MYH7基因多态性位点rs397516252及rs187073962与辽宁地区肥厚性心肌病的临床相关研究

宋晓宇，薛 凌

(锦州医科大学附属第三医院，121000，锦州，辽宁)

0 引言

肥厚性心肌病(HCM)是一种常见的遗传性心血管疾病[1]，为常染色体显性遗传。临床上多发生于青壮年，常有家族史。肥厚性心脏病发病率很高，全球发病率约为1/500[2]。临床表现包括劳力性呼吸困难、疲劳、晕厥、猝死、中风及心衰。该病病程个体差异较大，虽然大多数患者寿命并未明显缩短，但若本人有晕厥史、室性心动过速及心室壁厚度超过3.0 cm以上者或家属有猝死者，则患者发生猝死的概率明显增加[3]。目前研究表明HCM由11个或更多编码心脏肌节蛋白基因中的1 400多个突变引起[4]，其中心脏β－肌球蛋白重链(MYH7)基因是HCM发病最主要的致病基因，目前已报道国内HCM相关MYH7基因致病性突变有66个[5]。本研究通过等位基因特异性扩增法研究辽宁地区HCM患者发病与MYH7基因多态性位点的临床相关性，在基因层面了解本地区HCM发病可能易感基因位点。

1 材料与方法

1.1 一般资料

受试对象为2017年12月至2018年9月于锦州医科大学附属第三医院住院及体检人员。病例组为HCM患者共87例，男性40例，女性47例，平均年龄49.38±17.13岁，纳入标准:a)超声心动图提示左心室壁厚度≥15 mm;2)超声心动图提示室间隔厚度≥15 mm。排除标准:1)其他引发心肌增厚的疾病如高血压、风湿性心脏病、先心病等;2)自身免疫性疾病、遗传性疾病、代谢性疾病等。对照组为体检健康人员共174例，其中男性82例，女性92例，平均年龄47.02±16.55岁。本研究已告知受试者并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 提取DNA 采集5 mL外周静脉血，使用血液标本DNA提取试剂盒提取样本DNA，血液样品先通过红细胞裂解液将血液中的红细胞破坏，裂解后收集白细胞，加入裂解缓冲液裂解白细胞，使白细胞中的DNA释放到溶液中，之后将蛋白质沉淀，分离到上清液，加入异丙醇、酒精，将DNA沉淀，最后加双蒸水得到DNA溶液。

1.2.2 等位基因特异性扩增 位点rs397516252和rs187073962的序列通过UCSU数据库进行检索(http://genome.ucsc.edu/)，由里来生物公司设计引物并合成。PCR反应条件为37℃10 min;95℃5 min;95℃15 s;60℃60 s，后2个步骤进行40个循环。通过荧光对照验证PCR的有效性。

1.2.3 统计学分析 通过SPSS13.0软件对实验数据进行描述及分析使用，采用频数及均数±标准差对数据进行描述，采用Pearsonχ2检验对组间SNP位点的分布差异进行分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 2组临床资料比较

HCM组平均年龄49.38±17.13，男女比例40∶47，对照组平均年龄47.02±16.55，男女比例82∶92，统计分析显示2组间年龄及性别无显著差异(P＞0.05)，提示本研究纳入的2组实验对象差别无统计学意义，可以进行对比分析，如表1所示。

表1 2组临床资料比较

2.2 SNP位点rs397516252的组间比较

SNP位点rs397516252已通过哈迪－温伯格遗传平衡检验。统计分析表明HCM组中CC基因型、CG基因型及GG基因型的频数分别为82例、3例、2例;对照组中CC基因型、CG基因型及GG基因型的频数分别为173例、1例、0例。2组间基因型分布差异具有统计学意义(P=0.026)，2组间等位基因分布也具有统计学意义(P=0.007)，如表2所示。

2.3 SNP位点rs187073962的组间比较

统计分析表明HCM组中GG基因型、GA基因型及AA基因型的频数分别为71例、11例、5例;对照组中GG基因型、GA基因型及AA基因型的频数分别为151例、17例、6例。HCM组中G等位基因及A等位基因发现频数分别为153例、21例;对照组中G等位基因及A等位基因发现频数分别为319例及29例。2组间基因型及等位基因分布差异无统计学意义(P＞0.05)，如表3所示。

表2 2组间rs397516252比较

表3 2组间rs187073962比较

3 讨论

肥厚性心肌病(HCM)是以室间隔不对称肥厚为特征的遗传性心脏病，以常染色体显性遗传为主要遗传学方式[6]。临床表现有时可无症状，有时表现为心悸、胸闷、室性心律失常、晕厥及猝死等[7]。其病理特征主要为心肌细胞肥大、心腔缩小及心肌纤维化等表现[8]。目前研究发现众多基因与HCM发病有关，尤其是心脏β－肌球蛋白重链(MYH7)基因。因此，从基因层面研究HCM的病因及发病机制，可为未来临床治疗提供更多的可能。

心脏β－肌球蛋白重链(MYH7)基因，位于14号染色体q11.2位置，共包含40个外显子，编码心脏肌球蛋白的β(或慢)重链亚基。肌球蛋白是一种六聚体蛋白，包含2个重链亚基，2个碱轻链亚基和2个调节性轻链亚基，主要在正常人的心室中表达，同时也可在骨骼肌中表达。目前众多研究表明MYH7基因的突变与肥厚型心肌病，肌球蛋白储存型肌病，扩张型心肌病有关[9－12]。Marsiqlia等人共筛选了78个MYH7基因突变与HCM的发病有关[13]。刘长清等人表明携带有MYH7基因的HCM患者可表现高动力收缩和舒张功能受限[14]。Liu等人对中国汉族10个HCM患者家系进行调查研究，在其中的3个家系发现了MYH7突变(分别为Arg663His，Glu924Lys和Ile736Thr)，并且其中有3个患者在20－48岁时猝死，提示这3个MYH7基因突变为HCM的致病性突变，尤其与猝死高风险相关[15]。此外，MATTOS等人对巴西南部HCM患者进行的首次遗传分析发现有58%的个体存在MYH7基因突变，且在大多数存在突变的个体中发生了MYH7相关疾病[16]。众多研究均发现MYH7基因突变与HCM发病相关，但不同地域发现的MYH7基因变异不尽相同，本研究选取了2个MYH7基因多态性位点(rs397516252和rs187073962)，探讨本地区HCM易感基因位点。NCBI数据库中rs397516252提示可能致病性，而rs187073962位点性质不确定。本研究与NCBI数据库收录结果有所差异，rs397516252位点组间基因型及等位基因分布差异有统计学意义(P＜0.05)，rs187073962位点组间基因型及等位基因分布差异无统计学意义(P＜0.05)，提示本地区MYH7基因多态性位点rs397516252可能与HCM发病有关，而位点rs187073962变异对本地区HCM发病无影响。

综上，SNP位点rs397516252可能为辽宁地区汉族人群HCM的易感基因位点，而位点rs187073962可能与本地区HCM发病无关。本研究中主要分析SNP位点变异散在分布，后续应对本研究中基因改变阳性病例的家系进行研究，以分析易感基因位点的遗传学特征。此外增加研究对象，扩大样本量可使研究结果进一步得到验证，从基因层面更好的研究HCM疾病病因及发病机制。