新生儿ABO 溶血病实验诊断的方法学与价值分析

陈继良，章驰

江苏省泗洪县妇产儿童医院，检验科 223900

临床上对于溶血症主要分为ABO 溶血症和RH 溶血症，RH 溶血率在我国较低， 因为RH 阳性占人口的99%，RH 阴性不到1%。RH 溶血通常发生在第2 胎。当母亲为RH 阴性而父亲为RH 阳性时，胎儿将继承父亲的RH 阳性。 RH 抗原可以在分娩时进入母亲的血液循环，刺激其抗体的产生。 在第2 次怀孕时，如果胎儿是RH 阳性，母体的RH 抗体会迅速增加，可以通过胎盘进入胎儿血液循环，导致胎儿溶血，其中，RH 溶血症状胎儿的发病率较高。 新生儿的ABO 溶血病（ABO hemolytic disease of the newborn, ABO HDN） 是指出生的新生儿的血型与母亲血型不符合， 而导致的溶血现象[1]。 大多数母亲为 O 型，新生儿为 A 型或者 B 型，主要原因是当胎儿从父亲处取得的血型抗原与母亲不同时，进入母亲体内会刺激母亲产生相应的抗体。 它可以通过胎盘进入胎儿体内， 抗原抗体与胎儿体内红细胞发生反应，引起溶血。 该研究方便选取2017 年7 月—2019 年3 月232 例疑似新生儿ABO 溶血病作为研究对象，筛选出诊断最为准确的诊断方法，并探讨早期诊断早期干预的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析方便收集的临床疑似ABO 溶血病的新生儿案例232 例， 其中有118 例男性新生儿，114 例女性新生儿， 年龄范围：3 d 以内 133 例，4～7 d 76 例，7 d以上23 例，早产儿68 例，足月产儿141 例，过期产儿23 例。该次研究所有新生儿直系亲属全部签署同意书，并经过伦理委员会批准，纳入标准：所有患者均初步诊断为ABO 溶血病，临床主要表现为贫血、黄疸、肝脾肿大、高胆红素血症等；排除标准：感染，凝血障碍，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏，其他新生儿并发症，血液疾病[2]。

1.2 检查方法

红细胞悬液，血清和放散液的制备[3]：将新生儿的血液不放入抗凝剂，采集后直接离心，上层为血清，下层为红细胞，用生理盐水充分洗涤患儿红细胞4 次，保留最后一次洗涤液， 向洗涤后的红细胞内加入等量的生理盐水或6%牛血清白蛋白，在56℃水浴中振荡混匀10 min，在预温的离心管中离心后，立即转移放散液到洁净的试管中。

微柱凝胶法[4]：用微柱凝胶卡标记直抗，游离、放散，在微柱的凝胶孔中加入新生儿的红细胞悬液，血清和放散液，并在血清和放散液的孔中加入同型对照，用最后一次洗涤液做平行对照，孵育15 min 后，用卡式离心机进行离心，分析结果。 红细胞聚集在凝胶卡上或中部者为阳性，红细胞沉积凝胶卡底部者为阴性。

1.3 观察指标

分析微柱凝胶法溶血3 项实验结果。 对3 项试验同时阳性者可确诊新生儿溶血病； 未同时出现阳性者以抗体释放试验阳性为诊断标准； 直接抗人球蛋白试验和（或）游离抗体试验阳性而抗体释放试验阴性者为可疑，结合临床表现综合分析[5]。

2 结果

2.1 溶血3 项试验结果

微柱凝胶法的溶血3 项实验结果为1 例 （0.43%）直接抗人球蛋白试验阳性，1 例（0.43%）游离抗人球蛋白试验阳性，67 例 （28.88%） 热放散试验阳性，1 例（0.43%） 直抗阳性+游离抗阳性，2 例 （0.86%） 直抗阳性+热放散阳性，73 例（31.47%）游离抗阳性+热放散阳性，13 例（5.60%）直抗阳性+游离抗阳性+热放散阳性，74 例（31.90%）全部阴性。 见表1。

3 讨论

新生儿ABO 溶血症 （ABO hemolytic disease of the newborn, ABO HDN）临床较为常见，主要就是因为母婴血型不合，导致的同族免疫性溶血，溶血又是指红细胞膜破裂，红细胞发生溶解的现象[6]。 主要原因是当胎儿从父亲处取得的血型抗原与母亲不同时， 进入母亲体内后会刺激母亲产生相应的抗体。 它可以通过胎盘进入胎儿体内，抗原抗体与胎儿红血球发生反应，引起溶血[7]。在ABO 系统中，因为具有抗A 或O 型人的数量高于A 型和B 型的数量：A 抗原比B 抗原强，所以母亲型和胎儿型更容易生病[8]。 ABO 溶血大多在第1 胎上发生， 母体已经受到类似自然界中A 和B 物质的抗原的刺激，并与抗A 或抗B 抗体有关联。 RH 溶血的免疫抗体只能由人的血细胞作为抗原刺激而产生。 胎儿红细胞在分娩时进入母亲体内时，除了有输血史外，第1 胎出现溶血是罕见的[9]。我国大部分人的RH 血型为阳性，因此RH 溶血在我国是罕见的。 ABO 溶血的新生儿会有黄疸出现并迅速增加的症状。 并且随着黄疸的加深，可出现贫血、肝脾肿大，严重时会出现胆红素脑病。 也可导致心脏衰竭、全身水肿，甚至死亡[10]。严重危害新生儿的健康和生命， 因此对于ABO 的溶血及时诊断是十分必要的， 只有早诊断早干预才会保障新生儿的健康和生命。 溶血3 项试验是指的直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、放散试验，直接抗球蛋白试验主要是检测新生儿的红细胞是否被来自母体的IgG 抗A 或抗B 所致敏，游离抗体试验是检测血清，如果新生儿血清中发现与其红细胞不配合的IgG 抗A(B)时，表明婴儿体内有抗体，可能受害。

该次研究， 微柱凝胶法的溶血3 项实验结果为1例（0.43%）直接抗人球蛋白试验阳性，1 例（0.43%）间接抗人球蛋白试验阳性，67 例（28.88%）热放散试验阳性，1 例（0.43%）直抗阳性+间抗阳性，2 例（0.86%）直抗阳性+热放散阳性，73 例（31.47%）间抗阳性+热放散阳性，13 例（5.60%）直抗阳性+间抗阳性+热放散阳性，74 例（31.90%）全部阴性。 覃日吉等[11]依据其所选择的ABO血型不合致HDN 的患儿， 应用微柱凝胶卡法实施检查，确诊率为98.9%，显著高于试管法86.9%。 另外，微柱凝胶卡组抗体释放试验、游离抗体试验、抗球蛋白试验阳性率依次为100.0%，96.7%，97.8%， 高于试管组77.2%，75.0%，68.5%，差异有统计学意义（P＜0.05）。 与该次研究结果一致。

表1 微柱凝胶法的溶血3 项实验结状况[n(%)]

微柱凝胶法是用微柱凝胶卡标记直抗， 游离、放散，在微柱的凝胶孔中加入新生儿的红细胞悬液，血清和放散液，并在血清和放散液的孔中加入同型对照，当红细胞聚集在凝胶卡上或中部者为阳性， 红细胞沉积凝胶卡底部者为阴性[12]。 该方法血清、红细胞悬液以及放散液的用量较小，检测结果较为准确。 并且通过调节凝胶的浓度，使得阴阳性的区分更为明显，诊断更为准确。 微柱凝胶法则是最新的免疫学测量技术，微柱凝胶法中使用的微柱含有大分子溶液，无红细胞清洗，即可进行抗人球蛋白试验，检测灵敏度得到大大的提高，也可用于其他检测方法难以检测的弱凝集试样， 使其被准确的检测。 此外，微柱凝胶法对于操作者的技术和验证要求较低，易操作，短时间内即可完成测试，相关因素所造成的影响程度明显降低，易于解释，可作为常规的检测方法。另外ABO 溶血会导致新生儿的心脏衰竭，甚至是死亡， 因此对于ABO 溶血的早期诊断也是十分重要的， 一般对于ABO 溶血的早期诊断主要是检测孕妇血清中的IgG 亚类， 研究证明新生儿ABO 溶血发病随母体IgG 抗体效价水平升高而上升， 对于夫妻血型不合的O 型血孕妇应提早进行IgG 抗体效价水平和IgG 亚类含量的检测， 早期的诊断可以降低ABO 溶血发病率。

综上所述， 在新生儿ABO 溶血病诊断中使用微柱凝胶法方法，与试管法相比操作更为简单、灵敏，特异性也较高，结果客观，对新生儿ABO 溶血病诊断的诊断具有较大的临床价值。