511例孕中期羊水细胞染色体分析

柯买春

(江西省九江市妇幼保健院，九江 332000)

染色体病是染色体异常引起的一类遗传性疾病，包括染色体数目异常和染色体机构异常，是导致新生儿缺陷的最常见原因之一，据统计，染色体病占新生儿出生缺陷的5%-10%[1]，给家庭和社会带来严重负担。倡导国家优生优育政策，减少染色体异常患儿出生，对胎儿进行宫内诊断十分必要。本文通过选取来我院九江市妇幼保健院产科门诊就诊的511例孕中期孕妇作为研究对象，对具有相关产前诊断指征的孕妇进行羊水穿刺，分析其胎儿染色体核型，判断胎儿染色体异常情况，为指导产前诊断工作提供一定的参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 511例孕妇均选自2016年5月10日~2018年2月13日就诊于我院九江市妇幼保健院产科门诊的孕中期孕妇，年龄19-46岁，孕周17-22周，其中175例为唐氏筛查高风险者，190例为高龄孕妇，36例孕妇B超显示NT增高，5例孕妇是夫妻双方其中一方染色体有异常者，63例为无创产前诊断为高风险者，其他42例孕妇都具有羊水穿刺指征，如不良孕产史，唐氏分娩史，唐氏筛查中危等。

1.2 方法

1.2.1 抽取羊水 在B超影像指导下对孕妇进行羊水穿刺，抽取羊水20ml均分两无菌离心管盛装，如混有母血，滴2滴无菌肝素抗凝剂于羊水中并混匀。

1.2.2 羊水细胞培养 将羊水进行离心1200g/r 7min，弃上清液，取0.5ml培养液加入留有羊水细胞沉淀物的离心管中，并用吸管轻轻吹打混匀，接种于培养中并置于温度为37℃，5%CO2的培养箱中进行培养，全程无菌操作。一周后观察羊水细胞贴壁生长，视生长情况决定收获细胞时间。

1.2.3 收获细胞 收细胞前3-4h，加入秋水仙素处理，使染色体处于分裂中期。然后将培养液倒入新的干净的离心管，往培养基中加入1管羊水消化液放入水浴箱温浴2min，加入培养液终止消化，并用刮细胞器刮取培养基中羊水细胞，倒入离心管中离心1200g/r 7min，弃上清液，留细胞底物，再加入0.4%枸橼酸钠低渗液温浴低渗4min 30s，立即加固定液 （甲醇∶冰乙酸=3：1）进行预固定。然后离心1200g/r 7min，弃上清液留底物，加入固定液进行固定3次。

1.2.4 滴片染色 将固定好的底物悬浮液离心1200g/r 7min，弃上清液留底物，加入少许固定液混匀底物进行滴片 （预先置于冰箱中的干净的冰玻片），并放入烤箱80℃ 3h，烤好的玻片用吉姆萨进行染色，置于高倍镜下观察并分析染色体核型。

2 结果

2.1 64例异常染色体的具体情况 64例异常染色体，占比12.5%，包括具有产前诊断指征异常染色体者23例（异常占比4.5%）和无创DNA产前检测高风险异常染色体41例。具体情况见下表1。

表1 64例异常染色体的具体情况

2.2 具有产前诊断指征孕妇检测的具体情况 511例受检者检测出23例具有产前诊断指征孕妇胎儿染色体异常，异常占比4.5%（23/511），其中包括175例唐氏筛查高风险查出异常核型8例，检测异常率4.6%(8/175)，190例高龄孕妇查出9例异常染色体，检测异常率4.7%(9/190)，36例B超检查NT增高者异常核型4例，检测异常率11.2%(4/36)，5例父母其中一方染色体异常者查出异常核型2例，检测异常率40%(2/5)，具体情况见下表2。

表2 具有产前诊断指征孕妇检测的具体情况

2.3 无创产前DNA检测染色体异常的具体情况在无创产前DNA检测高风险者中，24例无创21三体高风险者查出23例染色体异常，检测异常率率95.8%（23/24），18例无创18三体高风险者查出5例异常，检测异常率27.8%(5/18)，21例无创显示性染色体异常者检测出13例染色体异常，检测异常率61.9%（13/21），具体情况见下表3。

表3 无创产前DNA检测高风险者行羊水检测染色体异常的具体情况

3 讨论

有关文献资料显示，全世界每年约有500万新生儿出生缺陷，其中70%为遗传性出生缺陷[2]。染色体病是细胞遗传性疾病的主要研究对象，目前尚没有技术方法可以有效治疗染色体病，只能做好预防工作，因此对胎儿进行宫内诊断防止染色体异常患儿出生十分重要。

本研究511例受检孕妇检查出胎儿染色体异常者64例，其中无创显示高风险者41例，其他具有产前诊断指征染色体异常者23例，占比4.5%（23/511），与文献报道基本一致[3，4]。 具有产前诊断指征染色体数目（包括嵌合体）异常者12例：2例嵌合体、2 例性染色体异常（45，XO；47，XXX）和 8例21三体综合症，其中21三体综合症占比34.8%（8/23），是染色体异常核型的主要类型，与文献报道一致[5，6]，应特别关注；11例染色体结构异常者包括6例平衡易位（包括罗伯逊易位）和5例9号染色体的臂间倒位，9号染色体的臂间倒位在人群中的发生率高达1%，为防止畸形患儿的出生，对9染色体臂间倒位片段比较长者必须加强宫内诊断。

511例具有产前诊断指征孕中期孕妇中唐氏筛查高危者175例，查出染色体异常者8例，占比4.6%：2例染色体数目异常 （包括嵌合体）、3例平衡易位（包括罗伯逊易位）和3例9号染色体的臂间倒位；190例高龄孕妇查出染色体异常者9例，占比4.7%，其中染色体数目异常者7例（5例为21三体综合症，1例为性染色体异常，1例嵌合体）、1例罗伯逊易位和1例9号染色体的臂间倒位；高龄孕妇中查出21三体综合症异常率高达2.6%，高龄孕妇的胎儿宫内诊断必须高度重视；36例B超显示胎儿异常者查出染色体异常4例，占比11.2%：1例9号染色体臂间倒位、1例性染色体异常和2例21三体综合症，B超是检查胎儿是否异常的重要技术，NT值大于2.5㎜可以有效的检出孕早期胎儿染色体异常和染色体结构异常，特别是对21三体综合症的检测，NT值越高胎儿染色体异常风险越大；5例父母一方染色体异常者查出胎儿染色体异常者2例，占比高达40%，染色体携带者是指染色体结构异常但表型正常的个体，在生育后代中，由于减少分裂作用，只有1/18可能性生育正常儿，1/18可能为携带者，其余都是畸形儿，因此，父母为染色体异常携带者必须进行胎儿宫内诊断，防止染色体异常患儿出生。

511例孕中期孕妇中无创DNA检测显示高风险者63例，其中无创21三体高风险者24例，查出染色体异常者23例，占比高达95.8%；无创18三体高风险者18例，查出染色体异常者5例，占比27.8%；无创性染色体高风险者21例，查出染色体异常者13例，占比61.9%。由此可见，无创DNA检测胎儿染色体异常存在假阳性，特别对13、18和性染色体的检测，如果无创DNA检测阳性者，必须羊水穿刺进行细胞染色体核型分析以作最后确认结果。

综上所述，羊水细胞培养对于优生咨询产前诊断有重要意义，产前诊断中密切关注具有产前诊断指征的孕中期孕妇，并对其进行羊膜穿刺细胞染色体核型分析是十分必要的。羊水穿刺进行胎儿染色体核型分析是诊断胎儿染色体是否异常的金标准，能有效的判断胎儿染色体异常的核型，是防止染色体异常患儿出生的重要依据。