高效液相色谱法测定不同基质内的纽甜含量

刘李婷

（陕西省产品质量监督检验研究院农副食品所，陕西西安 710048）

纽甜是新一代人工合成的二肽类强力甜味剂，其化学名称为N-［N-(3,3-二甲基丁基)-L-α-天门冬氨酰］-L-苯丙氨酸-1-甲酯，分子式为C20H30N2O5[1]，是一种新型功能性甜味剂，纽甜的甜度为蔗糖的8 000～12 000倍[2]，是阿斯巴甜的衍生物，其稳定性和使用成本均优于阿斯巴甜[3]。

目前，国标中GB 5009.247—2016[4]中测定纽甜方法适用于饮料、蜜饯、糕点、炒货、酱腌菜、糖果、果酱、果冻、复合调味料。试样需经过混合提取液提取、固相萃取柱提取、水浴氮吹净化等步骤，过程较为繁琐。结合纽甜的物化性质，优化提取步骤，形成一种快速简便的检测方法，为日后纽甜的快速测定提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

液体乳、糕点、牛板筋、面包、海鲜酱，均为市售常见样品。

1.2 试剂与仪器

试剂：乙腈（色谱纯）、超纯水、乙酸铵（分析纯）。

仪器：高效液相色谱仪、超声波清洗仪、离心机。

1.3 样品前处理

准确称取不同基质的样品5 g左右，加入10 mL超纯水，超声提取10 min，取出后乙腈定容至50 mL，充分摇匀，超声提取15 min，以转速4 000 r/min离心5 min，取上清液过0.45μm有机滤头，上机测试。

1.4 仪器条件

色谱柱：C18ODS-3（5μm，4.6 mm×250 mm），柱温40℃，流动相0.02 mol/L乙酸铵∶乙腈=65∶35，流速1.0 mL，检测波长218 nm。

1.5 标准溶液配制

储备液：准确称取0.100 0 g纽甜标准品，加水溶解定容至100 mL，此溶液纽甜含量为1.00 mg/mL。

2 结果与分析

2.1 标准曲线与线性范围

分别吸取适量纽甜标准储备液，用水制成质量质量浓度分别为0.2，1.0，5.0，10.0，50.0μg/mL的系列标准工作液。以峰面积为纵坐标、标液质量浓度为横坐标绘制线性回归曲线，得到如下回归方程：Y=14 865X+11 116，R2=0.997 4。

纽甜的标准曲线见图1。

图1 纽甜的标准曲线

2.2 检出限

选取不同基质样品分别加标进行逐级稀释，仪器检测，可检出的最小质量浓度为该样品的检出限，最终得出该试验在5种基质条件下可达到检出限为0.2 mg/kg。

2.3 精密度

取质量浓度为10μg/mL的纽甜标准溶液，重复进样6次，通过峰面积计算RSD，取同一基质的样品6份，按上述检测方法进行纽甜含量测定，重复进样6次，计算RSD值。

测定方法精密度见表1。

表1 测定方法精密度

标品峰面积的RSD为0.54%。称取同一纽甜样品共6份，按上述色谱条件进行纽甜含量的测定，结果样品RSD为1.21%。

2.4 样品检测结果

不同基质中纽甜含量见表2。

由表2可知，该检验方法在5种不同基质中回收率为87%～107%，牛板筋、海鲜酱样品中因油脂含量较高，故回收率相对较低，在实际操作中可先去除油脂再进行提取检测。

纽甜标准溶液的色谱图见图2，纽甜样品的色谱图见图3。

纽甜标液的出峰时间为9.512 min，样品经上述方法提取后，样品峰的峰形良好。

表2 不同基质中纽甜含量

图2 纽甜标准溶液的色谱图

图3 纽甜样品的色谱图

3 结论

纽甜作为新型食品甜味剂广泛应用于各类食品中，但国标检测方法相对复杂，建立一种快速检测方法，通过乙腈提取，0.02 mol/L乙酸铵∶乙腈=65∶35流动相洗脱，高效液相色谱法检测，并通过5种不同基质下的纽甜含量检测结果得出该方法回收率为87%～107%，检出限为0.2 mg/kg，可作为快速检测方法应用于日常检测中，提高工作效率。