食管鳞癌中DNA结合/分化抑制蛋白-1和血管内皮生长因子-D表达及意义

祁艳娟 秦爱萍 龙启福 陈 凡 马建青 周 毛 常巧梅

(青海大学附属医院肿瘤放疗科，青海 西宁 810001)

食管鳞癌主要见于中老年人。上皮细胞在肿瘤性因素刺激下癌变后形成浸润性癌，进展时常伴有淋巴结播散〔1〕。肿瘤在进展时间质可以伴有淋巴管新生后并形成有功能的淋巴管，这被认为是与肿瘤细胞最近的淋巴管，且易于被肿瘤细胞生长时侵袭。与淋巴管生成最重要的因子是血管内皮生长因子(VEGF)-D，其与受体(VEGFR)3结合后使淋巴管内皮细胞增殖，为转移提供重要的管腔结构〔2,3〕，DNA结合/分化抑制蛋白(ID)-1是重要影响因素之一。ID-1与肿瘤细胞的增殖和转移有关〔4〕。本文关注食管鳞癌中ID-1和VEGF-D的表达，分析其相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2016年10月至2017年12月青海大学附属医院住院治疗、经病理学确诊、行手术根治的食管鳞癌患者87例为观察组，纳入标准：①临床资料完整；②符合WHO中的诊断标准；③患者或家属签署知情同意书。排除标准：①伴有其他器官恶性肿瘤；②有先天性疾病或遗传性疾病；③有消化道手术史；④术前放、化疗。其中男45例，女42例，年龄55～86岁，平均63.8岁。食管切缘(距肿物边缘>2 cm)的黏膜组织23例为对照组。其中男12例，女11例，年龄57～83岁，平均61.4岁。两组性别构成和年龄差异无统计学意义。

1.2ID-1和VEGF-D表达 ID-1和VEGF-D检测均基于术后石蜡切片，应用免疫组化二步法完成，ID-1和VEGF-D试剂均购自北京博奥森生物技术有限公司。实验中ID-1浓度为1∶100，VEGF-D浓度为1∶300。操作中切片均有阳性质控，严格按说明书进行。

1.3ID-1和VEGF-D结果的判读 ID-1和VEGF-D以细胞质中染成棕黄色为阳性。按着色强度和着色百分率的乘积进行评分。着色强度：无着色0分；弱着色1分，中等程度着色2分，强着色3分。着色百分率：选择4个高倍视野，以<5%为0分，5%～10%为1分，以11%～30%为2分，以31%～50%为3分，以>50%为4分。最终以≤3分为阴性，以>3分为阳性。

1.4统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行χ2检验、线性相关分析。

2 结 果

2.1两组ID-1和VEGF-D的比较 两组ID-1和VEGF-D阳性差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 两组ID-1和VEGF-D阳性表达的比较〔n(%)〕

2.2ID-1和VEGF-D在观察组不同临床特征中表达差异 观察组中ID-1和VEGF-D表达与脉管累犯和淋巴结转移相关，ID-1表达与肿瘤的增殖指数和分化程度相关。二者与炎细胞浸润无相关性。见表2。

表2 ID-1和VEGF-D在观察组不同临床特征中阳性表达〔n(%)〕

2.3观察组中ID-1和VEGF-D表达的相关性 ID-1和VEGF-D呈正相关(r=0.46，P=0.030)。

3 讨 论

食管癌起源于黏膜的鳞状上皮，与形成上皮的干细胞有一定关系，出现异型增生、癌变，进展时表现出肿瘤细胞对间质的侵袭作用，并对转移起促进作用。肿瘤在进展过程中，可以伴有淋巴道播散，也是上皮源性肿瘤重要的转移途径〔5,6〕。间质中的脉管结构对转移起重要的辅助作用。其中间质的小淋巴管是最易受侵袭的。研究认为在肿瘤进展过程中，新生肿瘤组织的间质可以有淋巴管的新生，这种淋巴管为肿瘤转移提供了最便捷的通路〔7,8〕。引起淋巴管增殖的有淋巴管生成因子，其中VEGF-D是主要因子，其在肿瘤进展过程中由肿瘤细胞产生，并可以激活其受体，与受体结合后促进淋巴管内皮细胞的增殖，形成枝芽状的生长，在淋巴液的冲击作用下形成管腔，形成具有特异性结构和功能的淋巴管〔9,10〕。肿瘤细胞可以通过此途径发生淋巴管转移。调节淋巴管生成因子的因素较多，其中ID-1可能是重要的调控因子。ID-1是螺旋-环-螺旋(HLH)转录因子的主要成员，具有癌基因的特征〔11〕。研究显示ID-1阳性表达的肿瘤细胞具有细胞小、细胞核小、核染色深等特征，认为其具有干细胞的“永生化”的特征和功能〔12〕。ID-1表达升高时，可以阻止细胞的分化，使其处于原始状态，并具有异源性生长的特征，此种肿瘤细胞表现为高增殖和高迁移状态。肿瘤中ID-1过度表达的细胞能使其老化时间增强，与抑制凋亡的作用相似，使肿瘤细胞持续对机体进行破坏和侵袭〔13〕。ID-1的作用也可能具有多样性，如对脉管生成的调控作用等〔14〕。

本研究结果显示ID-1和VEGF-D高表达是促进肿瘤形成的重要因素，也是引起肿瘤细胞异型的重要蛋白因素，二者是促癌生成的基因。ID-1和VEGF-D是肿瘤细胞播散的重要因素。ID-1具有引起肿瘤失控性增生的特征，并抑制细胞由幼稚分化为成熟的细胞〔15〕。本文结果提示ID-1和VEGF-D与肿瘤细胞进展时的间质反应无关。ID-1 表达升高时可以调节鳞状细胞分化，这是肿瘤细胞内在调节过程，使肿瘤细胞停滞于增殖的不同时期，也使肿瘤停滞在不同原始阶段，此时细胞异型程度明显，与起源组织的差别小，形成接近幼稚的干细胞形态，具有明显增殖活性。本文提示ID-1和VEGF-D呈正相关，ID-1高表达是促进淋巴管生成因子形成的因素之一〔16〕，ID-1可能是上游基因，调节VEGF-D、表皮生长因子受体(EGFR)和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)等信号通路，引起细胞增殖和迁移〔17〕。但ID-1/VEGF-D/VEGFR-3是否作为淋巴管生成直接通路有待证实。