裂，进一步增加胎儿出生缺陷的发生率，受到临床重点关注[6]。临床经研究[7]发现孕妇机体中HCY水平容易受到叶酸服用度的影响，而叶酸服用度与叶酸代谢相关基因关键酶调控存在关联，其中叶酸代谢相关基因关键酶以MTHFRA1298C、MTHFRC677T、MTRRA66G较为常见，一旦上述三类出现基因多态性后，极易减低孕妇机体中酶的活性能力，从而使大量HCY堆积在血液，进而提升同型半胱氨酸血症发生的风险。虽然临床已有文献[8]证明，妊娠前、孕后3个月服用叶酸至关重要，能够减低胎儿出生缺陷的发生率，但不同地区孕妇在服用叶酸预防胎儿出生缺陷上存在一定差异。

本文结果显示，MTHFRA1298C基因型是AA、CC、AC，MTHFRC677T是CC、TT、CT，MTRRA66G是AA、GG、AG。甲组在叶酸服用前的HCY上与乙组对比差异显著(P<0.05)，但两组孕早期、中期的HCY水平相比无差异(P>0.05)。两组在各类胎儿出生缺陷的发生率上相比无差异(P>0.05)，证实叶酸代谢关键酶的基因型可直接影响HCY水平，同时在胎儿出生缺陷上具有重要意义。曾有报道[9]显示，同型半胱氨酸血症经过叶酸治疗后，虽然能够改善其HCY水平，但可能提升排卵次数，增加多胎妊娠的几率，加上大量服用叶酸后，可造成孕妇脂类代谢异常，并造成血糖水平波动，导致心血管疾病产生。本文经过研究，使孕妇经过个体化用药指导，来调整叶酸的使用度，可有效保障孕妇安全，同时预防胎儿出生缺陷的发生率，值得推广。

综上所述，育龄妇女的HCY水平与其叶酸代谢关键酶的基因多态性存在一定关联，能够帮助不同基因型孕妇的叶酸服用情况提供指导价值，同时可减低胎儿出生缺陷的发生率。