一种用于病理切片封固剂快速干燥的方法

包 骥，李 丽，陈 菲，邓 杨，步 宏

迈新·技术交流

一种用于病理切片封固剂快速干燥的方法

包 骥，李 丽，陈 菲，邓 杨，步 宏

病理切片；封固剂；快速干燥；真空加热；紫外线

封固也叫封片，是制做常规组织切片标准步骤的最后一道工序[1]，封片的过程是将染色好的切片用封固剂封固起来，即把盖玻片与载玻片用封固剂粘合在一起。切片完全干燥的衡量标准是在用两手指较用力搓时，盖玻片与载玻片间不应有滑动。此后可将切片竖立，前后叠放，相互不会粘连。目前国内病理实验室多采用常温自然干燥法，需将切片单层平放7～14天，封固剂才能完全干透，这种做法比较费时，而且会占用许多空间。在其完全干透之前，该病理切片既不利于用来进行全片数字扫描(容易滑动或卡片)，也不利于存放(容易和其他切片相互粘连)。因此，使用新的方法和设备缩短病理切片制作过程中封固剂的干燥时间，对于病理切片的制作来说有着重要的意义。而在目前国内大多数文献中，有关封片步骤的研究报道极少，更极少有报道研究加快封固剂干燥的方法或设备[2-4]。本文现介绍一种简单快速的干燥方法，其设备是本团队自主研发、供病理切片干燥专用。

1 材料与方法

1.1材料HE染色切片；中性快干胶封固剂(江源中性快干胶，100 mL，批号14102202)；紫外真空加热干燥箱(病理切片快干箱；主要部件包括箱体、显示屏、切片载板、抽气管、紫外光灯(图1)；型号PSFD-01；接入电源220～240 V；冷台(赛默飞公司；Histostar Cold Module；220～240 V～50/60 Hz，230 VA)；烘箱(赛默飞公司；Heratherm OMS100；230 V，13.3 A，3.06 kW)。

1.2方法(1)封固：将已经染色完成的病理切片用中性快干胶封固剂封片。(2)干燥：将刚封固好的病理切片放入紫外真空加热干燥箱中进行真空加热干燥+人工紫外光照射25 min(50 ℃，气压500 Pa，人工紫外光灯功率36 W)。(3)冷却：将该切片置于冷台上进行冷却5 min。(4)回温：将该切片放置常温下干燥30 min。对照组分别使用常温自然干燥法或烘箱加热(50 ℃)干燥法。

图1病理切片紫外真空加热干燥箱结构图：A.真空干燥区域(病理切片干燥的区域，内置气压感应计与温度计)；B.加热区域(封闭的水加热区域，内置电热丝)；C.显示屏(显示和设置箱内的温度、气压以及干燥时间)；D.切片载板(装载病理切片)；E.抽气管(与真空泵相连)；F.紫外光灯

2 结果

经上述步骤处理的切片，封固剂在1 h内完全干透(图2)，之后可用于全片数字化切片扫描。此后也可将切片竖立，前后叠放，相互不会粘连，长期保存，颜色亦不受影响。便于储存、提高效率、降低成本、改善环境。对照组切片封固剂均在7天后完全干透。

ABCD

图2使用烘箱加热干燥(50 ℃)和本组实验中的紫外真空加热干燥箱干燥1 h后的结果对比：A.使用烘箱加热干燥(50 ℃)的切片；B.用手指推盖玻片后，盖玻片明显倾斜；C.使用紫外真空加热干燥箱干燥的切片；D.用手指推盖玻片后，盖玻片不能被推动

3 讨论

封固剂干燥的过程主要是溶剂的蒸发以及胶体的凝固，本实验能够实现快速干燥主要有以下几方面的原因：一方面，真空+加热能够使得胶体内的水分受热后迅速向周围的准真空环境渗透蒸发；另一方面，由于紫外光是一种电磁波，在其穿透溶剂时会带动分子震动和转动，从而产生热量，加速水分的蒸发，由于是直接作用到分子级内部，所以该方法比单纯的加热干燥效果更好、更省时间。而封固剂凝固本是一个放热的过程，胶体水分基本蒸发后，放到冷台上冷却，能够加速凝固过程。

本组实验使用3种方法进行对比实验：(1)传统干燥法：让病理切片在常温下自然干燥，使用这种方法中性快干胶需要7天时间才能完全干透。(2)用烘箱加热(50 ℃)法：然而实验表明单纯的加热不能有效缩短封固剂干燥时间，使用该方法让中性快干胶完全干透仍需要约7天时间。(3)本组新方法：中性快干胶干燥花费的时间在1 h左右，大大地加快了切片干燥的速度。注意事项：紫外真空加热干燥箱温度过低<45 ℃时，干燥时间会大为延长；温度>55 ℃时，中性快干胶内易出现小泡；温度如再增高>75 ℃，中性快干胶黏性反而降低，甚至冒出烟雾，切片会损毁。而加热使用中真空度如果过高，气压<500 Pa，中性快干胶内易出现小的气泡；而加热使用中真空度如果过低，气压>10 000 Pa，干燥时间明显延长，超过1 h，中性快干胶易出现收缩，致盖玻片移位。

而使用上述方法的条件，在保证切片质量的前提下，从一开始的真空加热干燥一直到最后的自然干燥，中性快干胶干燥总花费时间控制在1 h左右，大大地加快了切片干燥的速度，达到了预期目的。使病理切片可以尽快的用于全片数字化切片扫描，也更便于储存、提高了效率、降低了人工成本及改善室内环境。

[1] 付先利, 吴建农. 一种解决切片干燥的方法[J]. 临床与实验病理学杂志, 2013,29(7):807.

[2] 陆敏华, 钱梦晔, 印永祥, 张炜明. 浸染式全自动HE染色封片一体机的使用和维护保养体会[J]. 临床与实验病理学杂志, 2015,31(5):592-593.

[3] 朱育连, 张丽芳, 郑巧灵, 等. Leica全自动染色封片一体化工作站在病理常规制片中的应用体会[J]. 临床与实验病理学杂志, 2014,30(11):1324-1325.

[4] 朱小兰, 骆新兰, 武鸿美, 等. Symphony全自动染色封片工作站在常规病理中的应用[J]. 临床与实验病理学杂志, 2015,31(4):473-474.

R 361+.2

B

1001-7399(2017)10-1165-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.10.029

时间：2017-10-23 13:30 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20171023.1330.029.html

接受日期：2017-06-19

四川省卫生计生委科研课题(16PJ336)

四川大学华西医院病理研究室，成都 610041

包 骥，男，副研究员。E-mail: baoji@scu.edu.cn

步 宏，男，博士生导师，主任医师，教授