冷诱导RNA结合蛋白与冠心病病人冠状动脉狭窄程度的相关性

潘颖，戴力

作者单位：灵宝市第一人民医院心内科，河南 三门峡472500

冠状动脉粥样硬化性心脏病，即冠心病，是最常见的心脏疾病，其发病率稳步上升，是现代社会导致死亡的主要原因。冠状动脉（冠脉）造影是诊断冠心病的金标准，但是由于存在创伤较大、并发症较多、射线防护困难、费用高昂等缺陷，仍需要一些更简单有效的生物标志物来预测。冷诱导RNA结 合 蛋 白（cold-inducible RNA-binding protein，CIRP）是一种保守的RNA 结合蛋白，参与多种mRNA 的转录后调控，可在低温、低氧、化学物质等应激环境中诱导表达。近年研究发现，CIRP 可促进炎性因子的释放，在腹主动脉瘤、结肠炎等疾病中发挥重要的病理作用。CIRP 的促炎效应可能也参与冠心病的发生发展，与冠脉狭窄程度有关，但是国内外尚无报道。因此，本研究旨在探讨血清中CIRP 水平与冠心病病人冠状动脉狭窄程度的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年3月至2019 年12 月灵宝市第一人民医院冠脉造影确诊为冠心病196 例。参照文献报道，根据Gensini评分分为3组，即轻度组（＜18分）、中度组（18 ～41分）、重度组（≥41分），分别为52、41、103 例。排除标准：（1）心脏瓣膜病、心肌病、肺源性心脏病等其他心脏疾病；（2）既往行经皮冠状动脉介入治疗术或冠状动脉旁路移植术；（3）妊娠或哺乳期妇女；（4）严重的肝肾功能障碍；（5）合并动脉瘤、甲状腺或肾上腺功能异常、血液系统疾病、急慢性感染、免疫系统疾病、肿瘤等疾病。所有病人或其近亲属已签署知情同意书。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 方法

1.2.1 基线临床资料的收集 所有病人均于入院后收集各项临床资料，包括年龄、性别、体质量、身高、心率、收缩压、舒张压、高血压与糖尿病病史等。次日清晨采集空腹静脉血，由检验科采用全自动生化分析仪测定各项生化指标，包括总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）、载脂蛋白A、载脂蛋白B、超敏C 反应蛋白（high-sensitivity C-reaction protein，hs-CRP）、空腹血糖、血肌酐、血尿素氮。采用超声心动图测定左心室舒张末期内径（left ventricular end-diastolic dimension，LVEDd）、左心室射血分数（left ventricular ejection fraction，LVEF）。

1.2.2 血清中CIRP 水平与炎性因子含量的测定 采集3 mL空腹静脉血，3 000 r/min离心20 min，分离血清。采用酶联免疫吸附试验测定血清中CIRP 水平、白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量。试剂盒由江苏晶美生物科技有限公司提供。

1.2.3 冠脉造影与Gensini 评分 经桡动脉或股动脉途径行冠脉造影，由2 名专业医师对冠脉病变情况进行评估。采用Gensini 评分标准定量评价冠脉狭窄程度，各冠脉分支Gensini评分=单支冠脉狭窄程度积分×该支冠脉系数，最后总的冠脉Gensini评分为各分支评分之和。冠脉狭窄程度积分：狭窄程度≤25%记为1 分，26%～50%记为2 分，51%～75%记为4 分，76%～90%记为8 分，91%～99%记为16 分，100%记为32 分。冠脉系数：左主干为5；左前降支近段为2.5，中段为1.5，远段为1；第一对角支为1，第二对角支为0.5；左回旋支近段为2.5，中段和远段均为1；钝缘支为1；右冠脉近、中、远段和后降支均为1。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0 软件进行统计学处理。定性资料采用病人例数进行表示，χ检验比较组间差异。定量资料均符合正态分布，采用x ± s表示，单因素方差分析比较多组间差异，组内两两比较采用LSD-t 检验。采用Pearson 法分析CIRP 水平与各炎性因子含量的相关性。采用有序多分类logistic回归模型分析冠脉狭窄程度的独立危险因素。采用ROC 工作曲线分析CIRP 水平对重度冠脉狭窄的诊断价值。当P ＜0.05时认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3

组病人基线临床资料的比较 3 组病人TC、TG、LDL-C、HDL-C、hs-CRP、LVEDd、LVEF 比较，差异有统计学意义（P ＜0.05），其余指标比较均差异无统计学意义（P ＞0.05）。见表1。

2.2 血清中CIRP及炎性因子含量的检测

与轻度组和中度组相比较，重度组血清中CIRP、IL-1β、IL-6、TNF-α 含量升高，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表2。

2.3 CIRP水平与各炎性因子含量的相关性

相关分析结果显示，CIRP 水平与IL-1β（r = 0.785，P ＜0.001）、IL-6（r=0.736，P ＜0.001）、TNF-α（r=0.739，P ＜0.001）含量呈正相关，均差异有统计学意义。见图1。

表2 冠心病196例血清中CIRP及炎性因子含量比较/（ng/L，x ± s）

2.4 冠脉狭窄程度的独立危险因素

将CIRP 及2.1 中差异有统计学意义的因素纳入多因素logistic回归 分析，结 果 显 示CIRP（OR = 1.242，95%CI：1.134～1.361，P ＜ 0.001）、hs-CRP（OR = 1.774，95%CI：1.372～2.293，P ＜0.001）是冠脉狭窄程度的独立危险因素，HDL-C（OR = 0.012，95%CI：0.000～0.493，P=0.020）是保护性因素，均差异有统计学意义。见表3。

表1 冠心病196例基线临床资料的比较

图1 冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）水平与各炎性因子含量的相关性

表3 有序多分类logistic回归模型分析冠脉狭窄程度的独立危险因素

2.5 CIRP水平对重度冠脉狭窄的诊断价值

采用ROC工作曲线评价CIRP水平对重度冠脉狭窄（Gensini 评分≥41 分）的诊断效能，结果显示ROC 曲线下面积为0.972（95%CI：0.954～0.991，P ＜0.001），以血清CIRP水平＞110.70 ng/L作为截断值时，对重度冠脉狭窄的诊断敏感度为0.854，特异度为0.968。见图2。

图2 ROC工作曲线分析冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）水平对重度冠脉狭窄的诊断价值

3 讨论

CIRP 最初是在筛查紫外线诱导转录因子的过程中发现，后来被认为是哺乳动物中的第一个冷休克蛋白，属于富含甘氨酸蛋白家族，氨基末端含有一个RNA 识别与结合域，羧基末端含有一个富含甘氨酸与精氨酸结构域。随后的研究表明，CIRP在包括心脏在内的不同组织中表达，而且可在各种细胞

应激中响应，如低温、缺氧，紫外线照射、氧化、高渗、热休克、内质网应激等。在应激条件下，CIRP的表达水平和定位发生改变，可从细胞核向细胞质转移，在各种应激中发挥保护作用。除了缓解应激压力，CIRP还参与细胞增殖、组织发育、昼夜节律调节以及肿瘤的形成和发展。此外，CIRP还可以释放到细胞外基质与血液循环系统，作为一种损伤相关分子模式诱导促炎因子表达，参与急慢性炎症疾病的病理过程。

考虑到CIRP 在细胞过程和疾病状态中的多重作用，我们推测CIRP 可能参与冠心病的发生发展。因此，本研究对CIRP在冠心病病人中的水平进行检测，发现随着冠脉狭窄程度的加重，血清CIRP 水平也明显升高。通过多因素logistic 回归分析，进一步确定CIRP是冠脉狭窄程度的独立危险因素。此外，hs-CRP 也作为危险性因素被筛选出来，HDL-C 则是保护性因素，与其他文献报道相一致。但是，LDL-C 纳入模型后却无显著性差异，有研究报道LDL-C、HDL-C 在纳入logistic 回归模型后均无显著性差异，本研究认为该结果的不一致可能与纳入因素的不同有关。此外，LDL-C/HDL-C 可能较两单独指标更具有稳定性，其应用价值仍有待探讨。ROC 工作曲线结果显示，CIRP 具有较好的诊断效能，以血清CIRP 水平＞110.70 ng/L 作为截断值时，对重度冠脉狭窄的诊断敏感度和特异度分别为0.854、0.968，为未来的临床应用提供了具体的参考数值。

冠心病是由基因、环境等多种因素共同引起的复杂异质性疾病，其发病机制尚未明确，与炎症、动脉粥样硬化斑块中新血管形成、血小板活化等多种病理过程有关。近年来，冠心病被认为是一种慢性炎症性疾病，炎症细胞可被募集至受损的血管系统，分泌炎症介质，促进斑块形成，导致心肌细胞缺血缺氧，甚至坏死。本研究结果显示，重度组病人血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 含量显著高于轻度组和中度组，证实了炎症反应在冠脉狭窄程度中的病理作用。CIRP在炎症反应中发挥重要的调节作用，如Qiang 等采用CIRP 重组蛋白刺激巨噬细胞，可促进TNF-α 和高迁移率族蛋白1 大量释放，并在体内注射时引起炎症反应，导致严重的组织损伤；Zhou 等发现CIRP 在败血症病人的外周血含量明显升高，可作为预后预测的独立危险因素；Sakurai等发现CIRP通过调节TNF-α和IL-23的产生来促进肠道炎症和结直肠肿瘤的发展。本文对CIRP 水平与各炎性因子含量进行Pearson相关分析，结果显示CIRP水平与IL-1β、IL-6、TNF-α含量均呈正相关，表明CIRP 可能通过炎症反应促进冠脉狭窄。上述结果提示，CIRP可能是炎性因子表达上调的重要上游分子，其作用机制可能与细胞表明Toll 样受体4结合，激活下游NF-κB信号通路有关。

本研究的不足与展望：（1）本研究属于单中心临床研究，未来若能实施多中心研究，将为本文结论提供更多的证据支持；（2）未对CIRP 在冠脉狭窄中的作用机制进行深入探讨，下一步需要在体外细胞模型与体内动物模型中，通过RNA 干扰或敲基因等方法探讨CIRP 的上下游调控机制，为CIRP 的应用提供坚实的理论依据；（3）CIRP 对冠心病病人远期预后的影响仍有待研究。

综上所述，血清中CIRP水平与炎性因子含量呈正相关，与冠状动脉狭窄程度密切相关，有较好的预测与诊断价值。