HPLC测定阿齐沙坦片的含量

（鲁南制药集团股份有限公司，山东 临沂 276000）

阿齐沙坦是血管紧张素Ⅱ受体（AT1）拮抗剂（ARB），能竞争性、可逆地阻断血管紧张素Ⅱ与AT1受体的结合，起到降低血压作用，其与血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）类降压药物相比，具有平稳降压、不会引起干咳的优点[1-4]。阿齐沙坦作为新一代双重功能的ARB，不仅能高选择性阻断AT1受体，单独或联合用药均具有平稳持久降血压作用，还能通过部分激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）而对糖尿病患者产生潜在的保护作用，显示出良好的治疗前景[5-6]。2011年2月，阿齐沙坦的前药阿齐沙坦酯（azilsartan medoxomil，商品名：Edarbi）由美国食品与药品管理局（FDA）批准在美国上市[7]；2012年1月，阿齐沙坦（商品名：Azilva，アジFI（Ⅲ））由药品与医疗器械管理局（PMDA）批准在日本上市[8]。目前，国内尚无本品上市。

按中国药典以及相关要求[9-10]，本文经过反复摸索，建立了反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定阿齐沙坦片含量的方法，测得结果准确可靠，可用于阿齐沙坦片的含量测定。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪（安捷伦）；XS205DU型十万分之一电子天平（Mettler Toledo）；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钠为分析纯，戊烷磺酸钠为分析纯，水为纯化水；阿齐沙坦对照品（标定纯度：99.8 %，批号：151001，鲁南制药），阿齐沙坦中间体1﹛2-乙氧基-1-[[2’-(羟基脒基联苯-4-取代)甲基]-苯并咪唑]-7-羧酸甲酯，标定纯度：99.1 %，批号：151001A，鲁南制药﹜，阿齐沙坦片（规格：20 mg，批号：151201，151202，151203，鲁南制药）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Welch Ultimate XB C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-缓冲液（pH 2.8）（取1.56 g磷酸二氢钠和0.87 g戊烷磺酸钠，加入1000 ml水使溶解，用磷酸调节pH 2.8）（45:55）；检测波长：251 nm；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl。取阿齐沙坦对照品适量，用甲醇溶解并稀释制成每1 ml含0.2 mg的溶液，理论板数按阿齐沙坦峰计算不低于30 000。

2.2 溶液制备

取本品20片，混匀，研细，精密称取细粉适量（约相当于阿齐沙坦20 mg），置入100 ml量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取阿齐沙坦对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 ml约含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。取本品空白辅料适量（约相当于阿齐沙坦20 mg的处方比例量），置入100 ml量瓶，加甲醇适量，振摇并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为阴性空白溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 按上述色谱条件，取阿齐沙坦对照品和阿齐沙坦中间体1，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1 ml约含0.2 mg的溶液，作为系统适用性溶液。分别取系统适用性溶液、对照品溶液、供试品溶液及阴性空白溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，HPLC图谱见图1。实验结果表明：阿齐沙坦和阿齐沙坦中间体1的分离度为2.45，理论板数按阿齐沙坦峰计为51 254，符合规定；空白辅料在阿齐沙坦主成分保留时间处无辅料峰，对阿齐沙坦的含量测定无干扰。

图1 阿齐沙坦片含量测定HPLC图谱

2.3.2 线性与范围试验 称取阿齐沙坦对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 ml约含1 mg的溶液，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液1，2，5，3，10，5，50 ml，分别置入50，50，50，20，50，20，100 ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，量取主峰面积，以浓度C（mg/ml）对主峰面积A进行线性回归，得回归方程为：A=10 981C+11.98，r=1.0000。结果表明：阿齐沙坦浓度在0.021～0.5232 mg/ml范围内呈良好线性关系。

2.3.3 精密度试验 取线性与范围试验项下对照品储备液，分别精密量取8，10，12 ml，各置入50 ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1674 mg/ml（80 %），0.2092 mg/ml（100 %），0.251 mg/ml（120 %）的溶液，各配制3份。依法测定，记录色谱图。以峰面积考察精密度，计算RSD分别为0.23 %，0.09 %，0.16 %。表明精密度良好。

2.3.4 中间精密度试验 由不同操作者，在不同时间，用不同仪器照重复性项下测定方法测定本品含量，平均含量为99.6 %，RSD为0.46 %（n=6）。

2.3.5 溶液稳定性试验 取供试品溶液，在配制后0～8 h每隔1 h进样，按含量测定项下的方法测定，记录峰面积，以0 h的峰面积作为100 %含量，其他时间与0 h峰面积相比，计算变化值。经试验，供试品溶液在8 h内峰面积变化最大值为0.92 %<2.0 %，峰面积RSD为0.73 %，溶液在8 h内稳定。

2.3.6 回收率试验 取阿齐沙坦对照品适量与处方量的辅料，混合均匀，精密称取适量，用甲醇制成每1 ml约含阿齐沙坦0.16，0.2，0.24 mg的溶液（80 %，100 %，120 %），各3份，作为供试品溶液，另精密称取阿齐沙坦对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1 ml约含阿齐沙坦0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密量取供试品溶液及对照品溶液各10 μl，注入色谱仪，记录色谱图。根据峰面积，按外标法计算回收率，平均回收率为100.15 %，RSD为0.65 %（n=9）。

2.3.7 重复性试验 取本品20片，混匀，研细，取细粉适量（约相当于阿齐沙坦20 mg），置入100 ml量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。另取阿齐沙坦对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 ml约含0.2 mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。分别精密量取供试及对照液各10 μl，注入色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算其含量，平均含量为100.8 %，RSD为0.82 %（n=6）。

2.3.8 耐用性试验 取含量测定项下对照品溶液及供试品溶液，通过改变流速，调整流动相比例，更换同系列不同批的色谱柱进行试验（改变其中一项条件时，其余条件均保持标准条件不变），计算含量，衡量本方法在微调各种色谱条件时的耐用性，结果见表1。

表1 阿齐沙坦片含量测定方法耐用性试验结果

由表1可见，微调色谱条件后，测得含量符合规定，且无明显变化，本方法耐用性较好。

2.3.9 样品测定 取本品3批样品（批号：151201，151202，151203）及对照品，依法测定，含量分别为99.23 %，99.78 %，99.58 %，均符合规定。

3 讨论

在方法摸索过程中，当以乙腈-缓冲液（pH 2.8）（称取1.56 g磷酸二氢钠，加入1000 ml水使溶解，用磷酸调节pH 2.8）（20:80）为流动相时，色谱图运行至30 min仍未出主峰；当以乙腈-缓冲液（pH 2.8）（称取1.56 g磷酸二氢钠，加入1000 ml水使溶解，用磷酸调节pH 2.8）（35:65）为流动相时，主峰保留时间约为17 min，对称因子1.83，主峰与各杂质都达到基线分离。当以乙腈-pH 2.8缓冲液（称取1.56 g磷酸二氢钠和0.87 g戊烷磺酸钠，加入1000 ml水使溶解，用磷酸调节pH至2.8）（45:55）为流动相时，主峰保留时间约为9 min，对称因子0.95，与未增加离子对相比，峰形更对称，即增加离子对试剂改善了主峰峰形。

方法学研究表明：通过线性与范围试验、精密度试验、溶液稳定性试验、回收率试验、重复性试验、中间精密度试验、耐用性试验等研究，本法的精密度良好，回收率高，线性范围广，耐用性及溶液稳定性良好，表明本方法适合阿齐沙坦片的含量测定。