2018年安徽省部分地区A型禽流感流行率横断面研究

刘 华 ，何长生 ，占松鹤 ，陈 曦 ，朱良强 ，陈海林 ，祁克宗，郑 举，沈 艳，周迎春，王 倩，王 维，王 军

（1. 安徽省动物疫病预防与控制中心，安徽合肥 230061；2. 安徽省兽医病理生物学与疫病防控重点实验室，安徽合肥 230036；3. 安徽省畜牧兽医局，安徽合肥 230001）

禽流感（Avian In fluenza，AI）是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病，最早于100多年前报道于意大利，此后在世界各地不断报告发生[1]。A型禽流感病毒（AIV）中有15种亚型能感染禽类，其中部分H5和H7亚型具有高致病性，并可感染人类[2-3]，因此世界动物卫生组织（OIE）将高致病性禽流感（HPAI）列为必须通报的动物疫病，我国将其列为一类动物传染病。安徽省曾发生过多起H5N1亚型HPAI疫情，也曾分离出2013年全球首株H7N9流感病毒。安徽省水网湖泊众多，水禽养殖密度大，候鸟和家禽接触频繁，而且活禽交易规模大、分布广，再加上本地人有喜食现宰活禽的消费习惯，因而更增加了该地区活禽和人类感染AIV的风险。为了解安徽省A型AIV感染情况，掌握全省高风险区AIV的分布现状，找出重点防控环节，2018年4—5月，在安徽省高风险区域开展了A型AIV检测，检测范围覆盖了养殖场、活禽交易市场、农贸市场、屠宰场以及散养户等多个场点，以期为安徽省AI防控方案的制订提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 目标群

根据往年国家参考实验室对安徽省的AI监测阳性结果，选择宿州、阜阳、合肥、六安、滁州、宣城、芜湖等7个市作为本次研究的重点监测区域，将这7个市的家禽作为目标群。

1.2 抽样策略和样本量

采取先抽取群体，再抽取个体的抽样策略。用估计流行率方法，预设13%的群体流行率（p），95%置信水平（CL）和5%可接受误差（d），根据公式N=1.962×p(1-p)/d2计算，共需抽检174个场群。参考安徽省畜牧兽医局统计数据，根据种禽场、商品蛋禽场、商品肉禽场、活禽流通场所（包括批发、零售和屠宰场）、散养禽等各种类型场点的比例，对需抽检的场群进行数量分配，并随机选场。在每个群内，按照估计流行率方法，预设个体流行率为10%、置信水平95%和可接受误差10%，随机采集35份个体样品。

1.3 样品采集和检测

用棉签在养殖场内随机采集家禽咽喉/泄殖腔双拭子35份；在活禽批发/零售市场采集5个档口或摊位，每个采5份家禽双拭子，同时在每个市场采10份环境拭子，在屠宰场采集家禽双拭子25份和环境拭子10份，在每个自然村采集散养家禽双拭子35份。

将背景信息相同的5份样品混合成1份混样，用A型AIV荧光RT-PCR试剂盒进行检测，只要检测到1份混样为A型通用型AIV核酸阳性，则该样品所在的场点就被定义为A型AI阳性场点。对A型阳性样品，再用H5/H7二重核酸荧光RTPCR试剂盒进行分型检测。所有RT-PCR试剂均为深圳澳东检验检测有限公司产品。

1.4 数据分析

1.4.1 群体流行率 用黄保续等[4]的方法，对分层得到的阳性率直接标准化计算，并与检测试验敏感性（Se）、特异性（Sp）、群体内个体抽样的数量（n），带入公式 HSe=1−[1−p×Se−(1−p)(1−Sp)]n和 HSp=Spn，HTp=(HAp+HSp−1)/(HSe+HSp−1)，计算出群敏感性（HSe）和群特异性（HSp）和群体真实流行率（HTp）。群体流行率的95%置信区间（CI）根据公式计算：，其中Z为正态分布中概率为0.05所对应的值1.96，N为群体抽样数量。

1.4.2 个体流行率估计 根据混合样品检测结果，用Epitools流行病学在线计算器估算个体流行率[5-6]。

2 结果

2.1 A型AIV流行率估计

根据安徽省7市种禽场、商品蛋禽场、商品肉禽场、活禽批发市场、农贸市场、屠宰场、散养禽等各层所占比例，将各层阳性率按所占比例进行加权计算。结果显示，安徽省7市A型AIV群体表观流行率为13.9%，标准化率为14.1%（95%CI：10.9%～17.4%）。

根据A型AIV荧光RT-PCR诊断试剂盒的试验敏感性（Se=99%）和特异性（Sp=99.9%），计算出HSe=99.2%，HSp=96.6%，得到安徽省7市A型AIV群体真实流行率为11.2%（95%CI：6.5%～15.8%）。

表1 安徽省7市A型AIV场群抽样数据和群体流行率

个体水平，共采集咽 / 喉泄殖腔棉拭子样品6 050份；将5份背景信息相同样品混合，共得到了1 210份混样，检测发现71份混样为A型AIV核酸阳性。用Epitools流行病学计算器，算得个体流行率为1.2%（95%CI：0.9%～1.5%）。

表2 不同场点类型A型AIV个体抽样数据和个体流行率

2.2 空间分布

在安徽省北部、中部和南部，随机选择了7个市15个县（市、区）进行抽样检测。检测结果显示，7个市11个县（市、区）均检出A型AIV核酸阳性（图1）。

2.3 群间分布

图1 安徽省7市A型AIV横断面研究采样场点与阳性点

2.3.1 不同类型场群 140个养禽场中，检出4个A型AIV核酸阳性，分别是1个种禽场（1/21）、2个蛋禽场（2/49）和1个肉禽场（1/70），场阳性率为2.9%，经Fisher精确检验，检出阳性率差异不显著（P＞0.05）。25个活禽交易场所中，批发市场（3/4）和农贸市场（17/21）A型AIV核酸阳性率较高，分别为75.0%和80.9%，经Fisher精确检验，两者检出阳性率差异不显著（P＞0.05）。2个活禽屠宰场和6个自然村散养户均未检出A型阳性。对养禽场、活禽市场、屠宰场和散养村户的阳性率进行两两比较，经Fisher精确检验，发现活禽市场与养禽场的差异有统计学意义（P＜0.01），活禽市场感染A型AIV的风险是养禽场的136倍（OR=136，95%CI：32.7～549.4）。

2.3.2 不同样品来源 140个养禽场中，3个鸡场（3/110）和1个鸭场（1/13）被检出阳性，鹅场未检出阳性（0/17），经Fisher精确检验，鸡场和鸭场间的检出阳性率差异不显著（P＞0.05）。混合样品阳性率分别是鸡0.8%（6/770）、鸭1.1%（1/91）、鹅0（0/119），经Fisher精确检验，检出阳性率差异不显著（P＞0.05）。活禽市场中，混合样品阳性率分别是鸡39.1%（34/87）、鸭39.3%（11/28）、鹅50.0%（2/4）、鸽子66.7%（2/3），经Fisher精确检验，检出阳性率差异不显著（P＞0.05）。 环境样品检出率为37.5%（3/8），农贸市场为45.2%（19/42），经Fisher精确检验，检出阳性率差异不显著（P＞0.05）。具体检测结果见表3。

表3 A型 AIV 群间分布情况

2.4 病毒分型

对A型AIV核酸阳性的样品，进行H5和H7亚型分型，发现H5和H7亚型均呈阴性。

3 讨论

此次横断面研究发现，A型AIV个体流行率较低，但群体感染率较高，真实流行率为11.2%（95%CI：6.5%～15.8%），从空间分布看，没有地域上的差异，表明A型AIV在这些地区分布十分广泛。

从群间分布看，活禽交易环节的检出率较高，养殖环节、屠宰环节较低。在养殖环节，种禽、蛋禽、肉禽场中均有检出，但差异不显著，鸡、鸭、鹅、鸽子中的检出阳性率也没有显著差异，说明A型AIV感染没有养殖场点类型和家禽种类的差异。活禽交易环节的AIV感染风险比其他环节高，这与国内诸多省份的检测结果一致[7-11]。

2004年开始，我国对H5亚型AI实行强制免疫，2017年又决定对H7N9亚型实行强制免疫[12]。2017年下半年，安徽省将重组（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）用于秋季强制免疫。本次检测的H7亚型病毒呈核酸阴性可能与之有关。陈化兰院士团队的研究结果显示，鸡接种（H5+H7）二价灭活苗前后，H7N9亚型流感病毒分离数量由306株下降至15株[13]。此外，在H7N9亚型疫苗投入使用后，全国人间感染病例数量显著下降，安徽省尚未见人间病例报道。这都表明疫苗免疫在阻断H7N9病毒向家禽和人的传播中起到了关键作用。

虽然本次检测未检出H7亚型病毒，但2017年8月滁州市曾报道在养殖环节发现H7N9变异株感染鸡的病例，因此建议按照《全国家禽H7N9流感防治指导意见（2018—2020年）》要求，继续加大监测力度。H9N2病毒虽然是低致病性的，但有研究显示，其在A型流感病毒向人传播中扮演重要角色[14-16]。鉴于此，下一步将对A型AIV核酸阳性样品进行H9亚型病毒检测。本次检测发现，活禽市场环境样品的AIV检出率较高，因此建议加强活禽市场监管，按照农业农村部防治指导意见，落实好“1110”制度（一日一清洗、一周一消毒、一月一休市、过夜零存栏），有条件的地方，应积极推行冰鲜上市，降低病毒在活禽交易环节的传播风险。

4 结论

本次检测发现，A型AIV在养殖和交易环节存在一定污染，而在活禽交易市场的污染更为严重，是今后AI防控的重点，需继续加强活禽交易市场的管理和消毒灭源工作。