多西他赛注射液在不同pH溶媒中的稳定性研究

邓玉晓，刘葵葵，赵思太，孙晋瑞

（山东省药学科学院 山东省化学药物重点实验室，山东 济南 250101）

多西他赛（docetaxel）又名泰索帝、多西紫杉醇，主要用于治疗晚期乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌，对头颈部癌、小细胞肺癌、胃癌、胰腺癌、黑色素瘤等也有一定疗效[1]。多西他赛属紫杉烷类抗肿瘤药，它通过加强微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用，形成稳定的非功能性微管束，破坏肿瘤细胞的有丝分裂，达到抗肿瘤作用[2-3]。多西他赛的细胞内浓度是紫杉醇的4倍，且在细胞内滞留时间更长，因此具有更强的抗肿瘤活性[4]。

目前，国内外多西他赛的说明书均标示配制好的多西他赛注射用溶液应在室温及正常光线下，于4 h内使用。多西他赛在酸性或碱性条件下结构会发生开环或重排[5]，而传统溶媒0.9 %氯化钠注射液和5 %葡萄糖注射液的pH均小于5.5[6]，经检测，0.9 %氯化钠注射液的pH为5.40左右，5 %葡萄糖注射液的pH为4.0左右，导致药物溶液稳定性差。鉴于溶媒的pH对多西他赛的溶解度和稳定性的影响和对临床用药造成的不便，特设计本实验内容，意在考察多西他赛注射液与不同pH的溶媒配伍后的稳定性，为多西他赛注射液的溶媒要求及溶媒的选择提供一些实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SPD-M20A二极管阵列检测器（日本岛津公司）；PB-10精密酸度计（赛多利斯）。

1.2 药品

多西他赛对照品（中国食品药品检定研究院，批号100666-201202）；多西他赛注射液（齐鲁制药，批号6L0062C50，规格1 ml:40 mg）；0.9 %氯化钠注射液（辰欣药业，批号1612240564，规格500 ml:4.5 g）；5 %葡萄糖注射液（山东齐都药业，批号2C1611102，规格500 ml:25 g）；浓盐酸（国药集团，批号20160301，含量36.0 %～38.0 %）；碳酸氢钠（国药集团，AR，批号20161215）；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备[7-8]

2.1.1 不同pH 0.9 %氯化钠溶液和5 %葡萄糖溶液的制备 分别取0.9 %氯化钠注射液和5 %葡萄糖注射液各7份，每份50 ml，用3.6 %稀盐酸，5 %碳酸氢钠水溶液分别调节pH至2.50，4.00，5.40，6.50，7.50，9.00，10.00。

2.1.2 阴性对照溶液的制备 取多西他赛注射液专用溶剂分别经不同pH的0.9 %氯化钠溶液或5 %葡萄糖溶液稀释，作为阴性对照溶液。

2.1.3 对照品溶液 精密称取多西他赛对照品6.0 mg，置入10 ml量瓶，用流动相定容，得浓度为0.6 mg/ml的多西他赛对照品溶液。

2.1.4 供试品溶液 根据多西他赛注射液的说明书要求和临床用药情况，设计溶液配制方法：精密称取多西他赛注射液60.0 mg，用多西他赛注射液专用溶媒溶解后，置入100 ml量瓶，用不同pH的0.9 %氯化钠溶液或5 %葡萄糖溶液定容，得浓度为0.6 mg/ml的多西他赛供试品溶液

2.2 含量测定[9-10]

2.2.1 色谱条件及专属性 色谱柱：Intersil ODS-3；流动相：乙腈/水=3/2；流速：1.0 ml/min；检测波长：230 nm；柱温：25 ℃；进样量：20 μl。

在上述色谱条件下，用多西他赛专用溶剂、对照品溶液和供试品溶液分别进样检测，理论板数以多西他赛峰计算不低于3000，拖尾因子为1.03。色谱图见图1。由图可见，多西他赛的保留时间为7.3 min，多西他赛专用溶剂不影响多西他赛的含量检测。

图1 阴性对照溶液、多西他赛对照品溶液、供试品溶液的HPLC谱图

2.2.2 标准曲线的制备 精密量取多西他赛对照品溶液1 ml，置入2 ml量瓶，用流动相定容，配成浓度为300 μg/ml的对照品溶液，精密称取多西他赛对照品4.0 mg，置入10 ml量瓶，用流动相定容，然后倍半稀释，配成浓度为400，200，100 μg/ml的对照品溶液，分别按2.2.1项色谱条件进样并记录色谱。以多西他赛对照品浓度C（μg/ml）对峰面积A作线性回归。回归方程为A=16 566C-9 017（R2=0.9996，n=5），多西他赛在100～600 μg/ml的浓度范围内线性关系良好。

2.2.3 精密度试验 取多西他赛对照品溶液低（100 μg/ml）、中（300 μg/ml）、高（600 μg/ml）3个浓度质量控制（QC）样品，平行进行5样本分析，连续测定3 d，根据随行的标准曲线方程，计算QC样品的测得浓度，计算日内和日间精密度。日内精密度RSD为0.74 %，日间精密度RSD为1.35 %。表明该方法的精密度良好。

2.2.4 回收率试验 取多西他赛供试品溶液分别倍半稀释，得不同pH的0.9 %氯化钠溶液或5 %葡萄糖溶液的低（100 μg/ml）、中（300 μg/ml）、高（600 μg/ml）3个浓度QC样品，平行进行5样本分析，测定药物峰面积，代入随行的标准曲线方程中计算测得浓度，与实际浓度进行比较求得回收率。结果表明，该方法的回收率在98.12 %～101.54 %内，RSD小于2 %，表明该方法稳定可靠，符合要求。

2.2.5 稳定性考察 在室温正常光线条件下，多西他赛注射液与不同pH的0.9 %氯化钠溶液或5 %葡萄糖溶液配伍后，分别于 0，2，4，6，8，10，12 h取样，按2.2项色谱条件进样，分别精密量取供试品溶液与对照品溶液20 µl进样，记录色谱图峰面积，按外标法计算含量。以0 h时的多西他赛含量为100 %，计算多西他赛百分含量随时间的变化。结果见表1，表2。

表1 多西他赛注射液与不同pH 0.9 %氯化钠溶液配伍后的稳定性实验结果/%

表2 多西他赛注射液与不同pH 5 %葡萄糖溶液配伍后的稳定性实验结果/%

由表1、表2可见，pH为6.50和7.50时，多西他赛注射液与0.9 %氯化钠溶液配伍后，放置12 h后其含量下降RSD值分别为2.50 %和2.56 %（RSD＞2 %）；与5 %葡萄糖溶液配伍后，放置12 h后其含量下降RSD值分别为2.50 %和2.55 %（RSD＞2%）。结果表明，室温正常光线条件下，pH为6.50和7.50时，多西他赛含量在配制后12 h才有明显下降。

pH为5.40和9.00时，多西他赛注射液与0.9 %氯化钠溶液配伍后，放置8 h后其含量下降RSD值分别为2.32 %和2.45 %（RSD＞2 %）；与5 %葡萄糖溶液配伍后，放置8 h后其含量下降RSD值分别为2.34 %和2.46 %（RSD＞2 %）。结果表明，室温正常光线条件下，pH为5.40和9.00时，多西他赛含量在配置后8 h有明显下降。

在H为4.00和10.00时，多西他赛注射液与0.9 %氯化钠溶液配伍后，放置6 h后其含量下降RSD值分别为2.52 %和2.41 %（RSD＞2 %）；与5 %葡萄糖溶液配伍后，放置6 h后其含量下降RSD值分别为2.50 %和2.40 %（RSD＞2 %）。结果表明，室温正常光线条件下，pH为4.00和10.00时，多西他赛含量在配置后6 h即有明显下降。

pH为2.50时，多西他赛注射液与0.9 %氯化钠溶液配伍后，放置4 h后其含量下降RSD值为2.52 %（RSD＞2 %）；与5 %葡萄糖溶液配伍后，放置4 h后其含量下降RSD值为2.53 %（RSD＞2 %）。结果表明，室温正常光线条件下，pH为2.50时，多西他赛含量在配置后4 h即有明显下降。

3 讨论

我们参考了相关文献[7-10]，考察了不同比例乙腈-水，甲醇-水，甲醇-乙腈-水系统作为流动相时色谱峰情况，结果显示，采用乙腈-水（3:2）为流动相，色谱峰对称性好，达峰时间适当，条件稳定，主峰完全分离；波长选择方面，多西他赛在190，230 nm处均有最大吸收，为避免溶剂的末端吸收，选择230 nm为检测波长。

综上所述，由于多西他赛的结构原因，溶媒的pH会对多西他赛的溶解度和稳定性造成较大影响。临床应用过程中，选择pH 为6.50～7.50的溶媒或对现有溶媒的pH进行适当的调整使其pH位于6.50～7.50之间，更有利于多西他赛注射液配伍后的存放与使用。