2017年安徽省合肥市禽流感抗体检测

钱昌银，程晓峰，刘 华，何长生，占松鹤

（1. 合肥市动物疫病预防控制中心，安徽合肥 230091；2. 安徽省动物疫病预防与控制中心，安徽合肥 230091）

高致病性禽流感（HPAI）是困扰全球养禽业发展的主要禽病之一，被世界动物卫生组织（OIE）列为法定通报动物疫病[1-2]，被我国列为一类动物疫病，其中H5亚型HPAI被我国列为强制免疫和监测病种之一[3]。2017年上半年，全国多地发生由H7亚型流感病毒变异株（高致病性毒株）引发的疫情，为此农业农村部将H7亚型（H7-Re1株）与H5亚型（Re-8株）一并纳入强制免疫范围[4]，使用重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）（以下简称H5+H7二价苗）进行秋季集中免疫。为评价该疫苗的免疫效果，从合肥市所辖11个县（市、区），随机选50个场群，采集家禽血清样品集中进行H5和H7亚型抗体检测，以便为决策部门防控措施的制订提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 抽样策略

按照安徽省农委《关于印发2017年全省动物疫病监测与流行病学调查计划的通知》（皖农牧〔2017〕56号），采用估计免疫抗体阳性率方法，设预期免疫抗体合格率85%、可接受误差10%，在95%置信水平下，计算出理论上需采集49个场群。结合合肥市实际，在所辖的11个县（市、区）随机抽取了50个场群，包括32个养殖场、10个活禽市场和8个自然村散养禽。对场群，按照场群类型和规模大小[5]，采用系统抽样法，在大型养殖场抽取80份个体，在中小规模场抽取30份，在活禽市场抽取15份，在每个自然村抽取散养禽10份。

1.2 样品采集

翅静脉采血，每份约2 mL，自然凝固析出血清，2 500 r/min离心备检。

1.3 检测试剂

H5亚型禽流感病毒（Re-8株）血凝抑制试验抗原（批号2016007）、H7亚型流感病毒（H7N9株）血凝抑制试验抗原（批号2017002）：均为哈尔滨维科生物技术开发公司产品。

1.4 试验器材

单道、多道移液器，90°96孔V型微量反应板，微量振荡器，低速离心机，等等。

1.5 检测方法与判定标准

按照GB/T 18936—2003，采用血凝（HA）与血凝抑制（HI）试验，检测禽流感免疫抗体。个体HI抗体效价≥24，判为个体合格，群体免疫抗体合格率≥70%，判为群体合格[6]。H5和H7群体免疫抗体合格率均≥70%，判为合格场群。

1.6 数据统计

用Excel软件进行数据整理，用SPSS 20统计软件，对相关结果进行卡方检验和Fisher氏确切检验。

2 结果

2.1 整体情况

50个场群中，使用（H5+H7）二价灭活疫苗的场群占64.0%（32/50）；H5亚型群体免疫抗体合格率≥70%的38个，场群合格率为76.0%（38/50），H7亚型群体免疫抗体合格率≥70%的25个，场群合格率为50.0%。共采集家禽血清样品1 670份，检出H5亚型抗体合格样品1 442份，个体合格率为86.3%（1 442/1 670）；检出H7亚型抗体合格样品993份，个体抗体合格率为59.5%（993/1 670）。具体结果见表1。

表1 2017年秋季合肥市禽流感抗体采样检测情况

由表1可见，养殖场的H5、H7亚型个体免疫抗体合格率均高于活禽市场和散养户，差异有统计学意义（P＜0.01），但三者的场群合格率差异没有统计学意义（P＞0.05）。

2.2 不同类型疫苗抗体合格率比较

50个场群中，免疫（H5+H7）二价灭活疫苗的32个，H5/H9亚型疫苗的1个，H5三价疫苗的8个，H7/H9亚型疫苗的3个，没有免疫的6个（表2）。不同类型疫苗的H5和H7个体抗体合格率差异极显著（P＜0.01），但场群合格率没有统计学意义（P＞0.05）。

将未免疫禽流感疫苗和使用其他亚型疫苗的场群进行合并计算，然后与使用（H5+H7）二价灭活疫苗的场群进行比较，发现使用（H5+H7）二价灭活疫苗场群的H5、H7个体免疫抗体合格率均达70%以上，分别比未使用的高出20和46个百分点，且有统计学意义（P＜0.01），H5、H7亚型抗体合格率均达到70%的合格场群占59.4%（19/32），比未使用的高出约32个百分点，差异显著（P＜0.05）。不使用（H5+H7）二价灭活疫苗导致禽流感H5和（或）H7群体免疫抗体率低于70%的风险是使用该疫苗的3.8倍（OR=3.8，95%CI：1.1～13.0）。

表2 不同类型禽流感疫苗免疫抗体检测结果

2.3 群间分布

从不同家禽种类看，鸡和鸭的H5亚型个体免疫抗体合格率分别为86.1%、91.4%，差异没有统计学意义（P＞0.05）；H7亚型分别为62.1%和0，经Fisher氏确切检验，差异极显著（P＜0.01）。鸡全部合格的场群占50%，鸭的为0，没有统计学意义（P＞0.05）。详细检测结果见表3。

表3 不同家禽种类禽流感免疫抗体检测结果

2.4 空间分布

对11个县（市、区）的样品进行统计，发现不同地区的免疫抗体合格率并不均衡，肥西县、经开区和长丰县的H5和H7亚型免疫抗体合格率均达到了70%以上，而庐阳区、蜀山区、新站区的H5免疫抗体合格率偏低，没有检测到H7亚型抗体（表4）。

3 分析与讨论

2017年 秋季开始，全国要求统一用（H5+H7）二价灭活疫苗，替代重组禽流感病毒H5二价或三价灭活疫苗对家禽实施免疫[4]。合肥市参考农业部推荐的免疫方案，对辖区内家禽进行了免疫。但从调查问卷统计结果看，场群免疫密度未达到100%，电话回访发现种禽场和蛋禽场遵循本场的免疫程序，未按要求及时更换（H5+H7）二价灭活疫苗。从空间分布看，11个县（区）中，只有3个县（区）的H5和H7个体免疫抗体水平全部达到农业农村部要求，因此建议未达标的县（区）及时开展免疫情况普查，向有关养殖企业宣传“先打后补”政策，鼓励企业使用政府采购疫苗，并对散养户及时进行补免。

表4 各县（市、区）禽流感免疫抗体检测结果

从个体免疫抗体合格率看，未使用（H5+H7）二价灭活疫苗或使用其他类型禽流感疫苗的场群，其H5亚型群体免疫合格率虽达到了70%的标准，但H7亚型未达标；而使用了（H5+H7）二价灭活疫苗的场群，其H5和H7亚型个体免疫抗体合格率均达到了70%，这与杨泽林等[7]的研究结果相一致。风险分析也表明，不使用（H5+H7）二价灭活疫苗致使H5和（或）H7个体抗体合格率达不到70%的风险较高，说明（H5+H7）二价灭活疫苗在临床使用后产生的免疫保护效果是可靠的。

从动物种类看，鸡免疫抗体，特别是H7亚型个体免疫抗体合格率比鸭的明显高。这可能是由不同疫苗毒株的免疫原性差异导致的，或者是因为鸡、鸭个体对疫苗免疫应答存在差异，具体原因尚需进一步探讨。

本次检测由于抽样时选择的场点较少，而且在进行个体抽样时没有进行随机抽样，因此对不同场群、不同动物和不同县区间的场群免疫合格率的估计没有统计学意义。但是，本次检测初步了解了合肥市H5和H7亚型免疫抗体的整体水平，对进一步开展禽流感强制免疫工作提供了参考。

4 结论

本调查在合肥市随机选取50个场群，采集1 670份血清进行H5和H7亚型流感HI抗体检测，发现使用（H5+H7）二价灭活疫苗免疫的场群，其H5、H7亚型个体免疫抗体合格率均达到70%以上；而不使用该疫苗的场群，其H7亚型个体免疫合格率未达到70%，导致H5和H7亚型免疫抗体不合格的风险是使用此疫苗的3.8倍。检测结果表明，（H5+H7）二价灭活疫苗免疫效果较好，可以达到免疫抗体保护水平，建议对群体抗体不合格的养殖场户进行补免。