极性蛋白ASPP2在棘层肥厚型皮肤病组织中的表达

周瑞艳 段冲 冯艳 郑瑞

【摘要】 目的：探讨极性蛋白ASPP2在棘层肥厚型皮肤病中的表达特点及意义。方法：选取本院棘层肥厚型皮肤病患者121例，按照疾病种类不同分为湿疹组（n=15）、银屑病组（n=15）、扁平苔藓（lichen planus，LP）组（n=20）、结节性痒疹组（n=20）、脂溢性角化病（seborrheic keratosis，SK）组（n=23）、鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）组（n=13）、基底细胞癌（basal cell carcinoma，BCC）组（n=15），同时选取正常皮肤组织者30例为正常皮肤组。采用免疫组化方法检测ASPP2在各组中的表达情况。结果：ASPP2在湿疹、银屑病、结节性痒疹、LP、SK、SCC和BCC组中的阳性表达率明显高于正常皮肤组（P<0.05）；肿瘤组（SK、SCC、BCC）中ASPP2阳性表达率明显高于炎症性皮肤疾病组（湿疹、银屑病、结节性痒疹、LP），比较差异有统计学意义（ 字2=4.12，P=0.04）；恶性肿瘤组（SCC、BCC）中ASPP2阳性表达率明显高于良性肿瘤组（SK），比较差异有统计学意义（ 字2=4.71，P=0.03）。结论：极性蛋白ASPP2很可能与湿疹、银屑病、结节性痒疹、LP、SK、SCC和BCC的发病具有一定的相关性，且极性蛋白ASPP2在表皮肿瘤中很可能存在完全不同于其他器官组织肿瘤中的调节通路。

【关键词】 棘层肥厚； 极性蛋白； ASPP2； 免疫组化

【Abstract】 Objective：To investigate the expression and significance of polar protein ASPP2 in acanthosis skin disease.Method：A total of 121 patients with acanthosis skin disease in our hospital were selected.According to the different types of diseases，they were divided into eczema group（n=15），psoriasis group（n=15），lichen planus（LP） group（n=20），prurigo nodularis group（n=20），seborrheic keratosis（SK） group（n=23），squamous cell carcinoma（SCC） group（n=13），basal cell carcinoma（BCC） group（n=15），and 30 cases of normal skin organizer were selected as normal skin group at the same time.Immunohistochemical method was used to detect the expression of ASPP2 in each group.Result：The positive expression rate of ASPP2 in psoriasis，eczema，prurigo nodularis，LP，SK，SCC and BCC group were significantly higher than those of normal skin group（P<0.05），the positive expression rate of ASPP2 in tumor group（SK，SCC，BCC） was significantly higher than that of inflammatory skin disease group（psoriasis，eczema，prurigo nodularis，LP），the difference was statistically significant（ 字2=4.12，P=0.04），the positive expression rate of ASPP2 in malignant tumor group（SCC，BCC） was significantly higher than that of benign tumor group（SK），the difference was statistically significant

（ 字2=4.71，P=0.03）.Conclusion：The polarity protein ASPP2 may be associated with psoriasis，eczema，prurigo nodularis，LP，SK，SCC and BCC，and ASPP2 in epidermal tumors is likely to have completely different from other tissue tumor pathways.

【Key words】 Acanthosis； Polar protein； ASPP2； Immunohistochemical

First-authors address：First Clinical Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.05.007

濕疹（eczema）、银屑病（psoriasis）、结节性痒疹（prurigo nodularis）及扁平苔藓（lichen planus，LP）是皮肤科常见的炎症性疾病；脂溢性角化病（seborrheic keratosis，SK）、鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）、和基底细胞癌（basal cell carcinoma，BCC）是皮肤科临床上常见的皮肤肿瘤。上述7种常见的皮肤病，迄今为止，发病机制仍不清楚，但是在病理上均有棘层肥厚的特点，导致表皮增生[1]。既往研究表明，表皮增生性疾病，主要是角质形成细胞增殖加速、分化异常[2-3]。细胞的增殖和分化涉及细胞间紧密连接，即表皮的屏障功能。例如，有学者对银屑病发病机制研究发现，部分识别表皮的基因作为银屑病的危险因素，可以证明细胞间紧密连接（即表皮屏障功能）异常是银屑病发病的基础[4]，紧密连接的形成过程中逐渐形成细胞极性。细胞极性是指细胞形状、物质分布和功能的不对称性，是真核细胞在水平上迁移、发育和形成各种器官组织的关键步骤[5]，还有研究认为，细胞极性异常是上皮肿瘤的一个共同特点[6]。所以细胞极性对于多数细胞都是十分重要的属性。极性蛋白Apoptosis stimulating proteins 2 （ASPP2）是一个p53结合蛋白家族的促凋亡成员[7]，具有抑制细胞迁移和增殖的作用[8]，可以调节细胞间紧密连接和细胞极性。本项研究用免疫组化SP方法检测极性蛋白ASPP2在湿疹、银屑病、结节性痒疹、LP、SK、SCC、BCC和正常对照皮肤组织中的表达，并进行差异比较和分析，为湿疹、银屑病、结节性痒疹、LP、SK、SCC、BCC的发病机制、诊断及治疗提供新的理论基础。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年12月-2017年5月本院病理室确诊存档石蜡切块的棘层肥厚型皮肤病患者121例，同期选取本院门诊正常皮肤组织者30例为对照组。纳入标准：病理标本取自于本院门诊及住院患者；正常皮肤组织取自本院门诊接受美容或整形外科手术者，且均无其他相关皮肤疾病。排除标准：病理标本患者接受其他系统及局部药物治疗。按照疾病种类不同分为湿疹组（n=15）、银屑病组（n=15）、LP组（n=20）、结节性痒疹组（n=20）、SK组（n=23）、SCC组（n=13）、BCC组（n=15）、正常皮肤组（n=30）。各组标本临床资料如下：湿疹组男8例，女7例，平均病程2.3年，平均年龄30.5岁；银屑病组男8例，女7例，平均病程3.8年，平均年龄37.5岁；LP组男10例，女10例，平均病程1.6年，平均年龄42.5岁；结节性痒疹男11例，女9例，平均病程2.6年，平均年龄52.5岁；SK组男11例，女12例，平均病程3.2年，平均年龄56.5岁；SCC组男7例，女6例，平均病程4.1年，平均年龄59.5岁；BCC组男7例，女8例，平均病程3.6年，平均年龄57.5岁；正常皮肤组男14例，女16例，平均年龄38.5岁。本研究已经院伦理委员会审核批准。

1.2 方法 主要试剂：兔抗人ASPP2多克隆抗体，即用型SP免疫组化试剂盒均购自福建迈新生物技术有限公司。皮肤组织均经过常规石蜡包埋后切成4 μm厚的切片，脱蜡至水，以3%H2O2阻断内源性过氧化酶的活性，高压锅抗原修复，滴加正常兔血清封闭液，依次加入一抗、生物素化兔抗山羊IgG、链霉亲和素-过氧化物酶复合物，DAB显色，自来水充分冲洗，苏木素复染，中性树脂封片。以正常表皮作为对照组，以用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定标准 极性蛋白ASPP2阳性定位于细胞核，阳性染色为棕黄色至棕褐色颗粒，阴性为淡蓝色，镜下每张切片选取5个高倍视野，计数

2 000个细胞，参考Mohsin等[9]的标准，采用阳性细胞比例和染色强度综合评定阳性结果，即阳性细胞数<25%计0分、25%～49%计1分、50%～74%计2分、≥75%计3分；染色+计1分、++计2分、+++计3分。每张切片两项得分之和≤5分为阴性（-）、>5分为阳性（+）。

1.4 统计学处理 使用SPSS 22.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 极性蛋白ASPP2在皮肤组织中的表达 正常皮肤组织中，ASPP2染色强度强度+～++，分布集中在基底层和棘层，见图1；在湿疹、银屑病、结节性痒疹、LP皮肤组织中，ASPP2染色强度强度+～+++，且在表皮基本成弥漫分布，见图2～5；在SK、SCC及BCC皮肤组织中，ASPP2染色强度强度++～+++，且阳性细胞在瘤体内呈弥漫分布，见图6～8。

2.2 各组极性蛋白ASPP2表达水平比较 ASPP2在湿疹、银屑病、结节性痒疹、LP、SK、SCC和BCC组中的阳性表达率明显高于正常皮肤组，比较差异均有统计学意义（P<0.05），其余各组间比较差异均无统计学意义（P>0.05），见表1；肿瘤组（SK、SCC、BCC）中ASPP2阳性表达率明显高于炎症性皮肤疾病组（湿疹、银屑病、结节性痒疹、LP），比较差异有统计学意义（ 字2=4.12，P=0.04），见表2；恶性肿瘤组（SCC、BCC）中ASPP2阳性表达率明显高于良性肿瘤组（SK），比较差异有统计学意义（ 字2=4.71，P=0.03），见表3。

3 討论

正常细胞极性在细胞分化、增殖及定向迁移之间平衡的维持中起到关键性的作用，极性失调与多种增生性皮肤病、一些癌前病变及肿瘤侵袭转移关系密切[10]。极性蛋白ASPP2是一种肿瘤抑制因子，可以通过增强对p53的依赖，促进细胞凋亡[11]。至今为止，关于ASPP2的报道，主要是恶性肿瘤转移及耐药性的相关研究。例如，在肝癌的研究中发现ASPP2可以抑制肝癌血管的生长和增殖，还可以通过调节自噬潮来影响抗癌药物的耐药性和敏感性[12]。但目前，关于ASPP2在增生性皮肤疾病中的研究少之又少。

研究表明，极性蛋白ASPP2可促进间充质-上皮细胞转化（Mesenchymal-Epithelial Transition，MET）[13]，从而导致棘层肥厚，本研究结果显示，ASPP2在湿疹、银屑病、结节性痒疹、LP、SK、SCC和BCC组中的阳性表达率明显高于正常皮肤组织，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。Tordella等[14]发现在胃和宫颈的鳞状细胞癌中ASPP2的表达明显降低，这与本研究中结果相悖。这说明虽然鳞状细胞癌都是来源于上皮，但是表皮作为一种特殊的器官组织，发病机制与其他器官组织仍然有很大的不同。研究表明，ASPP2在恶性肿瘤中具有抑制细胞转移的作用[15]。本研究结果显示，肿瘤组ASPP2阳性表达率明显高于炎症性皮肤疾病组（P<0.05）；恶性肿瘤组ASPP2阳性表达率明显高于良性肿瘤组（P<0.05）。这是否与表皮恶性肿瘤极少转移有关，有待于进一步研究。

文献[16]报道认为，极性蛋白ASPP2通过对Par3的影响来控制细胞的黏附和极性。Par3（PDZ结构划分缺陷3）是一种分子支架，其功能是招募和组织空间信号因子[17]。大量研究证明，极性失调导致肿瘤发生的早期阶段与极性蛋白Par3密切相关[18-19]。ASPP2和Par3作为合作伙伴，可以协同调节上皮和间质转化之间的转化，完成细胞重塑的过程[13]。在肺、肾等由上皮细胞组成的组织中，Par3主要是通过a PKC来调节细胞定向迁移和细胞极性，从而诱导形成正确的组织结构[20]。表皮也是由上皮细胞构成，因此很可能在表皮肿瘤中，极性蛋白ASPP2作为Par3的调节因子，通过Par3/a PKC来调控其病理机制。

綜上所述，极性蛋白ASPP2很可能参与了湿疹、银屑病、结节性痒疹、LP、SK、SCC及BCC的发病；且极性蛋白ASPP2在表皮肿瘤中很可能存在完全不同于其他组织肿瘤的调节通路，很可能与Par3/a PKC共同来完成病理机制过程，有待于进一步研究。

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