宣痹通瘀方对急性冠脉缺血大鼠心脏的保护作用及机制

李双娣 成光宇 刘迎辉 隋永朋 李洪禹 刘爱东

(长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021)

冠心病心绞痛是临床常见病、多发病，发病率逐年增加〔1〕。冠脉造影是诊断冠心病心绞痛的金标准，但由于造影为有创检查手段，并且针对小血管、微血管及多支血管病变无法进行诊断，在临床应用中仍然存在一些局限性。近年来，中医药干预心肌缺血动物模型的相关研究成为热点，研究方向包括抗炎症、抗氧化、抗动脉硬化等。研究发现，大量的中药在不同程度上发挥着抗心肌缺血作用〔2〕。活血中药川芎、 丹参、三七等具有抗血小板聚集、抗血栓形成、扩张血管、保护心肌细胞、降低心肌耗氧量等作用〔3〕。宣痹通瘀胶囊由延胡索(酒炙)、三七、川芎、郁金、人参、冰片等药物组成，具有行气化瘀止痛的功效，临床上主要用于气滞血瘀之胸痹心痛。本研究旨在观察宣痹通瘀胶囊对心肌缺血模型大鼠生化指标及心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响，探讨宣痹通瘀方保护心肌损伤的作用机制。

1 材料与方法

1.1实验动物 清洁级SD大鼠，雌雄各半，体质量(220±20)g，由辽宁长生生物技术有限公司提供，动物合格证号：SCXK(辽)2015-0001。室内温度(24±2)℃；相对湿度(50±10)%；氨浓度(mg/m3)≤14；采用昼夜自然光照；饲料为颗粒饲料，自由摄食、饮水。

1.2主要药剂和设备 宣痹通瘀胶囊成分包括延胡索(酒炙)、三七、川芎、郁金、人参、冰片，规格：每克胶囊内容物含4.03 g生药，批号：20141201，由长春中医药大学附属医院新药研发中心提供。阳性对照药麝香保心丸，上海和黄药业有限公司生产(国药准字231020068)，规格：22.5mg/丸；VEGF抗体：规格：1 ml/瓶，产品批号：JL0972R，美国Sigma公司产品，兔IgG-免疫组化试剂盒(SABC即用型)：产品批号：11H24J20。生理信号采集系统，型号：Powerlab/8sp，澳大利亚埃德公司产品。医学图像分析仪，型号：BI-2000,成都泰盟股份有限公司产品。全自动生化分析仪，型号：selectra junior，荷兰威图科学仪器公司产品。酶标仪，型号：BIOO680，美国伯乐公司产品。台式高速低温离心机，型号：Biofuge Stratos，德国贺利氏公司产品。电子天平，型号：SQP，规格：PRACTUM313-1CN，序列号：0028892121，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司产品。交直流电子计数计重两用秤，型号：KF-H2，中国凯丰集团有限公司产品。电热三用水浴箱，型号：DS，北京市医疗设备厂产品。电热恒温鼓风干燥箱，型号：DHG-9143BS-Ⅲ型，上海新苗医疗器械制造有限公司产品。手术器材，JZO2Cr型静脉拉钩，手术刀，止血钳，持针器，缝合针，缝合线等，上海医疗器械(集团)有限公司手术器械厂产品。各种手术器械在使用前经新洁尔灭溶液浸泡消毒灭菌24 h。大鼠固定板，1 ml注射器，5 ml注射器，采血管，离心管等。

1.3方法

1.3.1模型制备与分组 SD大鼠购入后，稳定适应性饲养1 w。用乙醚吸入法将大鼠麻醉，采用快速开胸结扎冠状动脉前降支的模型处理方法，制备急性心肌缺血动物模型。具体方法：将动物置于密闭容器中使其被迫吸入乙醚至浅麻醉状态。仰位固定于鼠板上，胸部去毛，络合碘局部消毒，在第4～5肋间开胸，钝性分离肌层，打开胸腔，暴露心脏，在左心耳根部与肺动脉圆锥交界处，相当于左冠状动脉起始处下2 mm穿一手术线结扎，迅速将心脏送回胸腔，排出进入胸腔的气体及血液，缝合胸壁。再次用络合碘消毒液进行皮肤表面消毒，待动物苏醒后放归笼具常规饲养。结扎后5 min将其与Powerlab/8s型八导数据分析记录仪连接好，记录一段标准Ⅱ导联心电图，观测ST段偏移幅度，以ST段抬高0.2 mV定义为造模成功。将造模成功的大鼠随机分为模型组、麝香保心丸组(0.024 g·kg-1·d-1)；宣痹通瘀胶囊设高剂量(3.2 g·kg-1·d-1)、中剂量(1.6 g·kg-1·d-1)和低剂量(0.8 g·kg-1·d-1)三个亚组。另外，取10只同一批心电图正常的大鼠作为假手术组。假手术组采用的手术方法与其他手术组相同，只是在左冠状动脉下仅置手术线而不结扎。每组10只，雌、雄各5只。每天灌胃给药1次，连续7 d。假手术组与模型组灌胃等体积蒸馏水。

1.3.2指标检测 最后一次给药后1 h，将实验大鼠用20%乌来糖以5 ml/kg腹腔注射麻醉，经腹主动脉取血，3 000 r/min离心10 min分离血清。按相关各项指标检测试剂盒说明书要求操作，使用全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量。使用酶标仪测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。采用免疫组化方法检测VEGF含量。

1.4统计学方法 应用SPSS19.0统计学软件行t检验。

2 结 果

2.1宣痹通瘀胶囊对心肌缺血模型大鼠血清心肌三酶水平的影响 模型组血清AST、CK和LDH水平均明显高于假手术组(均P<0.001)。给予宣痹通瘀胶囊干预后，与模型组比较，高剂量组血清AST、CK和LDH明显降低(P<0.01或P<0.05)，中剂量组可以明显下调各组血清AST和LDH水平(P<0.05和P<0.01)；而低剂量组仅对LDH水平有显著的下调作用(P<0.05)。见表1。

表1 各组血清AST、CK、LDH、MDA水平和SOD活性比较

与模型组比较：1)P<0.05，2)P<0.01，3)P<0.001；下表同

2.2宣痹通瘀胶囊对心肌缺血模型大鼠血清SOD活性及MDA含量的影响 宣痹通瘀胶囊高、中剂量组血清SOD活性明显高于模型组(P<0.05)；而MDA含量明显低于模型组(P<0.05)。见表1。

2.3宣痹通瘀胶囊对心肌缺血模型大鼠心肌组织VEGF含量的影响 与假手术组比较，模型组VEGF显著下降(P<0.05)；与模型组比较，麝香保心丸组、宣痹通瘀高、中、低剂量组心肌组织内VEGF含量增高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表2。

表2 免疫组化检测各组心肌组织切片VEGF阳性表达染色面积及平均光密度比较

3 讨 论

宣痹通瘀胶囊共含有六味中药，延胡索(酒炙)辛苦而温，入心、肝、脾经，具活血行气止痛之功，“治心痛欲死”(《雷公炮炙论》)，能行血中之气滞，气中之血滞，故为君药。三七甘苦而温，入肝、胃二经，可化瘀活血而定痛，能够祛瘀生新，化瘀不伤正；川芎辛温，入肝、胆、心包经，活血化瘀，行气止痛，为“血中之气药”，能够通达气血，使气行血调；郁金味辛，入心、肝、胆经，辛能行能散，既能活血，又能行气，可活血止痛、行气解郁。三药同用，助君行气活血，化瘀止痛，共为臣药。人参甘温，入心、脾、肺经，善“补五脏，安精神，止惊悸”(《神农本草经》)，能补脾益肺养心气，方中人参既可补气生血，使气旺血生，动力不竭，又能固护正气，防君、臣诸药行气化瘀克罚太过耗伤正气，属佐助和佐制之功；冰片辛苦微寒，归心、脾、肺经，善走能散，具有散火、散气、散血、散滞、通窍、辟恶之功，“独行则势弱，佐使则有功”(《本草衍义》)，与诸药相伍，能开心窍，止痹痛，亦为佐药。诸药合用，共奏活血祛瘀，行气止痛之功，可使瘀血得去，脉道得通，则诸症自解。

本研究结果表明，宣痹通瘀胶囊对缺血缺氧导致的心肌损伤有保护作用。现代药理研究表明，延胡索、川芎能够扩张冠脉、降低冠脉阻力、提高耐缺氧能力、保护心肌细胞〔4，5〕，三七、郁金具有抗血小板聚集及溶栓作用〔6〕，人参、冰片能够抗心肌缺血、抗心律失常〔7〕。同时，宣痹通瘀方可以升高缺血心肌组织中VEGF含量，提示宣痹通瘀方可能存在一定促进血管新生的作用，但具体机制还有待进一步研究。