猪支原体肺炎活疫苗与猪伪狂犬活疫苗混合喷鼻试验

李相钊

（齐鲁动物保健品有限公司，山东 济南 250100）

猪支原体肺炎是一种顽固性慢性疾病，抗支原体药物治疗可以抑制，但不能根除它，目前最好的办法是免疫预防[1-3]。J.Maes等对猪支原体肺炎疫苗免疫接种猪和对照组进行成本效率分析表明，接种猪肺炎支原体疫苗具有诱人的经济价值，每头育肥猪可节约 1.3欧元[4-5]。接种猪肺炎支原体疫苗还对猪的生长性能、饲料转化率、成活率、淘汰率及治疗费用等方面均有积极作用 。近年来，猪支原体肺炎活疫苗的研制已取得了巨大进展，具有较好的保护效率。但在探索猪支原体活疫苗免疫的方法也需要进行更多研究，本试验旨在探索简化猪场免疫程序的思路进行。

1 材料与方法

1.1 试验猪场

山东潍坊昌乐某规模化猪场，基础母猪5 000头。

1.2 试验背景

1）该公司肥猪伪狂犬活疫苗、猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）免疫程序：猪伪狂犬活疫苗免疫程序：3日龄喷鼻1头份海博莱伪狂犬疫苗、50日龄肌注1头份海博莱疫苗。猪支原体肺炎疫苗免疫程序：进口疫苗两针型3日龄、21日肌内注射，每次1头份/头。

2）齐鲁猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）批号1604001、齐鲁伪狂犬活疫苗批号1606006-1、海博莱伪狂犬活疫苗批号2J06-1、进口两针型猪支原体肺炎批号160783A。

3）健康、3日龄、杜长达三元仔猪，数量1 201头。

4）试验试剂：IDEXX伪狂犬抗体检测试剂盒（gE、gB)

1.3 试验设计

1.3.1 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬疫苗相互影响试验

分3个组，猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）+伪狂犬疫苗混合稀释组、猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）单独稀释对照组与伪狂犬疫苗单独稀释对照组。猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬疫苗混合稀释，在稀释之后0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h分别测定猪支原体肺炎活疫苗（RM 48株）效价、伪狂犬疫苗效价。单独稀释猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）、单独稀释伪狂犬疫苗，在稀释之后0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h分别测定猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）、伪狂犬疫苗的效价。

1.3.2 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬疫苗混合喷鼻对猪伪狂犬病临床免疫的影响试验

分成3组，猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）+齐鲁伪狂犬疫苗混合喷鼻组、猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）+海博莱伪狂犬疫苗混合喷鼻组、海博莱疫苗单独喷鼻组，每组200头，3日龄喷鼻，35日龄测抗体，56日龄测抗体。

1.3.3 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬疫苗混合喷鼻对猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）临床免疫的影响试验

分为2个组，猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）+伪狂犬疫苗混合喷鼻组、不免疫组，每组200头。3日龄喷鼻、对照喷生理盐水，免疫21 d后，混合免疫组选取10头猪，不免疫组选取5头猪，用猪支原体肺炎强毒株攻毒，攻毒4周后，杀猪，肺部病变观察，取出肺脏、支气管，用电子显微镜电子扫描纤毛状态。

1.3.4 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与猪支原体肺炎灭活疫苗临床对比试验

分成2个组，齐鲁猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）免疫组与进口某厂家疫苗两针型组，分别免疫201头、200头；齐鲁组3日龄喷鼻免疫1头份/头，进口组3日龄、21日肌内注射，每次1头份/头。70日龄保育结束，全程统计日增重、耗料、正品率（去死淘）、试验过程中呼吸道症状统计、试验过程中死亡猪只肺部病变评估。

图1 试验1：猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬疫苗相互影响试验技术路线

图2 试验2：猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬疫苗混合喷鼻对伪狂犬临床免疫的影响试验

图3 试验3：猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬疫苗混合喷鼻对猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）临床免疫的影响试验

图4 试验4：猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与猪支原体肺炎灭活疫苗临床对比试验

图5 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）+伪狂犬活疫苗混合稀释与猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）单独稀释猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）的效价变化图

图6 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）+伪狂犬活疫苗混合稀释与猪伪狂犬活疫苗单独稀释猪伪狂犬活疫苗的效价变化图

2 试验结果

2.1 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗相互影响试验

2.1.1 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）稀释后效价变化曲线

猪支原体肺炎活疫苗（RM 48株）初始效价为107.74CCU/头份 ，与伪狂犬疫苗混合稀释、单独稀释，在稀释之后 0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h猪 支 原体肺炎活疫苗（RM48株）的效价变化曲线。单独稀释与混合稀释对于猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）的效价影响不显著。

2.1.2 伪狂犬活疫苗稀释后效价变化曲线

伪狂犬活疫苗初始效价为107.2TCID50/头份，与猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）混合稀释、单独稀释，在稀释之后0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h伪狂犬疫苗的效价变化曲线。单独稀释与混合稀释对于伪狂犬疫苗的效价影响不显著。

2.2 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）对伪狂犬临床免疫的影响试验

无论是单独喷鼻还是混合喷鼻，对于伪狂犬抗体的影响是不显著的。不同厂家的伪狂犬疫苗与猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）的混合喷鼻对于伪狂犬的抗体影响是不显著的。

2.3 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗混合喷鼻对猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）临床免疫的影响试验

猪支原体肺炎活疫苗（RM 48株）与伪狂犬活疫苗混合喷鼻免疫对于猪支原体肺炎强毒株攻毒能够提供保护，而对照组发病。

2.3.1 混合喷鼻免疫组与不免疫组攻毒后剖检对照

用猪支原体肺炎强毒株攻毒后，猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗混合喷鼻免疫的猪只的肺脏没有病变，而生理盐水对照组，均表现出典型的猪支原体肺炎尖叶、心叶对称性肉变的症状。2.3.2 混合喷鼻免疫组与不免疫组电镜纤毛观察

表1 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）对伪狂犬临床免疫的影响

表2 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗混合喷鼻对猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）临床免疫的影响

图7 不免疫疫苗攻毒猪只肺脏照片

图8 混合喷鼻攻毒后猪只肺脏照片

图9 不免疫疫苗攻毒猪只纤毛电镜照片

图10 混合喷鼻攻毒后猪只纤毛电镜照片

表3 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与猪支原体肺炎灭活疫苗临床对比

用猪支原体肺炎强毒株攻毒后，猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗混合喷鼻免疫的猪只的纤毛表现的均比较正常，而生理盐水对照组，纤毛脱落明显。

2.4 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与猪支原体肺炎灭活疫苗临床对比试验

2.4.1 呼吸道症状临床评价

转保育之后，共进行4次抽检，每隔10天抽检一次，接种猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）猪只呼吸道症状比例明显好于接种进口两针型猪支原体灭活疫苗。

2.4.2 死亡猪只肺部病变评分

采用Goodwen评分法（即55分法）：免疫猪支原体肺炎活疫苗（RM 48株）组死亡的猪只肺部评分明显好于进口灭活疫苗。

2.4.3 生产指标评价

生产指标是评价疫苗免疫效果最直观的指标。免疫齐鲁猪支原体肺炎活疫苗（RM 48株）组比进口两针型疫苗，从免疫至保育结束，平均日增重多长24.55 g/d，造肉效率提升0.188，正品率提升1.52%。

3 讨论

3.1 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗用同一种稀释液混合稀释不产生相互影响

可能因为伪狂犬最适应的pH 6-8，而支原体适应pH的范围更广，而采用PBS缓冲液为主的稀释液pH在7.4左右。再者动物疫苗里边最常见的污染就是支原体，也就是说支原体在其他动物疫苗中生存是不影响这些疫苗抗原本身的生长活力。由于支原体与伪狂犬直接的不相互影响，这对于联合稀释喷鼻应用推广有了尝试的可能。

3.2 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗混合喷鼻对于伪狂犬活疫苗临床应用效果不产生影响

图11 免进口疫苗死猪肺脏正面

图12 免进口疫苗死猪肺脏背面

图13 免疫猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）死猪肺脏正面

图14 免疫猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）死猪肺脏背面

表4 免疫后死亡猪只剖检评分表

表5 免疫齐鲁猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与进口两针疫苗关键生产指标对照表

表6 免疫猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与进口两针疫苗关键生产指标对照表

因为混合喷鼻与单独喷鼻其伪狂犬的免疫趋势是一致的。对于猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬疫苗混合联合喷鼻的临床应用有了前景，一旦成为事实，就可以完成简化免疫程序，方便生产。

3.3 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗混合喷鼻对猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）在临床应用效果也不产生影响

通过攻毒混合喷鼻与不免疫疫苗的结果看，在攻毒后肺部检查、纤毛电镜照片上，混合喷鼻免疫组比不免疫疫苗组产生明显的优势。猪支原体免疫评价借助电镜等先进的仪器设备，直观表现出了差异。因为支原体快速评价比较麻烦，将来新技术、新设备的介入会使试验结果客观准确、速度更快。

3.4 猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与进口猪支原体肺炎灭活疫苗临床免疫对比试验结果，猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）的优势比较明显

喷鼻产生的效果比较应用进口两针型灭活疫苗带来生产指标更优秀。从免疫至保育结束，平均日增重多长24.55 g/d，造肉效率提升0.188，正品率提升1.52%。推测原因可能因为猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）是活疫苗，而进口疫苗为灭活疫苗，活疫苗在产生免疫保护的速度上有优势，而且活疫苗在细胞免疫、黏膜免疫上均有优势。

通过以上4个试验，基本可以得出结论：猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗是可以混合喷鼻使用的；猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）的临床应用效果是优于猪支原体肺炎灭活疫苗产品。当然本试验的临床数据来源于1个猪场，更多的试验猪场有相似的结果才能大规模推广该项应用。但本试验让猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬疫苗的联合使用看到了前景。

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