自动免疫组化染色与人工染色对CerbB—2的影响

陈国艳+卢翔宇+陈莹莹+刘远欢

【摘要】目的：观察在全自动免疫组化染色和人工操作中对CerbB-2的影响。方法：选取34例乳腺癌免疫化组病例标本为研究对象，采用CerbB-2一抗，使用全自动免疫组化染色和人工操作两种方面进行免疫组化染色，对比试验结果，以此分析和探讨两种方法的优势和不足。结果：CerbB-2应用于全自动免疫组化染色和人工染色过程中，手工免疫组化染色结果背景浅、较强特异性、有边缘效应、着色不均、阳性定位不佳，而全自动免疫组化染色背景清晰、特异性较强、无边缘效应、着色均匀，且阳性定位准确，与手工免疫组化染色相比较，优势明显。结论：CerbB-2在全自动免疫组化染色和人工操作中应用，全自动免疫组化染色总体优势较多，标准化程度优良，提示全自动免疫组化染色可广泛应用于临床病理诊断。

【关键词】 CerbB-2；全自动免疫组化染色；人工操作；病理诊断

【中图分类号】R446.62 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）16-0090-03

Abstract： Objective To investigate the effect CerbB-2 application in automated immunohistochemical staining and manual operation. Methods 34 cases of breast cancer patients immunized samples for the study， using CerbB-2 antibody， immunohistochemical staining， comparative test results using automated immunohistochemical staining and manual two kinds of aspects， in order to analyze and explore the advantages and disadvantages of the two methods. Results CerbB-2 used in automatic and manual immunohistochemistry staining process， manual immunohistochemical staining background light， strong specificity， there are edge effects， uneven coloring， poor positive positioning and automatic immunity staining clear background， strong specificity， no edge effects， color uniformity， and the positive positioning accuracy compared with manual immunohistochemical staining， have obvious advantages. Conclusion CerbB-2 immunohistochemical staining in automatic and manual applications， automated immunohistochemistry overall benefit more excellent degree of standardization， prompt automatic immunohistochemical staining can be widely used in clinical pathology.

Keywords：CerbB-2； Automatic Immunohistochemistry； Manual Operation； Pathological Diagnosis

免疫组化技术是广泛应用于临床病理鉴别诊断的一种现代化科学手段，在评估肿瘤预后及耐药监测等诸多方面发挥着重要作用。但是在实际人工操作过程中，操作者个体手法、天气、环境、方法及时间等不可控制因素均会对检测结果产生影响，从而难以取得稳定的结果。全自动免疫组化染色仪的应用弥补了人工操作的不足，利于测定结果标准化，近些年来一些医院病理科也逐步将这项技术应用于临床[1]。基于此研究背景，本次研究分别采用全自动免疫组化染色和人工操作对检测标本进行免疫组化染色，对比试验结果，以此分析和探讨两种方法的优势和不足。现将本次研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年1月至2016年1月期间我院病理科收集的乳腺癌免疫化组病例标本（包括手术切除标本和活检小标本）共34例，均由Fish确定为++以上的病例，标本均为4μm的石蜡切片。

1.2 研究方法

1.2.1 仪器与设备 Benchmark GX全自动免疫组化染色仪、CerbB-2均由迈新公司提供，全自动免疫组化染色其余试剂均由罗氏公司提供，人工操作试剂全由迈新公司提供。

1.2.2 检测方法 每份标本切2张，厚3μm，分A、B组，65℃烤片1h。A组用BenchMark GX进行染色，一次20张玻片。具体操作如下：①打开电脑和机器，双击“ventana”，点击“PROTOCOLS”，选好染色方案，录入病理号，打印标签，将玻片贴好标签，放入机器的玻片操控台；②装上DAB试剂盒（由北京诺博莱科技有限公司供应）、苏木素（由上海宝曼生物科技有限公司供应）、靛蓝试剂瓶（由徐州诚裕玻璃制品有限公司供应）；③检查1号液（脱蜡清洗缓冲液）、2号液（封盖清洗缓冲LCS）、3号液（氯化钠柠檬酸钠清洗缓冲液）、4号液（清洗缓冲液）、5号液（细胞前处理清洗缓冲液）试剂量是否足够，废液瓶低水位。上述5种溶液均购于美国Fisher；④点击“Run”，填好玻片数，确定即可开始运行；⑤程序结束后，收齐玻片，用含少量洗洁精的自来水清洗玻片，再用自来水洗干净，常规脱水、透明封片。B组用人工操作进行免疫组化染色，常规脱蜡，柠檬酸盐微波热修复，Envision二步法，复染，镜下观察。

2 结果

切片染色结果显示：与手工免疫组化染色相比较，全自动免疫组化染色背景清晰，无边缘效应，着色均匀，且阳性定位准确，优势明显。对比情况详见表1及图1。

3 讨论

近些年来，免疫组化技术因其在良恶性肿瘤的诊断和鉴别中具有较高特异性、敏感性而受到重视，其深入研究和推广运用为临床疾病的诊断和治疗提供了强有力依据。但是随着免疫组化技术应用范围的拓延，及其它诊断技术的开发和运用，免疫组化标准化问题难以解决成为了阻碍其临床应用和发展的主要因素[2-3]。既往多数研究资料表明，免疫组化技术的实验结果极易受操作者个体手法、温度、天气、环境、方法及时间等外界因素的干扰、影响，从而出现试验误差，质量控制难以保证，且手工操作工作效率低，劣势明显[4-5]。

本次研究以常用诊断用抗体CerbB-2为一抗，分别采用使用全自动免疫组化染色和人工操作两种方面进行免疫组化染色。结果显示：手工免疫组化染色具有背景浅、较强特异性、有边缘效应、着色不均、阳性定位不准确的特点，而全自动免疫组化染色背景清晰、特异性较强、无边缘效应、着色均匀，且阳性定位准确，两者结果比较，全自动免疫组化染色优势明显，与肖刚等学者研究结果一致[6]。提示全自动免疫组化染色优势显著，标准化程度优良，可广泛应用于病理诊断临床。

笔者结合本次研究结果及多年临床工作经验，将全自动免疫组化染色仪的优势予以归纳总结。①Benchmark GX全自动免疫组化染色仪可由一台微主机附带多台子机[7-8]，设定标准化的染色流程，全自动运行，并可过夜处理，节省人力成本，提高工作效率，具有良好的重复性；②Benchmark GX全自动免疫组化机采用了独立温控技术，使每一个项目均可实现个性化的染色方案（同一轮染色可采用不同的抗原修复/一抗时间/温度等）；③Benchmark GX全自动免疫组化染色仪采用喷射式清洗技术，使每次清洗非常彻底，减少了非特异性着色。并且使用了液体封盖膜技术及空气涡流混匀技术，使试剂均匀的分布到整张玻片上，又因油膜的覆盖防止了试剂蒸发而干片的可能，从而减少了背景着色，提升了实验结果的准确性、可靠性；④它使用了环保型脱蜡液和LCS，不使用二甲苯等有毒试剂，极大减少对人体的伤害；⑤Benchmark GX全自动免疫组化染色仪除可进行全自动免疫组化染色，还可进行多种实验方案，如：ISH、DISH、FITC。由此可见，全自动免疫组化染色和人工染色相比较，前者运用优势更为显著；⑥全自动免疫组化染色仪切片染色结果无边缘效果、着色均匀。

近些年来，随着病理检测要求的提升，临床病理学对于病理检测结果的标准化和质量控制也提出了更高要求。2000年，国际标准化组织已经明确雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）免疫组织化学染色的质量体系，明确了临床病理诊断和疾病鉴别中的免疫组化技术的标准化要求。提升免疫组化技术的准确性和标准化对于CerbB-2在全自动免疫组化染色和人工操作中应用具有指导意义。

综上所述，与手工免疫组化染色相比较，CerbB-2在全自动免疫组化染色中的运用，染色背景清晰，无边缘效应，着色均匀，阳性定位准确，且较之于人工操作，具有省时省力及操作简便的优点，优势明显。在病理学界倡导标准化及质量控制的社会环境下，全自动免疫组化染色技术可作为临床病理诊断方法得以广泛运用。

参考文献

[1]刘华，宋兴华，莫明聪，等.中药健乳灵对乳腺不典型增生大鼠CerbB-2表达的影响[J].辽宁中医药大学学报，2014，16（01）：23-26.

[2]董芳莉，张雪.徕卡全自动免疫组化机和手工免疫组化的对比分析[J].临床合理用药杂志，2014，7（19）：141-142.

[3]杨艳丽.自动免疫组化染色仪与手工的对比研究[J].医药论坛杂志，2014，35（07）：84-85.

[4]王文勇，黄晓峰，王映梅，等.免疫组化技术标准化的探讨[J].细胞与分子免疫学杂志，2011，27（08）：927-929.

[5]黄利，华晓萍，张媛.抗原修复基于Roche免疫组化染色机对p-stat3、Vimentin阳性表达效果影响[J].中药药理与临床，2015，31（06）：205-207.

[6]肖刚，孙东良，刘志英，等.不同CerbB-2、ER表达乳腺癌组织中XIAP、Smac的表达及意义[J].现代预防医学，2013，40（22）：4150-4152.

[7]王秋苹.免疫组化手工法与自动染色机法的比较[J].诊断病理学杂志，2013，20（10）：662-663.

[8]张富琴，张玉兰，南海燕，等.全自动免疫组化染色仪的应用体会[J].诊断病理学杂志，2013，20（12）：799.

（编辑：程鹏飞）