河北省部分地区规模化养殖场羊口蹄疫3ABC抗体检测

安 琪，杨路达，赵兴华，张 铁，胡 满，王建昌，张若曦，李睿文 ，4，李丽敏 ，4，孙继国 ，4，袁万哲 ，4

（1. 河北农业大学动物医学院，河北保定 071001；2. 河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心，河北石家庄 050051；3. 河北省动物疫病预防控制中心，河北石家庄 050035；4. 河北省兽医生物技术工程技术研究中心，河北保定 071001）

口蹄疫（FMD）是一种高度接触性传染病，是世界动物卫生组织（OIE）规定的须通报动物疫病。FMD的控制和消灭策略包括疫苗免疫和扑杀可疑畜群，而可疑畜群又包括感染发病动物和带毒动物[1]。我国现阶段预防FMD主要通过疫苗接种，诱导动物机体产生口蹄疫病毒（FMDV）结构蛋白抗体。而动物感染 FMDV 后，既能产生结构蛋白抗体，又能产生非结构蛋白抗体，因此检测动物体内的非结构蛋白抗体可区分感染动物和疫苗免疫动物。2000年，用 3ABC 蛋白做抗原的 ELISA 试验被OIE推荐用于诊断 FMD，以区分 FMDV感染抗体和疫苗免疫抗体[2]。为了解河北省羊群FMDV自然感染情况，2018年5月应用单抗阻断ELISA方法，对河北省11个羊场随机采集的354份血清样品进行了FMDV 3ABC抗体检测。

1 材料与方法

1.1 血清样品

选取河北省5个地市的11个规模化羊养殖场（存栏量均大于100只），在每个羊场随机采集健康羊血样，每个采样场点采集数量不少于30只，包括羔羊、育成羊、种用羊等，且公母各半。所检羊场的羊均按照FMD免疫程序执行过免疫。

1.2 试验试剂

口蹄疫病毒3ABC单抗阻断ELISA抗体检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，批号为20180511129、20180125129。

1.3 血清采集

用10 mL的一次性注射器，每只羊采集5 mL血液，冷藏保存；用一次性离心管收集离心后的上清液，−20 ℃保存备用。

1.4 检测与结果判断

具体操作步骤和判定标准严格按照口蹄疫病毒3ABC单抗阻断ELISA抗体检测试剂盒说明书执行。

2 结果与分析

2.1 不同地区

5个地市的3ABC抗体阳性率高低不同，为0～15.65%。其中，秦皇岛市阳性率最高，为15.65%，其次是保定市、邢台市，分别为11.11%、2.86%，其他2个地区未发现阳性羊只，呈现由南到北逐渐升高的趋势（表1）。

表1 不同地区的羊口蹄疫3ABC抗体统计结果

2.2 不同饲养阶段

随着羊年龄的增长，3ABC抗体阳性率逐渐上升，羔羊、育成羊、种羊阳性率依次为6.53%、10.75%、16.82%（表2）。

表2 不同饲养阶段的羊口蹄疫3ABC抗体统计结果

2.3 不同性别

本次样本共354份，有291份记录了性别，其中公羊120只、母羊171只。统计显示，母羊3ABC抗体阳性率为11.7%，比公羊的8.33%略高，且同一饲养阶段的母羊阳性率均高于公羊（表3）。

表3 不同性别的羊口蹄疫3ABC抗体统计结果

2.4 不同品种

本次记录品种的血清样本共计319份。统计发现，绵羊的3ABC抗体阳性率为12.75%，高于山羊的6.47%（表4）。

表4 不同品种的羊口蹄疫3ABC抗体统计结果

3 讨论

本次调查选取河北省5个地区11个具有代表性的养殖场进行FMDV非结构蛋白3ABC抗体检测，发现平均阳性率为9.60%。据了解，全国各地羊3ABC抗体阳性率在0～39.44%之间不等：辽宁北票市[3]羊场和青海海北州[4]藏系绵羊的3ABC抗体阳性率为0 ，河南[5]、青海[6-7]、山东[2]、内蒙古[8]及宁夏[9]等省份的3ABC抗体阳性率分别为39.44%、7.65%～7.81%、13.6%、0.54%及2.00%。与上述地区相比，河北省的3ABC抗体阳性率处于全国中等水平。

目前，我国普遍使用的FMD灭活疫苗中的非结构蛋白未被完全去除，动物经多次接种后，可能会出现非结构蛋白抗体阳性。因此，现有检测方法无法真正区分我国的疫苗免疫和自然感染或康复动物[10]。但是，检测3ABC抗体仍有以下意义：一是作为参考来判断被检动物是否曾经感染过FMDV[11]，二是用于病原学检测确诊后的感染抗体追溯性调查[12]，三是用于FMD的控制和净化[13]。在实施FMD扑灭计划时，联合应用OIE 认可的 3ABC-ELISA 和酶联免疫电转印试验（EITB），可以及时发现真正的阳性动物[14]。也有研究证明，用高度纯化FMD疫苗免疫动物后，NSPs抗体为阴性，因而可以采用提高疫苗纯化效果，结合使用相应NSPs抗体检测方法，来区分感染与免疫动物[15]。

本次调查发现，河北省北部比南部阳性率要高。这可能是因为北部周边地区近期受到过FMDV入侵，也可能是由于秦皇岛港为河北省重要运输口岸，动物流动性大，病毒传入概率高。由于此次检测面较窄，尚难确定3ABC抗体在河北省的整体流行趋势。

本次调查还发现，随着羊群生长年龄的增长，3ABC抗体阳性率逐渐上升，其中种羊阳性率最高。羔羊3ABC抗体阳性考虑是疫病的垂直传播、自然感染、母源抗体等方面原因造成的；育成羊阳性怀疑此时动物正处于断乳时期，体内的母源抗体消失，而没有及时进行免疫造成的自然感染；而种羊阳性率最高，主要是因为调运频繁，感染病毒的概率高，也不排除引入隐性带毒动物的可能。上述结果与马建等[5]的观点相符，口蹄疫免疫次数越多，3ABC抗体阳性率越高，并认为日龄越小的动物表现阳性，越可能是感染了FMDV。还有研究显示，只对动物免疫1次非结构蛋白纯化程度差的疫苗，就会产生较高的阳性率[16]。但由于此次调查不清楚各场FMD免疫的详细背景，并对使用疫苗的质量以及疫苗的非结构蛋白纯化程度未知，因此要想得到进一步的结论，需要对使用疫苗的种类、纯度和免疫次数做进一步调查及研究。

本次调查结果显示，母羊阳性率高于公羊，具体原因还需进一步推断。绵羊阳性率高于山羊，与王秋菊[2]的调查结果相符，这可能与绵羊更易感有关。

建议对3ABC抗体阳性动物，采集OP液作病原学检测，及时淘汰病原学检测阳性羊；加强口蹄疫免疫，选用非结构蛋白纯化程度高的疫苗，定期对进行3ABC抗体水平抽检；严格种羊的引种检疫，严禁从疫区引进动物，做好隔离观察。

4 结论

检测结果表明，河北省存在FMD自然感染动物，提示FMD防治和净化任务仍然繁重。要根除和消灭本病，除做好免疫预防外，还应采取“检疫-隔离-淘汰-净化”的综合防治措施。此次调查初步了解了河北省羊群FMDV感染情况，为以后该地FMD防控策略的制定提供了参考。