MYH7基因多态性位点rs397516252及rs187073962与辽宁地区肥厚性心肌病的临床相关研究

2020-03-13 04:08宋晓宇
江西科学 2020年1期
关键词:肌球蛋白频数等位基因

宋晓宇,薛 凌

(锦州医科大学附属第三医院,121000,锦州,辽宁)

0 引言

肥厚性心肌病(HCM)是一种常见的遗传性心血管疾病[1],为常染色体显性遗传。临床上多发生于青壮年,常有家族史。肥厚性心脏病发病率很高,全球发病率约为1/500[2]。临床表现包括劳力性呼吸困难、疲劳、晕厥、猝死、中风及心衰。该病病程个体差异较大,虽然大多数患者寿命并未明显缩短,但若本人有晕厥史、室性心动过速及心室壁厚度超过3.0 cm以上者或家属有猝死者,则患者发生猝死的概率明显增加[3]。目前研究表明HCM由11个或更多编码心脏肌节蛋白基因中的1 400多个突变引起[4],其中心脏β-肌球蛋白重链(MYH7)基因是HCM发病最主要的致病基因,目前已报道国内HCM相关MYH7基因致病性突变有66个[5]。本研究通过等位基因特异性扩增法研究辽宁地区HCM患者发病与MYH7基因多态性位点的临床相关性,在基因层面了解本地区HCM发病可能易感基因位点。

1 材料与方法

1.1 一般资料

受试对象为2017年12月至2018年9月于锦州医科大学附属第三医院住院及体检人员。病例组为HCM患者共87例,男性40例,女性47例,平均年龄49.38±17.13岁,纳入标准:a)超声心动图提示左心室壁厚度≥15 mm;2)超声心动图提示室间隔厚度≥15 mm。排除标准:1)其他引发心肌增厚的疾病如高血压、风湿性心脏病、先心病等;2)自身免疫性疾病、遗传性疾病、代谢性疾病等。对照组为体检健康人员共174例,其中男性82例,女性92例,平均年龄47.02±16.55岁。本研究已告知受试者并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 提取DNA 采集5 mL外周静脉血,使用血液标本DNA提取试剂盒提取样本DNA,血液样品先通过红细胞裂解液将血液中的红细胞破坏,裂解后收集白细胞,加入裂解缓冲液裂解白细胞,使白细胞中的DNA释放到溶液中,之后将蛋白质沉淀,分离到上清液,加入异丙醇、酒精,将DNA沉淀,最后加双蒸水得到DNA溶液。

1.2.2 等位基因特异性扩增 位点rs397516252和rs187073962的序列通过UCSU数据库进行检索(http://genome.ucsc.edu/),由里来生物公司设计引物并合成。PCR反应条件为37℃10 min;95℃5 min;95℃15 s;60℃60 s,后2个步骤进行40个循环。通过荧光对照验证PCR的有效性。

1.2.3 统计学分析 通过SPSS13.0软件对实验数据进行描述及分析使用,采用频数及均数±标准差对数据进行描述,采用Pearsonχ2检验对组间SNP位点的分布差异进行分析。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 2组临床资料比较

HCM组平均年龄49.38±17.13,男女比例40∶47,对照组平均年龄47.02±16.55,男女比例82∶92,统计分析显示2组间年龄及性别无显著差异(P>0.05),提示本研究纳入的2组实验对象差别无统计学意义,可以进行对比分析,如表1所示。

表1 2组临床资料比较

2.2 SNP位点rs397516252的组间比较

SNP位点rs397516252已通过哈迪-温伯格遗传平衡检验。统计分析表明HCM组中CC基因型、CG基因型及GG基因型的频数分别为82例、3例、2例;对照组中CC基因型、CG基因型及GG基因型的频数分别为173例、1例、0例。2组间基因型分布差异具有统计学意义(P=0.026),2组间等位基因分布也具有统计学意义(P=0.007),如表2所示。

2.3 SNP位点rs187073962的组间比较

统计分析表明HCM组中GG基因型、GA基因型及AA基因型的频数分别为71例、11例、5例;对照组中GG基因型、GA基因型及AA基因型的频数分别为151例、17例、6例。HCM组中G等位基因及A等位基因发现频数分别为153例、21例;对照组中G等位基因及A等位基因发现频数分别为319例及29例。2组间基因型及等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05),如表3所示。

表2 2组间rs397516252比较

表3 2组间rs187073962比较

3 讨论

肥厚性心肌病(HCM)是以室间隔不对称肥厚为特征的遗传性心脏病,以常染色体显性遗传为主要遗传学方式[6]。临床表现有时可无症状,有时表现为心悸、胸闷、室性心律失常、晕厥及猝死等[7]。其病理特征主要为心肌细胞肥大、心腔缩小及心肌纤维化等表现[8]。目前研究发现众多基因与HCM发病有关,尤其是心脏β-肌球蛋白重链(MYH7)基因。因此,从基因层面研究HCM的病因及发病机制,可为未来临床治疗提供更多的可能。

心脏β-肌球蛋白重链(MYH7)基因,位于14号染色体q11.2位置,共包含40个外显子,编码心脏肌球蛋白的β(或慢)重链亚基。肌球蛋白是一种六聚体蛋白,包含2个重链亚基,2个碱轻链亚基和2个调节性轻链亚基,主要在正常人的心室中表达,同时也可在骨骼肌中表达。目前众多研究表明MYH7基因的突变与肥厚型心肌病,肌球蛋白储存型肌病,扩张型心肌病有关[9-12]。Marsiqlia等人共筛选了78个MYH7基因突变与HCM的发病有关[13]。刘长清等人表明携带有MYH7基因的HCM患者可表现高动力收缩和舒张功能受限[14]。Liu等人对中国汉族10个HCM患者家系进行调查研究,在其中的3个家系发现了MYH7突变(分别为Arg663His,Glu924Lys和Ile736Thr),并且其中有3个患者在20-48岁时猝死,提示这3个MYH7基因突变为HCM的致病性突变,尤其与猝死高风险相关[15]。此外,MATTOS等人对巴西南部HCM患者进行的首次遗传分析发现有58%的个体存在MYH7基因突变,且在大多数存在突变的个体中发生了MYH7相关疾病[16]。众多研究均发现MYH7基因突变与HCM发病相关,但不同地域发现的MYH7基因变异不尽相同,本研究选取了2个MYH7基因多态性位点(rs397516252和rs187073962),探讨本地区HCM易感基因位点。NCBI数据库中rs397516252提示可能致病性,而rs187073962位点性质不确定。本研究与NCBI数据库收录结果有所差异,rs397516252位点组间基因型及等位基因分布差异有统计学意义(P<0.05),rs187073962位点组间基因型及等位基因分布差异无统计学意义(P<0.05),提示本地区MYH7基因多态性位点rs397516252可能与HCM发病有关,而位点rs187073962变异对本地区HCM发病无影响。

综上,SNP位点rs397516252可能为辽宁地区汉族人群HCM的易感基因位点,而位点rs187073962可能与本地区HCM发病无关。本研究中主要分析SNP位点变异散在分布,后续应对本研究中基因改变阳性病例的家系进行研究,以分析易感基因位点的遗传学特征。此外增加研究对象,扩大样本量可使研究结果进一步得到验证,从基因层面更好的研究HCM疾病病因及发病机制。

猜你喜欢
肌球蛋白频数等位基因
碱性pH对马鲛鱼肌球蛋白热聚集行为的影响
亲子鉴定中男性个体Amelogenin基因座异常1例
青鱼和鲢鱼肌球蛋白热诱导凝胶特性的比较
广东汉族人群Penta D基因座off-ladder稀有等位基因分析
贵州汉族人群23个STR基因座的OL等位基因研究
中考频数分布直方图题型展示
WHOHLA命名委员会命名的新等位基因HLA-A*24∶327序列分析及确认
学习制作频数分布直方图三部曲
频数和频率
高糖对体外培养人脐静脉内皮细胞通透性及肌球蛋白轻链磷酸化的影响