岩黄连注射液联合TACE对中晚期肝癌患者炎性反应、氧化应激的影响

张芝华 李淑荣 马桂勇 孙晓东 陈文龙 刘艳 贾玲玲

原发性肝癌是临床常见的消化道恶性肿瘤，我国是肝癌高发地区，每年新发病例在100万以上，死亡率高居所有恶性肿瘤第二位[1,2]。其中约90%的肝癌患者存在乙型肝炎病毒(HBV)感染史，被认为是造成肝功能损伤、肝硬化、肝癌甚至死亡的始动因素[3]。近年来研究发现，Toll样受体4(TLR4)介导的免疫炎性反应在肺癌、肝癌、结直肠癌、乳腺癌等炎性癌症发生发展中发挥重要作用[4-6]。本研究采用岩黄连注射液联合肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗中晚期肝癌，观察中西医联合治疗对患者炎性应激反应及相关因子水平的影响，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年1月至2019年1月我院收治的中晚期肝癌患者110例，随机分为对照组和治疗组，每组55例。对照组男41例，女14例；年龄35～62岁，平均(53.16±6.42)岁；TNM分期：Ⅱ期17例，Ⅲ期32例，Ⅳ期6例；分化程度：低分化19例，中分化29例，高分化7例。治疗组男44例，女11例；年龄37～66岁，平均(54.22±6.52)岁；TNM分期：Ⅱ期15例，Ⅲ期31例，Ⅳ期9例；分化程度：低分化21例，中分化30例，高分化4例。2组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：(1)符合肝癌诊断标准，均经症状体征、CT或MRI检查确诊[7]；(2)TNM分期为Ⅱ～Ⅳ期；(3)符合TACE手术指征；(4)未发生肝外转移者；(5)所有患者签署知情同意书。排除标准：(1)合并其他部位肿瘤者；(2)血液系统疾病、凝血功能障碍者；(3)心﹑肝﹑肺﹑肾等重要脏器功能不全者；(4)妊娠期、哺乳期女性患者。

1.3 治疗方法 2组均给予TACE治疗，具体方案如下：经皮股动脉穿刺插入导管，行肝动脉造影术，明确病灶大小、数量及供血情况，通过肝动脉注射化疗药物(5-氟尿嘧啶1 g+奥沙利铂100 mg)，灌注结束后注入40%碘化油栓塞剂。术后常规进行抗感染、营养支持治疗。治疗组在TACE基础上加用岩黄连注射液治疗。岩黄连注射液12 ml溶于250 ml 10%葡萄糖，静脉滴注，1次/d，持续14 d。

1.4 观察指标及方法

1.4.1 标本采集：采集2组患者治疗前后空腹静脉血采集8 ml，分两管，一管加入肝素抗凝，Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞，另一管3 500 r/min离心10 min，分离血清，-80℃冰箱待测。

1.4.2 PBMCs TLR4表达：采用流式细胞仪检测PBMCs TLR4 阳性细胞表达百分率。

1.4.3 血清炎性因子：采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、降钙素原(PCT)。

1.4.4 血清氧化应激指标：采用放射免疫法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。

1.4.5 血清肿瘤活性相关指标：采用ELISA实验测定血清血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、高尔基体糖蛋白-73(GP-73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)。

1.4.6 血清肿瘤复发相关指标：采用ELISA实验测定血清甲胎蛋白L3(AFP-L3)、谷氨酰转肽酶(GGT)。

2 结果

2.1 2组PBMCs TLR4表达比较 2组治疗前PBMCs TLR4阳性细胞表达百分率比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组治疗后PBMCs TLR4阳性细胞表达百分率均明显低于治疗前(P<0.05)，且治疗组TLR4 阳性细胞表达百分率低于对照组(P<0.05)。见表1。

组别TLR4对照组 治疗前73.86±8.42 治疗后50.33±6.21∗治疗组 治疗前75.23±9.68 治疗后32.67±4.32∗#

注：与治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

2.2 2组血清炎性因子比较 2组治疗前血清CRP、TNF-α、PCT比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组治疗后血清CRP、TNF-α、PCT均明显低于治疗前(P<0.05)，且治疗组CRP、TNF-α、PCT低于对照组(P<0.05)。见表2。

组别CRP(mg/L)TNF-α(μg/L)PCT(μg/L)对照组 治疗前65.43±7.2359.38±5.6912.54±1.54 治疗后41.89±5.08∗33.80±4.32∗8.12±1.00∗治疗组 治疗前68.12±8.4260.51±6.6211.88±1.43 治疗后20.66±3.27∗#16.87±2.09∗#3.59±0.47∗#

注：与治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

2.3 2组血清氧化应激指标比较 2组治疗前血清SOD、MDA比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组治疗后血清SOD均明显高于治疗前，MDA均明显低于治疗前(P<0.05)，且治疗组SOD高于对照组，MDA低于对照组(P<0.05)。见表3。

组别SOD(U/ml)MDA(μg/L)对照组 治疗前30.38±4.2273.78±8.80 治疗后47.06±5.57∗50.82±6.44∗治疗组 治疗前28.89±3.8775.21±10.54 治疗后62.65±7.62∗#26.73±3.21∗#

注：与治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

2.4 2组血清肿瘤活性相关指标比较 2组治疗前血清VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组治疗后血清VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3均明显低于治疗前(P<0.05)，且治疗组VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3低于对照组(P<0.05)。见表4。

2.5 2组血清肿瘤复发相关指标比较 2组治疗前血清AFP-L3、GGT比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组治疗后血清AFP-L3、GGT均明显低于治疗前(P<0.05)，且治疗组AFP-L3、GGT低于对照组(P<0.05)。见表5。

组别VEGFMMP-9GP-73GPC-3对照组 治疗前183.24±19.32215.87±23.35125.87±14.6725.16±3.23 治疗后128.13±10.35∗157.12±13.76∗80.23±9.76∗17.32±2.68∗治疗组 治疗前179.89±16.38220.02±25.76129.21±15.8727.03±4.11 治疗后68.82±7.11∗#100.13±7.26∗#42.64±5.31∗#11.44±1.60∗#

注：与治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

组别AFP-L3(%)GGT(U/L)对照组 治疗前53.45±6.08136.98±10.87 治疗后30.98±4.20∗89.43±6.76∗治疗组 治疗前54.21±7.33140.11±12.54 治疗后16.77±2.03∗#42.25±3.65∗#

注：与治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

3 讨论

流行病学调查显示，每年我国肝癌发病例数约占全球发病例数的一半以上，且病死率和复发率高，已经成为危害我国人群公共健康的重大问题[8,9]。目前，肝切除术和肝脏移植是治疗早期肝癌的主要手段，但60%～80%的患者确诊时已发展至中晚期，加之患者耐受性差，不适宜进行根治性手术[9]。近年来，以TACE为代表的姑息性介入疗法已经成为治疗中晚期肝癌的重要方法，可通过阻断肝动脉血供造成肿瘤血管栓塞，同时可维持肝脏局部高浓度的化疗药物，导致肿瘤细胞缺血、缺氧和坏死，但术后复发率高，且容易造成肝组织损伤，影响患者远期生存率和生活质量[10]。研究显示，中西医联合治疗中晚期肝癌能够发挥优势互补、增效减毒的功效[11]。本研究所用岩黄连注射液具有抗炎、抗氧化、抗肝炎病毒、调节免疫等药理作用，其与TACE联合治疗中晚期肝癌在提高近期疗效、改善临床症状及延长患者生存期方面具有显著疗效，但其发挥治疗作用的具体靶点尚未阐明。

研究显示，恶性肿瘤发生发展与炎性反应密切相关，而绝大部分肝癌患者早期曾感染HBV，导致患者发展为肝癌的风险较正常人群高达200倍以上。HBV感染后可与宿主肝细胞基因组DNA整合，并通过激活多条信号通路及多种机制调控细胞的增殖、凋亡和分化，在肝癌发生发展及复发转移过程中发挥关键作用[12]。近年来研究发现，TLRs是一类模式识别受体家族，其中TLR4是该家族的重要成员，主要表达于单核-巨噬细胞、树突状细胞等免疫细胞表面，在天然免疫和获得性免疫应答中发挥重要作用。国内外多项研究采用Real time-PCR、Western blot、免疫组化等技术观察了TLR4在肺癌、乳腺癌、胰腺癌等肿瘤组织的表达状况，结果显示TLR4在多种肿瘤组织异常高表达，且其表达与疾病进展与预后密切相关[4-6]。基础研究表明，TLR4识别LPS或内源性配体后主要通过MyD88依赖途径和非MyD88依赖途径激活NF-κB、Foxp3、MAPK/JNK、PI3K/Akt/GSK3β等信号通路，参与调控肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭转移等过程，并通过诱导慢性炎性和大量细胞因子的产生在肿瘤微环境形成中发挥重要作用[13-15]。其中CRP、TNF-α、PCT和SOD、MDA分别是反映炎性反应和氧化应激程度的常用指标。本研究结果显示，2组治疗前PBMCs TLR4 阳性细胞表达百分率及血清CRP、TNF-α、PCT比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组治疗后PBMCs TLR4 阳性细胞表达百分率及血清CRP、TNF-α、PCT均明显低于治疗前(P<0.05)，且治疗组TLR4 阳性细胞表达百分率、CRP、TNF-α、PCT低于对照组(P<0.05)。说明岩黄连注射液联合TACE治疗中晚期肝癌能够通过下调TLR4的表达减轻炎性应激反应，这可能与岩黄连注射液抗炎、抗氧化等作用有关。

VEGF是一种具有多种生理作用的细胞因子，对诱导肿瘤新生血管形成具有较强作用；MMP-9是基质金属蛋白酶家族(MMPs)的重要成员，通过降解细胞外基质中的胶原等成分，增强肿瘤的侵袭和转移能力；GP-73是主要表达在胆管上皮细胞的一类跨膜蛋白，其水平高低能够反映肝细胞损伤程度，与肝功能呈负相关；GPC-3是原发性肝癌组织表达的一类糖蛋白，在正常肝组织和转移性病灶表达量很低，在肿瘤细胞增殖、分化、侵袭和血管生成中发挥重要作用；AFP-L3是肿瘤细胞特异性产生的一种肿瘤标志物，在肿瘤鉴别诊断、疗效判断和预后评估方面较AFP具有更高的灵敏性和特异性；肝癌患者由于肿瘤压迫胆总管，导致胆汁排泄障碍和血清GGT升高，可作为肝癌鉴别诊断的敏感指标之一[16-18]。本研究结果显示，2组治疗前血清VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3、AFP-L3、GGT比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组治疗后血清VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3、AFP-L3、GGT均明显低于治疗前(P<0.05)，且治疗组VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3、AFP-L3、GGT低于对照组(P<0.05)。说明在TACE治疗基础上加用岩黄连注射液能够显著抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭转移过程，从而降低复发率。

综上所述，岩黄连注射液联合TACE治疗中晚期肝癌疗效确切，能够显著下调PBMCs TLR4表达，抑制炎性应激反应，并降低血清相关因子水平，这可能是其发挥治疗作用的机制之一。以TLR4为靶点探索下调其表达或阻断其信号通路激活的方法有可能成为延缓肝癌进展的潜在治疗方法。