肝细胞肝癌患者组织中血管内皮生长因子表达与临床病理特征及预后的关系

郑硕

肝细胞肝癌（HCC）是原发性肝癌中最常见的病理类型，也是一种典型的血管富集的实体肿瘤，其发生、生长、浸润及转移等生物学行为均依赖于肿瘤新生血管形成［1-2］。肿瘤间质新生血管不仅能够为肿瘤生长提供营养保证，还能为肿瘤转移提供通道支持，是引起HCC 患者高复发率及高转移率的重要原因，也是导致预后不良的独立危险因素［3］。近年来，肝癌内血管生成与肝癌的相关性研究是临床研究的热点课题，国内外诸多研究证实血管内皮生长因子（VEGF）在肝癌发生、发展、转移及复发过程中扮演着重要角色，不仅会促进内皮细胞增殖而诱导肿瘤血管分化及形成，是参与血管生发和成熟的最重要因素之一，同时还能对肿瘤宿主局部的免疫应答产生不良影响，进而使肿瘤细胞能够逃避宿主免疫系统的攻击，从而对HCC 发病、发展起关键作用。本研究旨在探讨HCC 患者组织中VEGF 表达与临床病理特征及预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取福州市二医院2016 年1 月—2018 年1月收治的HCC 患者72 例，符合HCC 的诊断标准［4］，均实施肝癌根治性切除术治疗；术后病理证实为HCC，入院前均未进行化疗、放疗等干预措施，患者知情同意本研究。72 例HCC 患者中男58 例，女14 例；年龄：<60 岁47 例，≥60岁25 例；肿瘤直径：<5 cm 50 例，≥5 cm 22 例；肿瘤包膜：完整29 例，不完整43 例；分化程度：低分化18 例，中分化46 例，高分化8 例；TNM 分期：Ⅰ+Ⅱ期26 例，Ⅲ+Ⅳ期36 例；肝功能分级：A 级42 例，B 级30 例；甲胎蛋白（AFP）：<400 μg/L 41 例，≥400 μg/L 31 例；肿瘤结节数量单个63 例，多个9 例；饮酒史32 例；淋巴结转移11 例；乙型肝炎61 例；门静脉癌栓12 例。

1.2 方法

1.2.1 资料收集 采用自制的问卷调查表收集患者临床资料和病理学资料，包括性别（男、女）、年龄（<60 岁、≥60岁）、饮酒史（有、无）、乙型肝炎（是、否）、肿瘤直径（<5 cm、≥5 cm）、肿瘤包膜（有、无）、分化程度（低分化、中分化、高分化）、TNM 分期（Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ+Ⅳ期）、肝功能分级（A 级、B 级）、淋巴结转移（是、否）、AFP 水平（<400 μg/L、≥400 μg/L）、门静脉癌栓（有、无）、肿瘤结节数量（单个、多个）。

1.2.2 VEGF 检测方法 术后收集肝癌组织及癌旁组织（距肝癌组织2～5 cm），使用石蜡包埋，连续切片（厚4 μm），按试剂盒说明书进行免疫组化染色后，使用Nikon YS100 光学显微镜在高倍镜（×400）下观察染色情况，每张切片选取5 个高倍视野进行观察，根据阳性细胞百分比及阳性染色强度分别进行评分，阳性细胞<5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、>75%分别计分为0、1、2、3、4 分，阳性染色强度无着色、黄色、棕黄色、棕褐色分别计分为0、1、2、3 分，二者得分乘积为0 分为阴性，1～4 分为弱阳性（+），5～8分为中度阳性（++），9～12 分为强阳性（+++），计算阳性率。

1.2.3 随访方法 所有患者术后通过电话、门诊、住院复查等方式随访至少24 个月，随访至2020 年2 月29 日，观察患者复发情况，以影像学检查和血清AFP 进行评判，如无法确诊者可进一步行肝动脉造影或穿刺活检以确诊，记录患者生存情况。

1.3 观察指标（1）比较癌组织及癌旁组织标本中VEGF 表达阳性率。（2）采用自制的调查表收集患者临床和病理学资料，采用单因素分析及多因素Logistical 回归分析VEGF 表达与临床病理特征的关系。（3）比较VEGF 表达阳性和阴性患者1 年生存率、2 年生存率及中位生存期。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据处理，计数资料以相对数表示，采用χ2检验。采用单因素χ2分析及多因素Logistical 回归分析VEGF 表达与临床病理特征及预后的关系，以P<0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织及癌旁组织标本中VEGF 表达情况 HCC 患者肝癌组织VEGF 表达阳性率为63.89%（46/72），高于癌旁组织12.50%（9/72），差异有统计学意义（χ2=40.273，P<0.01）。

2.2 HCC 患者癌组织中VEGF 表达与临床病理特征的关系经单因素分析显示，是否存在乙型肝炎、淋巴结转移、门静脉癌栓患者及不同肿瘤直径、病理分化程度、TNM 分期、肝功能分级、AFP 水平、肿瘤结节数量患者VEGF 表达阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。经多因素Logistical 回归分析显示，乙型肝炎、肿瘤直径、病理分化程度、TNM 分期、肝功能分级、淋巴结转移、AFP 水平、门静脉癌栓、肿瘤结节数量是影响VEGF表达的危险因素（P<0.05）。见表2。

2.3 HCC 患者癌组织中VEGF 表达与预后的关系 VEGF阳性和阴性表达患者1 年生存率分别为67.39%（31/46）和88.46%（23/26）、2 年生存率为21.74%（10/46）和61.54%（16/26）。VEGF 阳性和阴性表达患者1 年生存率、2 年生存率比较，差异有统计学意义（χ2=3.933、11.405，P=0.047、0000）。VEGF 阳性和阴性表达患者中位生存期分别为18.4个月和30.4 个月。

表1 HCC 患者癌组织中VEGF 表达与临床病理特征的关系

表2 HCC 患者癌组织中VEGF 表达影响因素的多因素Logistical 回归分析

3 讨论

HCC 发生、进展、预后与新生血管形成密切相关，丰富的肿瘤血管能够为肿瘤细胞的生长提供足够的营养支持，为浸润播散及转移提供条件，其中VEGF 是调节肿瘤血管生成的重要因子之一，在多种肿瘤发生、发展过程中扮演重要角色。本研究结果显示，HCC 患者肝癌组织VEGF 表达阳性率高于癌旁组织，表明VEGF 过度表达促进了HCC 中的血管生发，导致了HCC 的发生，但在正常肝组织中VEGF 的表达水平不能促进新生血管形成，与文献［5］研究相符。

本研究结果显示，经单因素分析及多因素Logistical 回归分析显示，乙型肝炎、肿瘤直径、病理分化程度、TNM 分期、肝功能分级、淋巴结转移、AFP 水平、门静脉癌栓、肿瘤结节数量是影响VEGF 表达的危险因素，与文献［6-8］研究相符。研究显示，乙型肝炎感染的HCC 患者肝癌组织VEGF 表达水平高于非乙型肝炎感染患者，提示乙型肝炎感染促进VEGF在肝癌组织中的表达的上调［9］。HCC 患者不良病理分化，TNM 分期越高，肿瘤直径越大，肿瘤结节数量越多，则对氧及血供的需求越高，加重癌细胞的缺氧状态，而缺氧是VEGF最强诱导剂，进而上调肿瘤内VEGF 表达，促进肿瘤内的新生血管形成，促进肝癌的增长、浸润，且更易发生远处转移，为肿瘤的侵袭及转移奠定了基础。因而，发生淋巴结转移的HCC 患者肝癌组织VEGF 表达水平高于非淋巴结转移患者，存在门静脉癌栓HCC 患者肝癌组织VEGF 表达水平高于无门静脉癌栓HCC 患者，也表明了VEGF 与肝癌的侵袭转移有关。肝功能Child-Pugh 分级、AFP 水平与肝癌的恶性程度呈正相关，AFP 水平越高，肝功能Child-Pugh 分级越高，则肝癌的恶性程度越高，则VEGF 表达增加越明显。

本研究结果还显示，VEGF 阳性和阴性表达1 年生存率为67.39%和88.46%、2 年生存率为21.74%和61.54%，中位生存期分别为18.4 个月和30.4 个月，提示肝癌组织VEGF 表达水平会对肝癌患者术后预后产生一定的影响，与肝癌术后预后存在相关性，可作为预示HCC 患者术后预后的分子指标，与文献［10-11］研究相符。

综上所述，HCC 患者组织中VEGF 呈高表达，与HCC患者是否合并肝炎、肿瘤直径大小、组织分化程度、TNM 分期、是否出现门静脉癌栓、淋巴结转移、AFP 水平等生物学行为密切相关，并对HCC 的预后判断具有重要价值，可作为HCC抗血管靶向治疗的一个新靶点。