大益菌方茶浓缩物的降血糖和降血脂作用研究

王红伟，吴梦媛，李双龙，陈丹丹，高林瑞，邱相君

普洱茶(Camelliasinensisvar.assamica)主要产于云南省的西双版纳，以地理标志保护范围内的云南大叶种晒青茶为原料，并在地理标志保护范围内采用特定的加工工艺制成，是具有独特品质特征的茶叶。按照加工工艺及品质特征，分为生茶和熟茶两种类型。 生茶是以茶叶鲜叶为原料，经杀青、揉捻、日光干燥、蒸压成型等工艺制成的紧压茶。熟茶是以云南大叶种晒青茶为原料，采用特定工艺、经后发酵(快速后发酵或缓慢后发酵)加工形成的散茶和紧压茶[1]。大益菌方茶属于普洱熟茶，在加工过程中经过渥堆优势菌株发酵而成。

目前已报道，高脂肪饮食会导致肥胖，普洱茶显著上调P-AMPK和抑制FAS，可能通过抑制脂肪酸合成发挥作用[2]。普洱茶提取物可抑制饮食性肥胖小鼠肝脏中有害、异位的新生脂肪生成，从而保护小鼠免受肥胖症的影响；普洱茶提取物显著降低高脂饮食小鼠的体质量和皮下脂肪组织[3]。

本研究通过建立高糖高脂小鼠模型，研究大益4种菌方茶对高脂高糖饮食导致的高糖高脂模型小鼠的治疗作用，以期为普洱茶的药用价值提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物健康雄性普通级昆明系小鼠220只，体质量18～22 g，动物合格证号：SCXK(鄂)2010-0007。将小鼠常规分笼饲养。

1.2 主要试剂和仪器大益菌方茶浓缩提取物A、B、C、D(云南大益微生物技术有限公司)；M-007全自动生化分析仪(深圳市科技有限公司)；超纯水仪器(成都优普科技有限公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 大益菌方茶浓缩物的制备取A、B、C、D大益菌方茶各1.0 kg，加入20 000 mL纯净水，加热至沸腾1 h。冷却后过滤，将滤液冷冻干燥，得菌方茶浓缩物。 A、B、C、D 4种菌方茶的提取率分别为：191、180、133、179 g·kg-1。

1.3.2 动物的分组为了评价大益菌方茶浓缩物的降糖降脂效果，将220只健康雄性小鼠随机分成7组；分别为正常对照组(normal control group，NC)、模型对照组(model control group，MC)、阳性对照组(positive control group，PC)和观察组(大益菌方茶浓缩提取物DYA、DYB、DYC、DYD组)。NC组给予正常基础饲料，MC组、PC组和观察组给予高糖高脂饲料[4]。建模8周。从第9周开始，观察组灌胃给予大益菌方茶浓缩提取物：DYA组0.318 g·kg-1、DYB组0.300 g·kg-1、DYC组0.222 g·kg-1、DYD组0.298 g·kg-1，PC组灌胃给予83.33 mg·kg-1二甲双胍和3.33 mg·kg-1洛伐他汀。

1.3.3 动物处理及标本采集在第8周末，NC和MC组分别取5只小鼠；然后分别在第11、13和15周，各组取10只小鼠。前一天晚上开始禁食，第二天早上量体质量后予10% 水合氯醛腹腔注射麻醉各组小鼠，剖开腹腔，经下腔静脉抽血，3 000 r·min-1离心10 min分离血清。用全自动生化分析仪检测血清中生化指标，剩余的血清样品在-80 ℃冰箱保存备测。用酶联免疫法检测血清胰岛素胰岛素浓度，用全自动生化分析仪检测血清中葡萄糖(glucose,Glu)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesferol,HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase, ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino transferase, AST)、总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、尿素(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatinine,Cr)的水平。

2 结果

2.1 大益菌方茶浓缩物对高血糖的影响在高脂饮食前，各组空腹血糖没有明显差异。随着高脂饮食的进展，在第8周时，与NC组相比，MC组血清Glu水平明显增高(P<0.01)，说明造模成功。大益菌方茶浓缩物干预后5～7周，能显著降低糖尿病模型大鼠空腹血糖水平，并接近正常值。与NC组和PC组相比，4个观察组血清Glu水平无明显差异。见表1。

表1 大益菌方茶对小鼠血糖的影响 mmol·L-1

2.2 大益菌方茶浓缩物对血清胰岛素的影响与NC组相比，MC组血清胰岛素水平显著降低，说明高糖高脂饮食小鼠机体产生了胰岛素抵抗。用二甲双胍和洛伐他汀的PC组，血清胰岛素水平升高。大益菌方茶浓缩物治疗后，能显著提高高糖高脂饮食小鼠血清胰岛素水平，并接近正常值。第15周各组的胰岛素水平见图1。

图1 大益菌方茶浓缩物对血清胰岛素的影响

2.3 大益菌方茶浓缩物对血脂的影响各项生化指标检测结果显示：与NC组相比，MC组的TC、TG、HDL-C显著升高，与MC组相比，PC组和4个观察组血清TC和TG水平明显降低(P<0.01)，HDL-C水平稍升高；与NC组和PC组相比，4个观察组血清TC、TG和HDL-C水平无明显差异。第15周各组血脂结果见图2。

2.4 大益菌方茶浓缩物对肝功能和肾功能影响的评价与NC组相比，MC组血清ALT、AST、BUN水平明显增高(P<0.01)，ALB和Cr变化不明显；与MC组相比，4个观察组血清ALT、AST、BUN水平明显降低(P<0.01)；与NC组和PC组相比，4个观察组血清肝功能和肾功能指标无明显差异。提示，高脂饮食可以增加血清ALT、AST和BUN水平，大益茶浓缩提取物可以使高脂饮食小鼠肝肾功能恢复正常。各组ALT和AST结果见图3。

图2 大益菌方茶浓缩物对血脂的影响

图3 大益菌方茶浓缩物对ALT和AST水平的影响(第15周)

3 讨论

高血糖是临床上常见的慢性疾病，近年来其患病率不断增高。目前，我国糖尿病患病人数已长时间居世界首位，并预计仍将持续较长一段时间[5]。血脂异常与心血管疾病、高脂血症、肥胖、低胆固醇血症、冠心病等多种疾病有关，其中大多数是对人体健康的巨大威胁。高脂血症是一种脂质代谢异常的疾病，是引发心脑血管疾病的主要原因之一[6]。糖尿病和高脂血症常常会合并发生，可进一步导致心血管病、肿瘤等相关疾病，复杂的病因机制也使其在当今多学科领域受到高度关注。

普洱茶是一种经过微生物发酵后的茶，长期以来一直因其对健康的预期益处而被食用[7]。这种茶在干燥和蒸制前经过采后发酵阶段，在此期间，微生物在味道、颜色和功能成分的生产中起着非常重要的作用。近年来，普洱茶及其成分因其潜在的健康效益而受到了广泛关注，如介导血脂代谢，降低心血管疾病和癌症风险，降低血清脂蛋白、TC和TG水平，增加HDL-C水平，并降低LDL-C水平[8]。普洱茶的有益健康作用归因于它所含的生物活性多酚。充分摄入普洱茶，通过调节脂肪酸代谢，可预防或减少体脂，可能降低与肥胖相关疾病的风险。长期摄入普洱茶对缓解肥胖和代谢综合征非常有益，普洱茶每日摄入可能比其他类似的茶饮料更具有安全抵抗饮食引起的肥胖和代谢综合征的优势[9]。另外，普洱茶被认为可有效地调节血脂和防止动脉粥样硬化，在无载脂蛋白小鼠中，普洱茶通过促进动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞的凋亡而阻碍动脉粥样硬化的进展[10]。

大益菌方茶是大益公司开发的普洱茶，在加工过程中经过渥堆优势菌株发酵而成。根据渥堆的菌株和数量的不同，分别开发出A、B、C、D 4种品种；经渥堆微生物发酵后，所含的茶多酚、益原素等含量发生改变，作用也明显不同。本研究结果显示：4个菌方茶均可明显降低高脂高糖饮食所致高血糖血脂小鼠模型的血糖水平，提高小鼠体内胰岛素水平，改善高血糖状态，对血脂也有调节作用，可以降低TC和TG水平，提高HDL-C水平，改善脂质代谢。