CRP干片在干化学仪器内放置时间对其测定值的影响

张君，程云章

上海理工大学，上海 200093

CRP干片在干化学仪器内放置时间对其测定值的影响

张君，程云章

上海理工大学，上海 200093

目的探讨CRP干片在干化学仪器上存放时间过长对检测结果的影响，为CRP干片的临床使用提供必要的参考。方法选取高、低两种浓度的质控品，每隔8 h对两种浓度的质控品进行20个测试。判读结果的精密度和准确度是否符合规定。结果CRP干片在机时间超过48 h对检测结果影响较大，精密度和准确度均不合格。结论CRP干片装载到机器上后，需在48 h内尽快使用。

CRP干片；在机稳定性；实验室质控；精密度

近年来，Ortho公司的干化学技术由于其结果准确，抗干扰能力强，检测速度快等优势，受到越来越多临床检验科室的青睐。但是干化学检验所需的试剂载体—干片，对储存要求比较严格，需要冷冻或冷藏储存。拆包后的干片也需要尽快使用，否则干片中的某些成分容易失效，影响检验结果的准确性。然而某些基层医院测试量非常小，1个干片试剂包（50个测试）经常需要花很多天才能用完。

C-反应蛋白由肝脏合成，是一种急性反应蛋白。在急性期反应中，可以观察到一些血浆蛋白的浓度升高，其中包括CRP。CRP浓度的测定有助于检测和评估炎症、组织损伤和感染。如果CRP浓度不准确，会对临床医生诊断疾病时造成误导，因此确保CRP浓度测定的准确显得尤为重要[1]。

为了分析CRP干片在全自动干生化分析仪Vitros 350上放置时间会对检验结果造成何种影响，该文对C-反应蛋白测定（CRP）干片进行了稳定性研究，旨在对干片的临床使用提供一些参考。帮助基层医院在购买CRP测定干片时选择合适的规格和数量，以免造成不必要的浪费。

1 材料和方法

1.1 仪器

①Ortho公司生产的Vitros 350全自动干生化分析仪；②上海大龙 1 000 μL 加样枪（YE4A342684）。

1.2 试剂

①C-反应蛋白测定（CRP）干片（批号371208962224）；②Ortho公司原厂的定标品Kit 7（批号1320498）；③Ortho公司原厂的质控品CRP PV 1（批号N5113）和CRP PV 2，（批号N5115）；④Ortho公司原厂的免疫洗液Immuno-Wash Fluid（批号 B4840）。

1.3 实验步骤

①对Vitros 350干化学分析仪进行调试维护，保证设备运行正常，并使用Kit 7完成CRP的定标。②将液体CRP PV 1、PV 2分装，标记，然后立即放入冰箱内保存备用。③同时从冰箱中取出10个同批次的CRP测定干片，复温30 min后立即装载到机器上。④立刻运行CRP PV 1和PV 2，各20次，依据厂家文件FRM23509，判断标准差SD和变异系数CV%是否在限值内。如在限值内，则继续下一步骤。如超限则终止实验。⑤间隔8 h后，再次运行CRP PV 1&2，各20次，判读标准同步骤4，同时依据Westgard多规则质控程序，判断质控是否失效。计算步骤5中的均值与步骤4中的均值的偏倚（%），判断是否超出室间质量评价标准规定的±25%的可接受范围。⑥如果步骤5的数据未超限，则重复步骤5，如超限则终止实验。

表1 批内精密度实验结果及其对应的SD值和CV%值

2 实验原理和结果

临床试验室通常采用室内质控和室间质评这两种评价方法来判断结果是否准确。室内质控是监测一个检测系统，包括方法学、仪器、试剂、环境及操作过程等综合因素作用下结果的稳定性。室间质评是检测、控制实验室测定的准确度。是实验室结果在实验室间的互认的基础。该文即采用室内质控和室间质评两种方法，研究CRP干片在干化学分析仪器内放置时间对其测定值的影响。

2.1 室内质控评价

室内质控最基本的评价方法是精密度判定。通常是对稳定的样品作多次测定，求这些重复测定值的均值和标准差，以及变异系数CV。对某样品作多次重复测定，均值就是这组测定值的平均水平。标准差是各重复测定值对于均值的离散程度。标准差大小反映了该测试的精密度水平。标准差越大，表明测定值位于均值附近的概率较小，即测定的精密度低。反之，标准差越小，表明测定值位于均值附近的概率较大，即测定的精密度高。精密度又可以分为批内精密度、批间精密度和天间精密度。见图1。

2.1.1 批内精密度 批内精密度是指对同一标本用同一方法在相同条件下重复测定所得的各次结果间或各次结果与均值之间的符合程度。对批内精密度进行评价，一般是一批内重复测量20～30次。该次实验则选取高低水平的两种质控品：PV1和PV2，对两种质控品各运行20个测试，记录检测结果，计算均值，SD和CV。根据均值和测试次数，在厂家的提供的指导文件FRM23509中找到对应的允许SD和允许CV[2]。将测试所得的SD值和CV值和厂家的允许值进行比较。如没有超过允许值，则说明结果有效，并将所得的均值作为基准，用于质控判断，见表 1、表 2。

图1 实验室质控评估值示意图

表2 厂家的SD和CV%合格值

依据厂家文件FRM23509的Guideline SD和CV%值，当干片在设备上存放时间在48 h内，PV 1和PV 2的批内精密度都合格，当在机存放时间达到56 h时，PV 2的SD值和CV%值都超限。

2.1.2 天间精密度 天间精密度是在不同时间重复检测同一样本所得的变异性。根据EP5-A2《定量测量方法的精密度性能评价》的要求，天间精密度的试验需连续测试10 d或20 d，而对于短时运行，样本可在实验过程的任意时刻进行[3]。因此该次实验每8 h做一组试验，所得的结果作为评价天间精密度的基础数据。

该文对天间精密度的评价标准采用Westgard多规则质控程序。Westgard多规则质控程序是利用5种不同的判断规则来确定一个分析结果是在控还是失控的方法，它被广泛地应用与临床实验室[4]。Westgard多规则质控程序大底如下。

13S：单一水平的质控测量数据超出了平均值±3 SD的控制限范围，为失控。22S：连续2个质控测量结果在同侧超过平均值±2 SD控制限，失控。R4S：一个质控水平的连续两次质控数据，一个超过了mean+2SD，一个超过了mean-2 SD，为失控。41S：4次连续的质控结果超过了同一侧的mean±1SD质控线，为失控。10x：连续10个质控结果都落在均值的一侧，为失控。见表3、图2、图3。

表3 天间精密度实验结果

表4 允许误差结果(%)

图2 westgard多规则质控流程图

图3 天间精密度实验结果折线图

根据Westgard多规则质控程序，当CRP干片在机存放48 h，PV2的结果大于2 SD，达到警戒值。当CRP干片在机存放时间达56 h后，PV1和PV2的结果均大于3S D，违反了13S规则。且PV1和PV2的连续7个质控数据呈逐渐上升的趋势，违反了7T规则。因此试验数据失控。

2.2 室间质控评价

对于室间质评，从1999年卫生部临床检验中心已不再采用VIS和DI，而是采用类似美国临床检验能力验证计划（CLIA’88）评价模式。即靶指±允许总误差。

卫生部临床检验中心室间质量评价标准规定C-反应蛋白（CRP）的可接受范围是靶值±25%[5]。该实验以首次（即CRP干片刚上机）测得的均值作为靶值，并以±25%以内作为可接受范围，以此来判定CRP干片在机存放时间多久之后，室间质评失败，结果不可控。

CRP干片在机时间达到84 h后，PV2的偏倚大于靶值+25%，超出临床检验室间质量评价标准规定的可接受范围。测定值的准确性已经得不到保证。见表4、图4。

图4 允许误差折线图

3 讨论

CRP干片中的试剂成份特殊，它的在机稳定时间非常短，长时间放置会影响CRP的测定值，究竟CRP干片在干化学分析仪上放置时间会对CRP测定值造成何种影响，目前尚无相关报道[6-9]。针对这个问题，该试验采用高，低两种浓度的CRP质控品—PV1和PV2，对批内精密度，天间精密度和结果偏倚进行了验证。结果显示CRP干片在机放置48 h内，PV1和PV2的批内精密度变化都较小，在可接受范围内。CRP干片在机放置时间达56 h，PV2的批内精密度超出标准。PV1和PV2的天间精密度在56 h均出现失控[10-11]。且根据Westgard规则，当CRP干片在机存放48 h的时候，PV2的质控值已经超过了2 SD，达到了预警线。CRP测定值随在机时间增长呈正偏倚，在机56 h后PV1的偏倚超出可接受范围[12-13]。

综上所述，在测定C-反应蛋白（CRP）时，一定要保证CRP干片在机存放时间不超过48 h，这样可确保测定结果的准确性。基层医院应根据实际测试需求，在生化分析仪上放置合适数量的CRP干片以保证CRP干片在稳定期内用完，减少不必要的浪费，同时也保证结果的准确性与精密度。

[1]EP5-A2,Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods[S].

[2]Jerome Greyson.Problems and possibilities of chemistry on dry reagent carriws[J].Journal of Automatic Chemistry,1981,3(2):66-71.

[3]SA Iversen,A Walker,TY Avades,JF Wilson.Limitation of the VitrosTM dry-slide technique in measuring high[J].Ann Clin Biochem,2001(38):711-713.

[4]Krska Rudolf,Molinelli Alexandra.Rapid test strips for analysis of mycotoxins in food and feed[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry,2009，393(1):67-71.

[5]VITROS system verification[S].Ortho Clinical Diagnotics,USA.2004.

[6]GB/T 20470-2006,临床实验室室间质量评价要求[S].

[7]郭丽洁,邹大伟,赵明.Amon试剂在Vitros250干化学仪内放置时间对其血氨测定值的影响[J].中国实验诊断学,2008,12(4):539.

[8]安岩.血液标本放置时间与血氨检测值之间的关系[J].World Health Digest,2008,5(4):101.

[9]Westgard多规则质控程序[EB/OL].http://www.qinms.com/htmlfile/blogs/westgard-rules.html.

[10]史光华，姜慧英，刘连义，等.VITRO S350性能验证及在急诊医学中的应用[J].国际检验医学杂志,2013,22(34)：3056-3058.

[11]吕赛平，伍志杰，邹学森.自动生化分析仪精密度性能的评价[J].现代检验医学杂志,2007,22(4):48-49.

[12]杨自华，何林，周克元.检验医学干化学分析技术进展[J].综述与专论，2005(4):1-3.

[13]张心菊，吴炯，郭玮，等.强生Vitros 950生化检测系统性能验证[J].检验医学，2006，21(6):564-569.

Effect of Placement Time of CRP Dry Plate in the Dry Chemical Instrument on the Measurement Value

ZHANG Jun,CHENG Yun-zhang
Shanghai University of Technology,Shanghai,200093 China

ObjectiveTo study the effect of placement time of CRP dry plate in the Dry chemical instrument on the measurement value and provide necessary reference for the clinical use of CRP dry plate.MethodsThe high concentration and low concentration of quality control articles were selected and they were given 20 tests every 8 h,and whether the precision and accuracy of results was determined.ResultsWhen the in-machine time of CRP dry plate was more than 48 h,the effect on the test results was bigger,and the precision and accuracy were not qualified.ConclusionThe CRP dry plate needs to be used within 48 h after fixing on the machine.

CRP dry plate;In-machine stability;Quality control in the laboratory;Precision

R446 [文献标识码]A [文章编号]1672-5654（2017）11（c）-0022-04

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.33.022

张君（1986-），男，上海人，在职硕士，研究方向：生物医学工程。

2017-08-25）