Glut-1及VEGF在结肠癌中的表达及与临床指标的关系

宋晓华　张江国　吕红

【摘要】 目的：探讨葡萄糖转运蛋白-1（Glut-1）及血管内皮生长因子（VEGF）在结肠癌中的表达及与临床指标的关系。方法：选取2015年1月-2019年1月深圳市蛇口人民医院肿瘤科收治的42例结肠癌患者的手术切除标本，应用免疫组织化学染色法检验Glut-1、VEGF在结肠癌中的表达及与临床指标的关系。结果：VEGF表达与肿瘤大小和临床分期均无关（P>0.05），而与淋巴结转移、分化程度均有关（P<0.05）。Glut-1表达与肿瘤大小和分化程度均无关（P>0.05），与临床分期和淋巴结转移均有关（P<0.05）。结论：结肠癌患者的VEGF表达与淋巴结转移、分化程度明显相关，Glut-1表达与淋巴结转移、临床分期有关。

【关键词】 葡萄糖转运蛋白-1; 血管内皮生长因子; 结肠癌; 表达

Expression of Glut-1 and Vascular Endothelial Growth Factor in Colon Cancer and Their Relationship with Clinical Markers/SONG Xiaohua，ZHANG Jiangguo，LYU Hong.//Medical Innovation of China，2019，16（22）：0-048

【Abstract】 Objective：To investigate the expression of Glut-1 and vascular endothelial growth factor（VEGF）in colon cancer and their relationship with clinical parameters.Method：42 cases of colon cancer were selected from January 2015 to January 2019 in Department of Oncology，Shenzhen Shekou Peoples Hospital.The expression of Glut-1 and VEGF in colon cancer and their relationship with clinical indicators were examined by immunohistochemical staining.Result：VEGF expression was not correlated with tumor size and clinical stage（P>0.05），but correlated with the differentiation degree of lymph node metastasis（P<0.05）.The expressions of glut-1 were not correlated with tumor size and differentiation degree（P>0.05），but with clinical staging and lymph node metastasis（P<0.05）.Conclusion：The expression of vascular endothelial growth factor in patients with colon cancer is significantly correlated with lymph node metastasis and differentiation，and the expression of Glut-1 is correlated with lymph node metastasis and clinical stage.

【Key words】 Glucose transporter-1; Vascular endothelial growth factor; Colon cancer; Expression

First-authors address：Shenzhen Shekou Peoples Hospital，Shenzhen 518000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.22.012

结肠癌（colon cancer）在肿瘤科中属常见、多发疾病，是主要发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤。据全国肿瘤登记中心最新数据显示，目前结肠癌的发病率依旧居全国恶性肿瘤前列，较高的发病率与死亡率严重威胁人们的生命健康。据统计，结肠癌的好发部位主要在直肠、乙状结肠结合部，另外横结肠、盲肠末端以及升结肠下部等也是结肠癌的好发部位。近年来，大量临床研究证实，肿瘤的过快增长常导致葡萄糖利用和摄取量递增，使葡萄糖转运蛋白-1（glucosetransporter 1，Glut-1）表达上调，而为获得相应的营养供应，更多的葡萄糖又会被转运至细胞内[1]。血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是常见的多肽聚合物，其功能极为强大，文献[2]报道在特定体液环境下，内皮细胞特定会受VEGF的诱导作用而分裂增殖和转移正常的内皮细胞或使内皮细胞不正常分裂增殖和转移。借此，本文将采用免疫组化方法对结肠癌的相关指标进行检测，分析Glut-1、VEGF与临床病例参数的相关性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2015年1月-2019年1月广东省深圳市南山区蛇口人民医院肿瘤科收治的42例结肠癌患者的手術切除标本，所有标本均经双盲法复诊确定。在42例结肠癌标本中，男21例，女21例，年龄32～80岁，平均（55.0±2.5）岁。

1.2 仪器与方法

1.2.1 主要仪器及试剂 （1）仪器：Galanz医用微波炉（英国）、Thermo自动脱水机（英国）、Autostainer 480免疫组化染色仪（美国）、Olympus照相显微镜（日本）等;（2）试剂：CST兔抗人VEGF单克隆抗体（美国）、Glut-1抗体（Santa Cruz公司）、氚标-葡萄糖（中国原子能研究所）、MTT溶液（Sigma公司）。

1.2.2 染色方法 （1）将石蜡切片保持在36 ℃环境下烘烤2 h，然后用二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水，在37℃的过氧化氢（H2O2）溶液中孵10 min，接着用磷酸缓冲盐溶液（PBS）冲洗3次，5 min/次。（2）将其置入1 000 mL枸橼酸（Citric Acid）缓冲液中煮沸（95 ℃）15～20 min，自然冷却（>20 min）后用冷水冲洗缸子，然后降温冷却至常温后再用磷酸缓冲盐溶液冲洗3次，5 min/次。（3）使用正常羊血清工作液将其封闭在37 ℃环境下10 min，滴加一抗后放置在冰箱（4 ℃）孵育过夜，使用磷酸缓冲盐溶液冲洗3次，5 min/次（PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）;接着滴加生物素标记二抗，并在37 ℃环境下孵育0.5 h，磷酸缓冲盐溶液冲洗3次，5 min/次;滴加辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）标记的链霉素卵白素工作液，在37 ℃环境下孵育0.5 h，用磷酸缓冲盐溶液冲洗3次，5 min/次。（4）DAB/过氧化氢（H2O2）反应染色，接着用自来水冲洗后使用苏木素复染，最后常规脱水、透明干燥、封片和摄片。

1.3 观察指标 观察VEGF表达与各项临床指标的关系，Glut-1表达与各项临床指标的关系。

1.4 统计学处理 采用SPSS 21.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF表达与各项临床指标的关系 VEGF表达与肿瘤大小和临床分期均无关（P>0.05），而与淋巴结转移、分化程度均有关（P<0.05），见表1。

2.2 Glut-1表达与各项临床指标的关系 Glut-1表达与肿瘤大小和分化程度均无关（P>0.05），Glut-1表达与临床分期和淋巴结转移均有关（P<0.05），见表2。

3 讨论

近年来，某肿瘤微环境的相关研究指出，大部分肿瘤患者的病理组织学特征常出现在低氧组织区域，且随着肿瘤的不断生长，肿瘤的恶性程度也会随之递增[3-5]。而造成这种恶性表型生长的重要因素则与低氧微环境中存活的HIF-1调控肿瘤细胞相关，其中HIF-1下游基因中所包含的Glut-1及VEGF两种糖酵解代谢相关基因又与肿瘤的进展、转移和肿瘤新生血管形成息息相关[6-10]。

通常情况下，Glut-1是广泛分布于血脑屏障的内皮细胞和红细胞等正常组织中，它作为葡萄糖转运蛋白家族中的重要组成成员之一，在许多恶性肿瘤中均有过表达，文献[11-15]报道其与肿瘤的转移、临床分期和预后密切相关，这在结肠癌中同样有体现。本研究中，VEGF表达与肿瘤大小和临床分期均无关（P>0.05），而与淋巴结转移、分化程度有关（P<0.05）;Glut-1表达与肿瘤大小和分化程度均无关（P>0.05），Glut-1表达与临床分期和淋巴结转移均有关（P<0.05）。结合实际情况来看，这可能是不同的抗体浓度、实验方法、结果判定标准等误差造成的，但Glut-1在结直肠癌组织中的表达明显高于正常组织[16-20]。大量临床研究数据表明，新生血管的形成是实体肿瘤生长和转移的重要步骤，当最初的实体肿瘤细胞生长到小集落时（通畅情况下，体积<1 mm3），它的生长与存货则与其促进血管生成和适应缺氧环境的能力相关。VEGF可通过酪氨酸激酶受体调节内皮细胞的运动和增殖及改变新生血管通透性而为肿瘤提供营养，促进新生癌组织的血流灌注，增强癌细胞的增殖活性。本研究中，VEGF表达与肿瘤大小与临床分期均无关（P>0.05），而与淋巴结转移、分化程度均有关（P<0.05），提示VEGF在结肠癌发展和转移过程中起着重要作用。

结肠癌患者的VEGF表达与淋巴结转移、分化程度明显相关，Glut-1表达与淋巴结转移、临床分期有关。

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（收稿日期：2019-03-20） （本文编辑：张爽）