从一道试题再说血细胞计数板的使用

徐业义

（常州市田家炳高级中学 江苏常州 213000）

1 试题（部分）

（2021苏锡常镇高三一模生物试题20）（3）用移液器吸取少量酵母菌培养液，从计数板的_______（填图1字母）处沿盖玻片的下边缘滴入一小滴。加样后观察血细胞计数板侧面，不正确的是_______（填图2字母）。

图1 血细胞计数板示意图

图2 血细胞计数板侧面示意图

2 题目分析，问题聚焦

本小题的第一空考查血细胞计数板使用的培养液添加位置问题。图1中有4个点可供选择，但究竟从哪个点（哪些点）滴加才能使培养液渗入到计数室呢？图2中供选答案A和B的区别是：A图表示吸掉了多余的培养液，内侧凹槽内不再有培养液。B图表示没有吸掉多余培养液，内侧凹槽内仍有培养液。内侧凹槽内有培养液对实验结果会有影响吗？下面分别通过实验来加以说明。

2.1 培养液该从何处滴入才能渗入到计数室

血细胞计数板在使用时要“先将盖玻片放在血细胞计数板的计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入”。d处被盖玻片覆盖，不处于盖玻片的边缘，培养液无法从d处滴入，其余3处都处于盖玻片的边缘，滴入培养液能渗入计数室吗？笔者实际操作结果是：从a、c两处滴入培养液效果是一样的，都只能渗入到外侧平台而无法进入内侧凹槽（图3），当然也就不能到达计数室。从b处滴入，1滴可渗入本侧计数室，再滴3滴（平均）可渗入对侧计数室（利用血细胞计数板计数属于定量实验，需要多次测量取平均值，所以一般是两个计数室都要有培养液渗入）。因此，就试题给定的4个位置来说，只能从b处滴入。除了b处，还有其他滴入位置吗？尝试了图3中的e处，发现滴入的培养液滴数与滴入b处的相近，1滴渗入本侧计数室，再滴2.8滴（平均）渗入对侧计数室。要使两侧计数室都有培养液，除了从b（e）处滴入约4滴，还可采用分别从b（e）、g（f）处各滴入1滴，根据最终的计数结果比较，两种滴加方法效果是相同的。

图3 血细胞计数板部位及名称标示（血盖片尺寸22 mm×26 mm）

通过实验可知，题中第一空只能选择b，如果还给了e位置，也是要选的。滴加培养液位置的规律为：在血盖片上、下边缘的内侧凹槽以内（含内侧凹槽）任一点滴加培养液都可渗入计数室，而在血盖片上、下侧边缘内侧凹槽（不含）以外、侧边缘滴加培养液则不能渗入计数室。

2.2 内侧凹槽有培养液对计数结果有影响吗

人教版教材要求将“多余培养液用滤纸吸去”。笔者实验发现用吸水纸从血盖片边缘吸多余培养液，有时内侧凹槽内培养液会被完全吸掉，有时仍有残余。只有将吸水纸拧出小尖端伸入到内侧凹槽内才能保证将多余培养液完全吸掉。内侧凹槽内残余的培养液会不会使血盖片处于一定的漂浮状态，造成血盖片下表面与计数室底部之间的距离大于0.1 mm而计数不准呢？笔者进行了测试，结果见表1。

表1 内侧凹槽内残余培养液对计数结果的影响

从表1的数据可以明显看出，内侧凹槽内有培养液时计数室内细胞数要大于没有培养液时的，且计数室内细胞数随着残余培养液的增多而增多。在吸去多余培养液时，观察显微镜视野中酵母菌细胞的移动情况，发现：大部分酵母菌处于计数室底部不随多余培养液的吸掉而移动，有少部分酵母菌处于培养液的上层，随着多余培养液的吸掉而快速移动，直到内侧凹槽内不再有培养液，酵母细胞的移动才逐渐停止。不管是计数结果，还是观察吸去多余培养液时酵母菌的移动情况，都表明只有将多余培养液完全吸掉（内侧凹槽内看不到液体）计数室内的酵母细胞数才不会继续减少而达到稳定。所以题目第二空必须选图2的B。

3 实验拓展：能否用普通盖玻片代替血盖片进行计数

血盖片是血细胞计数板的专用盖玻片，它比普通盖玻片要大、厚、重，规格有22 mm×26 mm×0.34 mm（0.45 g）、20 mm×22 mm×0.5 mm（0.5 g）、24 mm×50 mm×0.17 mm（0.47 g）等，第一种最为常见。不少生物实验室只有普通盖玻片而没有血盖片，普通盖玻片常用的规格是18 mm×18 mm×0.13 mm（0.09 g），一个盖玻片只能勉强同时盖住两个计数室（两计数室间的距离约17 mm），且因普通盖玻片太轻以及水的浸润现象等原因，从盖玻片边缘滴入培养液后常会出现盖玻片向血细胞计数板边缘移动的现象。这样，重新摆正盖玻片的位置后再吸掉多余培养液时会造成更多细胞已经沉降到计数室底部，从而造成计数数值偏大。笔者通过在普通盖玻片中央滴加一滴清水来增加盖玻片的重量而防止滴加培养液时的移动，取得了较好的效果（表2）。

表2 普通盖玻片是否滴加清水与血盖片的计数

从实验结果来看，在普通盖玻片上滴加清水后与血盖片的计数结果并无明显差异。而如果用普通盖玻片不滴加清水则计数结果明显要比血盖片的要大。因此，如果没有血盖片必须使用普通盖玻片时，要尽量保证普通盖玻片在滴加培养液时不要移动。