Livin和Survivin在卵巢癌中的表达及相关性研究

刘若男　陈奎生

【摘要】 目的 探讨Livin、Survivin是否与卵巢癌的发生、发展有关并评价两者的相互关系。方法 利用免疫组化法检测76例卵巢癌、24例卵巢良性上皮性肿瘤标本中Livin、Survivin蛋白表达的情况。结果 卵巢癌中Livin阳性率为81.58%， 显著高于卵巢良性上皮性肿瘤的33.33%（P<0.05）。卵巢癌中Survivin阳性率为63.16%， 明显高于卵巢良性上皮性肿瘤的25.00%（P<0.05）。Livin蛋白表达阳性的卵巢癌中， Survivin的阳性表达率为64.52%；Livin蛋白表达阴性的卵巢癌中， Survivin的阳性表达率为57.14%， 相关分析表明两者表达无相关性（χ2=0.267， P>0.05）。结论 Livin、Survivin与卵巢癌的发生密切相关， 但两者在卵巢癌中的转录途径可能具有差异。

【关键词】 卵巢癌；Livin；Survivin；凋亡；免疫组化

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.07.002

Research of expression and correlation of Livin and Survivin in ovarian cancer LIU Ruo-nan， CHEN Kui-sheng. Department of Gynecological Tumor， Affiliated Tumor Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450008， China

【Abstract】 Objective To investigate relationship of Livin and Survivin with occurrence and development of ovarian cancer， and evaluate correlation between them. Methods Immunohistochemistry test was applied to detect expression of Livin and Survivin in 76 ovarian cancer cases and 24 benign ovarian epithelial tumor cases. Results Positive rate of Livin in ovarian cancer was much higher as 81.58% than 33.33% in benign ovarian epithelial tumor （P<0.05）. Positive rate of Survivin in ovarian cancer was much higher as 63.16% than 25.00% in benign ovarian epithelial tumor （P<0.05）. In ovarian cancer with positive Livin protein， the positive expression rate of Survivin was 64.52%， which was 57.14% in ovarian cancer with negative Livin protein. The analysis showed no correlation between them （χ2=0.267， P>0.05）. Conclusion Livin and Survivin are closely related with occurrence of ovarian cancer， while there may be difference in transcription way between them in ovarian cancer.

【Key words】 Ovarian cancer； Livin； Survivin； Apoptosis； Immunohistochemistry

卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一， 晚期患者5年生存率仅为25%～30%。研究揭示凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein， IAP）在细胞凋亡的调控中发挥非常重要的作用， 其中Livin、Survivin为最引人注目的两个成员。Survivin在许多肿瘤包括在卵巢癌中的表达国内外已有许多报道。Livin和Survivin一样， 在某些恶性肿瘤细胞和转化细胞中高表达， 但在卵巢癌中的表达方式至今仍不清楚[1]。基于以上考虑， 本研究拟采用免疫组织化学SP法检测Livin、Survivin蛋白在良、恶性卵巢上皮性肿瘤组织中的表达， 分析卵巢癌组织中Livin与Survivin蛋白表达的相关性， 旨在加深对卵巢癌变分子基础的了解， 为卵巢癌的防治提供重要的理论基础和手段， 现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 组织标本收集郑州大学附属肿瘤医院病理科保存的上皮原发性卵巢肿瘤石蜡标本共100例， 所有标本常规HE染色， 请两名病理专家认定。其中卵巢癌标本76例， 供体年龄25～76岁， 平均年龄（53.70±7.43）岁， 手术前均未接受放、化疗等治疗；包含45例浆液性乳头状囊腺癌， 22例粘液性囊腺癌， 8例子宫内膜样腺癌， 1例透明细胞癌；高分化癌18例， 中分化癌31例， 低分化癌27例；Ⅰ期卵巢癌7例， Ⅱ期卵巢癌17例， Ⅲ期卵巢癌46例， Ⅳ期卵巢癌6例。卵巢良性上皮性肿瘤标本24例， 供体年龄28～69岁， 平均年龄（46.30±7.28）岁；包含19例浆液性乳头状囊腺瘤， 5例粘液性囊腺瘤。

1. 2 研究方法 本研究参照说明书行免疫组织化学SP法， 光学显微镜下Livin和Survivin免疫组化产物为棕黄色细颗粒状， 多位于细胞质， 偶可见于细胞核。随机观察10个高倍镜下视野并参照文献[2]：据阳性细胞数占所有肿瘤细胞数的百分比计算出Livin和Survivin蛋白的表达率， 同时根据细胞染色强度分别记录为：（++）阳性细胞的面积≥50%， 深染色；（+）阳性细胞的面积≥10%， <50%， 较深染色；（-）无明显阳性细胞或阳性细胞面积<10%， 浅染色。

1. 3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验；使用Spearman相关检验方法分析指标间有无相关性。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 卵巢肿瘤中Livin的表达情况 76例卵巢癌组织和24例卵巢良性上皮性肿瘤组织中， Livin蛋白表达的阳性数分别为62例和8例， 阳性表达率分别为81.58%、33.33%， 两种病理类型阳性表达情况比较， 差异具有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2. 2 卵巢肿瘤中Survivin的表达情况 76例卵巢癌组织和24例卵巢良性上皮性肿瘤组织中， Survivin蛋白表达的阳性数分别为48例和6例， 阳性表达率分别为63.16%和25.00%， 两种病理类型阳性表达情况比较， 差异具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2. 3 卵巢癌中Livin和Survivin表达的相关性 62例Livin蛋白阳性表达的卵巢癌组织中， Survivin蛋白阳性表达40例， 其阳性表达率为64.52%；14例Livin蛋白表达阴性组织中， Survivin蛋白阳性表达8例， 其阳性表达率为57.14%。通过Spearman相关分析表明两者的表达无相关性（χ2=0.267， P>0.05）。见表3。

3 讨论

肿瘤的发生与发展离不开细胞凋亡/增殖的失衡， 细胞凋亡抑制是正常细胞转化为肿瘤细胞的重要因素， IAP家族就是一类存在于多个物种中的凋亡抑制蛋白。

3. 1 Livin蛋白在卵巢癌发生与发展中的作用 Livin蛋白含有一个杆状病毒IAP重复区（baculoviral IAP repeat， BIR）结构， 在羧基端还有一个环指样结构。BIR结构域是Livin蛋白发挥其抗凋亡活性的最主要因素， 环指样结构域能够介导其于亚细胞水平的分布。凋亡刺激信号达到一定强度作用于细胞后， Caspase的酶水解作用就会被激活， 从而执行凋亡功能[3]。Livin的信号通路既有外在途径（细胞表面死亡受体）， 又有内在途径（细胞色素C及化学药物）， 均能够干扰Caspase的活性而抑制细胞的凋亡。本研究采用免疫组织化学SP法检测了76例卵巢癌组织和24例卵巢良性上皮性肿瘤组织中Livin蛋白的表达， 阳性率分别为81.58%、33.33%。卵巢癌明显高于卵巢良性上皮性肿瘤， 这表明Livin与卵巢癌的发生有密切关系。

3. 2 Survivin蛋白在卵巢癌发生与发展中的作用 Survivin在结构上与其他IAP家族成员有所不同， 表现为N端仅有一个半胱氨酸/组氨酸为基础的锌指结构——部分保守的BIR， C端无环指结构， 代之以α螺旋缠绕区， 体外实验显示缺失该结构可增强其凋亡抑制功能。Survivin通过直接或间接抑制Caspase的活性来阻断内、外源性两个凋亡途径中的最后通路而抑制凋亡， 还可间接借助分子中唯一的BIR结构同线粒体活化因子Smac/DIABLO相作用， 抑制Caspase级联反应[4]。本研究采用免疫组织化学SP法检测76例卵巢癌组织和24例卵巢良性上皮性肿瘤中Survivin蛋白的表达， 阳性率分别为63.16%、25.00%。卵巢癌明显高于卵巢良性上皮性肿瘤， 这表明Survivin与卵巢癌的发生同样具有密切联系。

3. 3 Livin和Survivin在卵巢癌中的相关性 Livin与Survivin虽然同属于IAP家族， 但它们之间仍存在较多区别。Livin的C端有一个环指样结构， 而Survivin却没有；Livin蛋白只有26.3%的氨基酸序列和Survivin一样；在肿瘤中Survivin既能调节凋亡也能调节分化， Livin只能调节细胞凋亡[5]。有研究发现正常膀胱组织中Livin不表达， 膀胱癌组织中却高度表达， 认为Livin可成为早期判断膀胱癌复发的一个敏感指标， 而不建议Survivin作为判断膀胱癌是否复发的肿瘤标志物[6]。Yagihashi等[7] 的研究提示胃肠道癌患者Livin抗体表达的阳性率为47.00%， 并且和Survivin抗体没有相关性。然而在卵巢癌组织中Livin与Survivin的表达有无相关性国内还未见报道， 国外报道也很少。本研究结果显示， Livin和Survivin蛋白在卵巢癌组织中的含量显著高于卵巢良性上皮性肿瘤组织（P<0.05）。这表明两者均在卵巢癌的发生中起了重要的促进作用， 可能具有协同作用。但在实验中显示卵巢癌组织中Livin蛋白与Survivin蛋白的表达无相关性， 提示了这两个基因的转录途径可能具有差异。

参考文献

[1] Yan B. Research progress on Livin protein： an inhibitor of apoptosis.Mol Cell Biochem， 2011， 357（1-2）：39-45.

[2] Lu S， Zhang B， Wang Z. Expression of survivin， cyclin D1， P21（WAF1）， caspase-3 in cervical cancer and its relation with prognosis. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci， 2005， 25（1）： 78-81.

[3] Premkumar DR， Jane EP， Pollack IF. Cucurbitacin-I inhibits Aurora kinase A， Aurora kinase B and survivin， induces defects in cell cycle progression and promotes ABT-737-induced cell death in a caspase-independent manner in malignant human glioma cells. Cancer Biol Ther， 2015， 16（2）：233-243.

[4] Liu T， Brouha BD. Rapid induction of mitochondrial events and caspase-independent apoptosis in Survivin-targeted melanoma cells. Oncogene， 2004， 23（1）：39-48.

[5] Crnkovi?-Mertens I， Semzow J， Hoppe-Seyler F， et al. Isoform-specific silencing of the Livin gene by RNA interference defines Livin beta as key mediator of apoptosis inhibition in HeLa cells. J Mol Med（Berl）， 2006， 84（3）：232-240.

[6] Xi RC， Sheng YR， Chen WH， et al. Expression of survivin and livin predicts early recurrence in non-muscle invasive bladder cancer. J Surg Oncol， 2013， 107（5）：550-554.

[7] Yagihashi A， Asanuma K， Tsuji N， et al. Detection of anti-livin antibody in gastrointestinal cancer patients. Clin Chem， 2003， 49（7）： 1206-1208.

[收稿日期：2015-10-29]