TKTL1在前列腺癌新辅助内分泌治疗前后的表达及临床意义

张保华，贾 勇，朱磊一

（青岛大学附属青岛市市立医院东院区泌尿外科，山东 青岛266071）

在世界范围内，前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤，也是男性癌症相关死亡的第二大原因［1-2］。前列腺癌是指发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤，病理类型上包括腺癌（腺泡腺癌）、导管腺癌、尿路上皮癌、鳞状细胞癌、腺鳞癌，其中前列腺腺癌占95%以上［1］。有学者［2-3］统计了2008年所有可用数据的国家的总体前列腺癌发病率，有近900 000例，其中大约有258 000人死于前列腺癌，接近30%的前列腺癌患者将死于这种恶性肿瘤。2017年前列腺癌在我国位列男性恶性肿瘤发病率的第6位，发病率随着年龄的增长而增长，高峰年龄是70～80岁［2］。前列腺癌的发生与遗传因素、性活动、饮食习惯等有关。前列腺癌早期常无症状，随着肿瘤的发展，前列腺癌主要表现为尿流缓慢、排尿不尽且费力、尿频尿急、甚至尿失禁等由于前列腺腺体压迫尿道而引起的进行性排尿困难；前列腺癌可侵及患者膀胱、精囊或血管神经束，从而引发患者出现血尿、血精、阳痿，严重者可发生骨转移，引起骨痛或病理性骨折、截瘫［3-4］。自从提出新辅助内分泌治疗的方法开始，前列腺癌的治疗已经从以前单一的治疗手段发展到今天多种治疗方式相结合的治疗策略，使得前列腺癌的治疗方式有了更多的选择［5-6］。新辅助内分泌治疗后对于降低肿瘤切缘的阳性率，降低前列腺特异抗原（prostate specific antigen，PSA）水平也已经得到了大家的共识。因此，早期及时地诊断前列腺癌患者体内的有效生物学标志物，对监测患者病情、给予合理的临床治疗及改善患者的预后十分重要。本研究旨在观察TKTL1在新辅助内分泌治疗前后的表达情况，以更好地评估新辅助内分泌治疗对于前列腺癌的临床作用。

材料和方法

1 资料收集

收集我院2010年1月至2017年10月穿刺确诊为前列腺癌的患者的石蜡标本共60例，其中新辅助内分泌治疗前后的标本全部来自于穿刺活检组织。所有研究对象均在根治术前行3个月标准内分泌治疗：诺雷得每支3.6mg，每次腹部皮下注射3.6mg，每隔28 d注射1次。康士得50 mg口服每天1次，连续治疗3个月。标本用10%甲醛溶液固定。本组病例年龄50～70岁，平均年龄64.2±9.8岁，肿瘤分期为II期，III期的各38例和22例，病理学分级根据TNM分期系统（2015年）。研究经本院伦理委员会批准，患者及家属签订知情同意书。

2 主要试剂及器械

PV-6000通用型二步法免疫组化检测试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司），兔抗人TKTL1单克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司），一抗羊非免疫血清（福州迈新生物技术有限公司），TKTL1染 色 采 用 的3，3-二 氨 基 联 苯 胺（diaminobezidin，DAB）色原、DAB底物、DAB缓冲液（X20）（福州迈新生物技术有限公司），磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline，PBS）缓冲液（pH7.2～7.4），0.01mol／L柠檬酸钠缓冲液（pH6.0），3%甲醇-H2O2溶液用30% H2O2和80%甲醇溶液配制，甘油和0.5mmol／L碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5），二甲苯，无水乙醇，75%乙醇，95%乙 醇，蒸 馏水，3% H2O2，18cm不锈钢高压锅。

3 免疫组织化学检测步骤

蜡块组织以4μm为标准连续切片，石蜡切片脱蜡、水化，自来水冲洗；将盛有乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）和玻片的烧杯置于沸水浴环境，保持外部沸腾状态1.5min，自然冷却至室温，切片上滴加羊非免疫血清一抗封闭，室温孵育10min。除去血清，滴加1：400稀释的二抗，室温下孵育60min，PBS冲洗3次，每次3min，除去PBS，切片上滴加DAB显色剂，自来水冲洗，终止染色，苏木素复染，封片剂固定。用以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。

4 免疫组织化学结果判断

TKTL1蛋白的表达主要位于细胞浆，阳性染色的标准为胞浆内出现棕黄色颗粒.高倍镜下，随机选取5个视野，每个视野所记细胞数均≥200个，同一组医师和护士完成实验和计数，按阳性细胞所占比例进行判定.以细胞中TKTL1染色比为评分标准：0%～20%为0分，21%～50%为1分，51%～80%为2分，大于80%为3分，分数≥2分被视作明显的过表达，并记录为阳性。

5 依据实体瘤疗效评价标准（RECIST）评定化疗药物的临床疗效

①完全缓解（complete remission，CR）：肿瘤持续1个月完全消失；②部分缓解（partial remission，PR）：肿瘤持续1个月体积缩小≥50%，且无其他病变扩展；③稳定（stable disease，SD）：肿瘤持续1个月25%≤体积缩小≤50%；④进展（progressive disease，PD）：肿瘤体积增大≥25%。患者应在4周后再次重新测量肿瘤病灶，有效率（ORR）＝完全缓解+部分缓解，疾病控制率（DCR）＝治疗有效率+疾病稳定率。

6 统计学处理

数据采用SPSS22.0软件处理，对数据行正态性和方差齐性检验，计量资料结果符合正态分布，计量资料结果用均数±标准差表示，采用单因素方差分析和t检验进行组间差异比较，采用卡方检验进行计数资料比较，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

结 果

1 新辅助内分泌治疗结果

新辅助治疗后，部分缓解36例，稳定11例，进展13例。患者临床治疗有效率为60.00%（36／60），疾病控制率为78.33%（47／60），患者临床治疗疗效较好（χ2＝9.358，P＝0.002）。

2 免疫组化结果

免疫组化结果显示，TKTL1在新辅助内分泌治疗后表达显著降低，差异具有统计学意义（P＝0.003），见表1和图1。

表1 免疫组化结果

图1 TKTL1免疫组化染色结果

3 TKTL1和前列腺癌关系

TKTL1和患者年龄、肿瘤直径大小无关，与患者肿瘤分化程度、有无淋巴结转移和TNM分期明显相关，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 TKTL1和前列腺癌关系

讨 论

前列腺癌患者的治疗方式主要是手术治疗和非手术治疗，非手术治疗又包括化学治疗和内分泌治疗等，新辅助治疗是指患者在手术前行内分泌治疗，以降低手术切缘阳性率，提高患者的生存率。TKTL1，又称转酮醇酶样蛋白1，是分离Xq 28中发现的一个新的转酮醇酶相关基因，位于绿色视觉色素基因和ABP-280丝素基因之间［5］。有研究［7-8］报道，TKTL1在多种恶性肿瘤中表达，如乳腺癌，膀胱癌癌，大肠癌，胃癌以及肺癌等。国外［9］报道，前列腺癌患者血清TKTL 1的表达降低。相关文献的报道显示了TKTL1与肿瘤的相关性，TKTL1可能成为肿瘤病情变化的潜在标志物。目前TKTL1在前列腺癌的表达情况国内尚无报道，因此，本文研究TKTL1在新辅助内分泌治疗前后的表达情况及与患者预后的关系。

本研究通过免疫组化的方法分析TKTL1在前列腺癌新辅助内分泌治疗前后组织中的表达量，TKTL1的表达情况与患者肿瘤Gleason分期存在明显相关，说明Gleason分期越高，TKTL1阳性表达越高与TSAUR等［10］研究结果相一致，说明TKTL 1的表达与肿瘤进展呈正相关。同时，TKTL1的表达情况前列腺癌与患者有无淋巴结转移和TNM分期明显相关，说明患者存在淋巴结转移时，TKTL1的阳性表达越高；TKTL1阳性表达与TNM分期明显相关；说明转酮醇酶（transketolase，TKT）及TKTL 1控制恶性肿瘤的的碳水化合物的糖酵解代谢增强过程，高表达TKTL 1促进磷酸戊糖途径（pentose phosphate pathway，PPP）允许葡萄糖参与核酸合成，葡萄糖降解为乳酸，以及氧化还原，TKTL 1表达的增加可能激活PPP，从而促进癌细胞的生长和存活［11-12］。同时，结果显示结果3个月的新辅助内分泌治疗，TKTL1在中高危前列腺癌组织中的表达情况降低，也进一步证实了新辅助内分泌治疗对前列腺癌组织的作用，诺雷得作为促黄体生成素释放激素（luteinizing hormone-releasing hormone-α，LHRH-α的一种类似物），能抑制脑垂体促黄体生成素的合成，从而降低男性血清睾丸酮。康士得（比卡鲁胺）属于非甾体类抗雄激素药物，与雄激素受体竞争性结合，从而抑制雄激素，改善前列腺癌的肿瘤发展，TKTL 1作为抑制肿瘤生长和转移的靶点，可能成为新的抗肿瘤治疗的靶点［13-14］。因此，本文认为TKTL1在新辅助内分泌治疗后表达的降低也进一步说明新辅助内分泌治疗的作用，可见，TKTL1在参与前列腺癌的进展中也发挥着巨大的作用，有望成为临床治疗的一个很有前途的抗肿瘤靶点。