山东省莱州市一起绵羊大肠杆菌感染的暴发调查

范庆红

（山东省莱州市畜牧兽医站，山东莱州 261400）

大肠杆菌为条件致病菌，在诱因存在的情况下，容易引起继发感染。羊大肠杆菌病在羊群中较为多发，是目前养羊业的常发疾病之一[1-3]。霉菌毒素是大肠杆菌感染的重要诱因之一，在养殖业中较为常见[4-6]，尤其是黄曲霉毒素。黄曲霉毒素会影响淋巴细胞活性，导致动物机体出现免疫抑制[7]，因而继发其他疾病。

2018年6月18日，山东省莱州市某养羊场报告，该场全群羊表现精神不振、食欲减退、腹泻等症状，个别母羊流产，部分发病羊羔死亡。为确诊疫情，查找引发疫情的原因，莱州市畜牧兽医站在接到报告后，组织人员到现场开展了本次暴发调查。

1 方法

1.1 病例定义

1.1.1 可疑病例 2018年6月以来，该羊场中出现眼精神不振、食欲减退、腹泻、流产或死亡的羊只。

1.1.2 确诊病例 采集可疑病例肝脏等组织，经实验室分离鉴定出大肠杆菌的羊只。

1.2 现场调查

与养殖场场主、饲养员进行座谈交流，收集羊场基本信息、羊调入调出情况、疫病发生过程、周边养羊场分布情况、饲料来源、人员进出管理情况、发病后采取的控制措施；查阅羊场的羊只历史发病死亡记录，现场查看羊群临床症状以及青贮饲料和精饲料储存情况；对死亡羔羊进行病理解剖，并采集肝脏组织样品送实验室检测。

1.3 实验室检测

将采集的肝脏组织样品进行大肠杆菌、梭菌和沙门氏菌等可疑致病菌的分离鉴定，并对分离菌株采用药敏纸片扩散法[8]进行药敏试验。

1.4 数据分析

用Excel进行数据收集、整理和分析，绘制疫病流行曲线。

2 结果

2.1 羊场基本信息

该场建于2013年6月，位于一座小山上，离交通主干道和居民区较远，周围5 km范围内没有其他养羊场。羊场建有2栋羊舍，相距8 m，每栋面积270 m2，栋舍内划分4栏。羊场入口处有消毒池，但是没有消毒液，生活区和生产区没有设置物理隔离，管理者和饲养员可随意走动，外来车辆和人员可随意进出。羊场场区布局见图1。

该羊场为自繁自养场，存栏绵羊420只，其中成年羊约300只；羊群不分阶段饲养，以青贮饲料饲喂为主。该羊场接种的疫苗包括口蹄疫、小反刍兽疫和羊“三联四防”疫苗，前两种为政府招标疫苗。

现场察看发现，青贮饲料池排水不畅，青贮饲料色泽发暗，可闻到一股轻微的臭味和霉味。

图1 发病羊场场区布局示意图

2.2 发病经过

6月8日，部分羊只出现精神不振、采食量下降以及拉稀等情况，但并未引起场主关注；6月11日，出现首只羔羊死亡，随后每天都有羔羊死亡；6月13日，出现1只母羊流产，随后场主开始对所有拉稀羊只注射痢菌净，但效果不明显，每天仍有羔羊死亡，6月15日又有1只母羊发生流产；6月18日，进行现场调查；6月19日，根据药敏试验结果，选用环丙沙星进行干预治疗，随后疫情有所控制，羔羊死亡数量开始下降；6月23日后，电话回访，再无死亡病例出现。整个疫病发生期间，从空间分布看，2栋羊舍普遍发病；从群间分布看，不分年龄和性别，整个羊群基本都出现临床症状，袭击率接近100%，共死亡羔羊21只，病死率为5.0%。根据羊场死亡羊只情况绘制的流行病学曲线见图2。

2.3 临床观察及病理剖检

全群羊精神不振、食欲下降、体温升高、被毛粗乱、不愿活动，部分羊只可视黏膜黄染或苍白，消瘦，腹泻后体温下降，粪便稀，呈半液状，或有气泡，或混有黏液和血液。

现场剖检3只病死羊和1只病重羊，可见肠黏膜充血、水肿或出血，肠内混有血液和气泡，肠系膜淋巴结肿大，切面多汁、外翻；腹腔和心包积液，内有纤维素样渗出物；肝脏肿大，表面有坏死灶，肺脏肿大，局部有肉样病变，表面有灰白色坏死灶。

图2 发病羊场羔羊死亡流行病学曲线

2.4 实验室检测

无菌采集4只剖检羊及后续4只死亡羊只的肝脏组织病料，送至莱州市动物疫病预防控制中心实验室进行细菌分离鉴定，结果在8只羊的肝组织样品中均分离出大肠杆菌（麦康凯培养基下出现红色、圆形、扁平、隆起、表面光滑、边缘整齐的大菌落，见图3），均未分离到梭菌和沙门氏菌。

图3 实验室检测结果

将这些分离到的大肠杆菌菌株用痢菌净、恩诺沙星、强力霉素、氟苯尼考、庆大霉素、克林沙星、磺胺二甲基异嘧啶、头孢替坦、环丙沙星、多西环素、呋喃唑酮等药物进行药敏试验，发现这些菌株对痢菌净、恩诺沙星、强力霉素、氟苯尼考、庆大霉素和磺胺二甲基异嘧啶均表现出一定的耐药性，而对克林沙星、头孢替坦、环丙沙星和呋喃唑酮较敏感。

3 病因分析

结合该场发病羊只发病的流行病学特征、临床症状、病理剖检变化及实验室检测结果，推断引起该羊场羊群发病死亡的原因为大肠杆菌感染。大肠杆菌感染通常需要一些诱因，如极端天气、羊群运输、羊群拥挤、羊舍空气污浊、饲料霉变、其他传染病等。现场调查发现，该羊群为自繁自养，无调入和调出情况，羊设宽敞，无拥挤，空气良好，但发现该羊场青贮饲料存在发霉情况；查阅当地天气资料发现，5—6月莱州市无极端天气出现，但5月份降雨9 d，6月份降雨4 d，雨水相对较多。综上判断，饲料霉变引起羊群霉菌毒素中毒是最可能的诱因。

4 干预措施

根据病因分析，建议该羊场立即停喂霉变青贮饲料，更换为优质饲料，对全场进行全面卫生清理和消毒。根据药敏试验结果选用环丙沙星肌注，对出现腹泻的羊只和带仔母羊连用5 d，对新生羊灌服0.2～0.3 g胃蛋白酶；对于症状较重的羔羊静脉注射环丙沙星、5%葡萄糖注射液和维生素C制剂。采取干预措施后每天回访，6月22日全群基本恢复健康，6月23日后无死亡病例出现，表明干预措施效果较好，也验证了病因假设。

5 讨论

由于县级动物疫病预防与控制中心实验室比较简陋，本次调查过程中虽然用鉴别培养基分离出大肠杆菌，通过药敏试验筛选出了敏感药物，并取得了较好的干预效果，但并未对大肠杆菌进行血清型分型鉴定，导致调查结果缺乏严谨性；另外青贮饲料霉变只是根据现场观察和嗅觉推断的，未送样到实验室开展霉菌检测，因此并不能完全确定该诱因。

另外，在调查过程中发现，该羊场在疫病防控中存在不少问题，比如，羊场主生物安全意识较差，外来人员可以随意进出生产区，饲料质量安全监管不严，不注意科学用药，忽视消毒工作，对病羊不实施隔离，等等。这些问题都会给羊场带来发病风险，今后应予以改善。