UBE3C在结直肠癌中的表达及临床意义＊

傅平，周凯，林良庆，黄琪，刘小丰，洪华章

(江西省人民医院二部普外科，南昌 330006)

结直肠癌是世界上第3常见肿瘤，仅次于肺癌、乳腺癌，我国结直肠癌的发病率和死亡率也呈逐年增高的趋势，严重危害人们生命健康[1，2]。泛素连接酶E3C（UBE3C）是泛素连接酶HECT家族成员，目前已知在多种恶性肿瘤中高表达，与肿瘤的发生发展密切相关。然而UBE3C与结直肠癌的关系国内外尚无相关研究，本研究采用免疫组化技术明确UBE3C在结直肠癌组织中的表达，结合临床病理资料，探讨其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 从2010年1月-2017年8月在我院行根治术的结直肠癌病例中，选取56例作为研究对象，取材部位为肿瘤及癌旁正常组织（距离肿瘤边缘＞5cm），全部标本均经病理证实。其中，男性30例，女性26例，中位年龄56.8岁。所有病例术前均未接受放化疗。⑴肿瘤部位：右半结肠11例，左半结肠12例，直肠33例。⑵淋巴结转移：有淋巴结转移25例，无淋巴结转移31例。⑶TNM分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期24例，Ⅲ期18例，Ⅳ期8例。

1.2 试剂来源及实验方法 兔抗人UBE3C多克隆抗体购自Sigma Aldrich公司；SP免疫组化试剂盒购自福州迈新公司。免疫组化采用S-P法：常规切片脱蜡，梯度酒精脱水后，3%过氧化氢灭活内源性生物素酶，滴加一抗，4℃冰箱内过夜孵育，滴加二抗，DAB显色，苏木精衬染，脱水，透明、中性树胶封固。已知UBE3C阳性的大肠癌组织作阳性对照，PBS代替第一抗体作阴性对照。

1.3 结果判断 UBE3C阳性定位于细胞质，出现黄色颗粒者为阳性，随机计数5个高倍镜视野（×400），分别记录细胞显色度及阳性细胞占计数细胞百分数，进行分级评分。显色度评分：不着色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分；阳性细胞百分数≤5%为0分，在6%-25%者为1分，26%-50%为2分，≥51%者为3分；两者乘积，0-2分为阴性，≥3分为阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件，数据比较采用χ2检验，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 UBE3C在结直肠癌组织及癌旁正常组织中的表达 56例结直肠癌组织中，UBE3C阳性42例，阴性14例，阳性率为75%。56例癌旁正常组织中，UBE3C阳性9例，阴性47例，阳性率为16.1%。UBE3C在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织（P≤0.05），见图 1。

图1 UBE3C在不同结直肠组织中的表达（免疫组化×400）

2.2 UBE3C在结直肠癌中的表达与临床病理参数间的关系 UBE3C在结直肠癌中的表达与淋巴结转移、TNM 分期有关（P≤0.05），与性别、发病部位无关（P＞0.05）。 具体情况见表 1。

表1 UBE3C在结直肠癌中的表达与临床病理参数间的关系

3 讨论

泛素-蛋白酶体途径是细胞内蛋白质选择性降解的重要途径，该途径是一个三酶级联反应过程，需要泛素活化酶E1、泛素交联酶E2和泛素连接酶E3共同参与，而泛素连接酶E3决定了整个反应的特异性[3，4]。泛素连接酶E3通过调控靶蛋白的泛素化，广泛参与细胞生长、细胞凋亡等生物学过程，与恶性肿瘤的发生发展密切相关[5，6]。

UBE3C基因定位于7q36.3，包含23个外显子，其编码的UBE3C蛋白共有1083个氨基酸，蛋白分子量为126kDa，属于泛素连接酶HECT家族蛋白。Jiang等[7]研究发现UBE3C是新的潜在癌基因，在原发性肝癌细胞株Huh-7、MHCC-97H中，UBE3C蛋白表达明显升高，敲减UBE3C基因后蛋白表达明显下降，同时肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。Tao等[8]研究发现UBE3C是原发性肝癌新的治疗靶点，miR-542-3p通过下调UBE3C表达，抑制肝癌细胞的上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT） 及转移。国内外研究发现，UBE3C在黑色素瘤[9]、肾细胞癌[10]、子宫内膜癌[11]等恶性肿瘤中均呈高表达，并通过增强上皮间充质转化、激活Wnt/β-catenin旁路等机制，参与肿瘤的发生发展。但关于UBE3C在结直肠癌中的表达及作用国内外尚无相关研究。

本研究结果表明：⑴UBE3C在结直肠癌组织中高表达，而在癌旁正常组织中表达显著降低，两者有显著性差异，表明UBE3C高表达在结直肠癌的发生发展中有重要的促进作用。⑵UBE3C在结直肠癌组织中的表达与淋巴结转移、TNM分期有关，在有淋巴结转移和TNMⅢ期+Ⅳ期的结直肠癌组织中明显高表达，说明UBE3C与结直肠癌的浸润和转移密切相关，可作为判断结直肠癌预后的潜在标记物。