婴幼儿支原体肺炎免疫球蛋白及T淋巴细胞亚群表达水平变化

冯伊利，罗会萍，李成军，王金国，李凤娟

(临海市第二人民医院 儿内科，浙江 台州 317016)

肺炎支原体(mycoplasma pneumonia，MP)是介于细菌和病毒之间的一种微生物，MP感染是一种全球性感染性疾病，主要通过呼吸道飞沫传播，是婴幼儿下呼吸道感染的最主要病原体之一[1]。由于婴幼儿免疫系统不完善，是MP感染的高危人群，易发生肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)，发生MPP后免疫功能会受到不同程度的影响[2]。免疫因素在MP引发机体损伤的过程中具有重要作用，但有关婴幼儿MP感染时的免疫功能变化相关研究还十分有限。本研究探讨婴幼儿肺炎支原体肺炎发病后的免疫功能变化情况，现将研究过程及结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2016年12月—2017年12月收治的MPP患儿68例为MPP组。纳入标准：符合《儿科学》(第6版)[3]中MPP诊断标准；经临床诊断无其他病原体感染；留取标本前1周，未使用免疫调节剂、糖皮质激素等影响免疫功能药物；家长知情同意。排除标准：自身免疫性疾病、先天性免疫功能缺陷病、支气管哮喘、肺结核、其他感染性疾病以及恶性肿瘤者。另外选取同期于我院进行健康体检的68例婴幼儿为对照组，无近期发热、感染及咳嗽病史，既往无慢性疾病史和免疫性疾病。MPP组中男38例，女30例；年龄2～34个月，平均12.9±5.9个月。对照组中男36例，女32例；年龄2～35个月，平均12.6±6.0个月。两组患儿一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。本次研究获医院伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集 分别在急性期MPP患儿抗感染治疗前(入院后2 h内)和应用大环内酯类抗生素治疗2～4周后(临床及影像学症状均显著好转)，采集静脉血3 mL。同时采集对照组静脉血3 mL。将所采集血标本平均分成2管，一管不抗凝，离心获得血清，用于补体、免疫球蛋白检测；另一管ETDA抗凝，用T淋巴细胞亚群检测。MPP急性期的诊断标准：明显气促或心动过速；应用大环内酯类抗生素治疗1周后无效(体温持续在38.5℃及以上)；肺部影像学资料显示大片状致密影。MPP恢复期的诊断标准：应用大环内酯类抗生素治疗1周及以上出现气促症状减轻；肺部影像学资料显示肺炎好转；患儿高烧消退(体温低于38.5℃)[4]。

1.2.2 补体、免疫球蛋白检测 采用ELISA法检测IgE，试剂盒为北京利德曼生化股份有限公司提供；采用免疫散射比浊法检测IgG、IgA、IgM、C3、C4，试剂盒为北京利德曼生化股份有限公司提供。严格按照厂家说明书操作。

1.2.3 T淋巴细胞亚群检测 取 CD3、CD4、CD8单抗各20 μL，加入抗凝全血50 μL，充分混匀，室温避光孵育15 min，于BD FACSCalibur流式细胞仪检测CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞百分比，同时计算得出CD4+/CD8+T比值。

2 结果

2.1 补体C3、C4水平 MPP组急性期补体C3、C4水平均显著低于MPP组恢复期和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 IgG、IgA、IgM、IgE水平 MPP组急性期IgA、IgM水平均显著高于MPP组恢复期，对照组IgE水平显著低于MPP组急性期和MPP组恢复期；差异均有统计学意义(P<0.05)。三组血清IgG水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1 三组补体C3、C4水平比较(g/L)

注：*与MPP组恢复期比较，P<0.05；▲与对照组比较，P<0.05。下同。

表2 三组IgG、IgA、IgM、IgE水平比较

2.3 T淋巴细胞亚群比例 MPP组急性期CD4+T和CD4+/CD8+T均低于对照组和MPP组恢复期，CD8+T高于MPP组对照组和MPP组恢复期；差异均有统计学意义(P<0.05)。三组CD3+T比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 三组T淋巴细胞亚群比例比较

3 讨论

MPP是婴幼儿常见肺炎，目前对其确切的发病机制还不十分清楚，其中免疫功能紊乱学说、MP直接侵入学说及上皮细胞吸附是当前接受最为广泛的解释机制[5]。既往大量临床研究显示，体液免疫和细胞免疫在 MPP 发生、发展过程中变化明显，提示体液免疫和细胞免疫在MPP的发病过程扮演重要角色[6-7]。本研究主要对MPP急性期和恢复期体液免疫和细胞免疫变化进行分析。

B淋巴细胞是一种体液免疫的要细胞，可分泌IgM、IgG、IgA以及补体 C3、C4等[8-9]。本研究结果显示，健康婴儿和支原体肺炎恢复期患儿的补体C3、C4水平均显著高于支原体肺炎急性期患儿；IgA、IgM水平对比，肺炎支原体肺炎急性期患儿显著高于恢复期患儿；表明在 MPP 感染急性期血清补体C3、C4及IgA、IgM显著上升，在进入恢复期后随之下降， IgG则变化不明显。因此，在MPP患儿急性期和恢复期时免疫功能均存在紊乱变化。同时，这也表明在MP感染后，患儿机体发生了针对免疫复合物的炎症反应，在有效杀灭MP的同时，也对自身器官产生一定的损害作用。大量研究证实在MP感染后容易造成气道高反应性，这可能与机体产生高水平的IgE，诱发I型变态反应有关[10-12]。IgM、IgG、IgA等免疫球蛋白的主要生物学特性是，与相应的抗原特异性结合，激活补体，促进吞噬功能，并对毒素及多种病原微生物具有抑制作用，当炎症发生后机体内的IgM、IgG、IgA等表达水平有不同程度的升高[13]。

T淋巴细胞按表型不同可分为CD3+、CD4+和CD8+等亚群，其中CD3+T数量反映机体参与免疫应答的免疫活性细胞数量；CD4+为辅助性T细胞，其功能是促进B淋巴细胞分泌抗体，参与体液免疫的调节和CD8+细胞增殖、活化的调节；CD8+是一种杀伤性T细胞，其在病毒等病原体的清除过程中发挥重要作用[14]。有研究表明，宿主感染MP后产生异常的细胞免疫反应在MPP发病机制中起了更为关键的作用，主要表现为支原体于气道上皮细胞表面黏附,释放毒素,易影响宿主免疫系统,诱发免疫系统改变[15]。本研究结果显示，MPP组急性期CD4+T细胞下降，CD8+T细胞上升，CD4+T/CD8+T比值降低，表明MP感染患儿细胞免疫功能受损，经有效治疗后细胞免疫功能逐渐得到恢复。CD3+T细胞属于成熟 T 淋巴细胞的典型性标志，CD4+T细胞属于辅助性 T 淋巴细胞的特征性标志，CD8+T细胞属于细胞毒 T 淋巴细胞，CD4+T/CD8+T反应细胞免疫系统功能的强弱，当机体受到病原体感染后，机体中细胞免疫系统被激活，产生的免疫因子对大量的病原体进行清除，进而机体损失大量的免疫因子，致使细胞免疫功能异常受损[16]。国内外多位学者的研究表明，MPP组急性期CD8+T细胞升高，CD4+T细胞降低，CD4+/CD8+比值降低，认为MP感染患儿免疫功能受损[17-18]，这与本研究结果一致。

综上所述，婴幼儿MPP急性期体液免疫和细胞免疫功能均存在明显的紊乱，且在MPP恢复期免疫功能仍有一定的问题。因此，在对MPP患儿对症治疗的同时，适度进行免疫调节治疗对于提高患儿治愈率具有重要意义。