复方蛤青胶囊质量标准研究

吴 芳，杨燕子，樊宝娟，罗定强，戴 涌

（陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710061）

·检验检测·

复方蛤青胶囊质量标准研究

吴 芳，杨燕子，樊宝娟，罗定强，戴 涌

（陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710061）

目的 建立复方蛤青胶囊的质量标准。方法 采用薄层色谱（TLC）法定性鉴别制剂中的紫菀、前胡和五味子；采用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中黄芪甲苷和苦杏仁苷的含量。结果 建立的TLC法科学，专属性强；黄芪甲苷进样量在0.946～9.46μg范围内与峰面积线性关系良好，r＝0.999 5，平均回收率为101.12%，RSD为4.17%（n＝7）；苦杏仁苷进样量在0.370～5.813μg范围内与峰面积线性关系良好，r＝0.999 6，平均回收率为96.83%，RSD为3.08%（n＝8）。结论 建立的方法科学、简便、专属性较强，可有效控制复方蛤青胶囊的质量。

复方蛤青胶囊；紫菀；前胡；五味子；黄芪甲苷；苦杏仁苷；质量标准

复方蛤青胶囊由干蟾、黄芪、白果、紫菀、苦杏仁、前胡、附片、南五味子和黑胡椒组方，同系列片剂收载于2015年版《中国药典（一部）》。复方蛤青系列制剂均有补气敛肺、止咳平喘和温化痰饮功效，临床常用于治疗肺虚咳嗽、气喘痰多、老年慢性气管炎、肺气肿等。复方蛤青胶囊原标准中部分薄层色谱（TLC）鉴别项的专属性不符合要求，含量测定项采用薄层扫描法测定黄芪甲苷的含量，专属性和准确性也有待提高。为此，本研究中考察了原有项目的专属性和耐用性，删除不适用项目，并根据处方、功效和工艺，增加新的检验项目，增加了TLC法定性鉴别方中的紫菀、前胡和五味子，采用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中的黄芪甲苷和苦杏仁苷含量，以此建立复方蛤青胶囊可靠、有效的质控标准。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters Alliance型高效液相色谱仪，包括 2487／2695型双波长紫外检测器、Empower色谱工作站（美国Waters公司）；BS224S型、BP211D型电子分析天平（德国赛多利斯公司）。

1.2 试药

紫菀对照药材（批号120956－201106）、白花前胡甲素对照品（批号111711－200501）、黄芪甲苷对照品（批号 110781－200613）、苦杏仁苷对照品（批号110820－201004）、五味子对照药材（批号 120922－201309）、前胡对照药材（批号120951－201205）、五味子甲素对照品（批号110764－201312），均由中国食品药品检定研究院提供；复方蛤青胶囊样品3批，其中2批为陕西东泰制药有限公司提供（批号为5L02和5J03，国药准字Z20050525，规格为每粒0.45 g），1批为陕西兴邦药业有限公司提供（批号为 160701，国药准字Z20050565，规格为每粒0.3 g）；不含紫莞、前胡、五味子、黄芪、苦杏仁苷药材的阴性样品各1份（陕西东泰制药有限公司提供）。硅胶（G）购自青岛化工有限公司；流动相用甲醇、乙腈为色谱纯（Avantor Performance Materials Sda Bhd）；水为高纯水，其他试剂均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 紫菀

分别取3批样品内容物研细，取约5 g，加甲醇40 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 m L，超声5 min，滤过，将滤液经过聚酰胺柱（80～100目，3 g，内径为1～1.5 cm，湿法装柱），用水40 m L洗脱，收集流出液及洗脱液，用乙酸乙酯提取2次，每次20mL，弃去乙酸乙酯液，水液再用水饱和的正丁醇提取2次，每次20mL，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1m L使溶解，作为供试品溶液[1－2]。另取紫菀药材0.5 g，加水100mL，煮沸30min，滤过，滤液经过聚酰胺柱，同法制成对照药材溶液。取不含紫菀药材的的阴性样品，与供试品溶液同法处理，作为阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2015年版《中国药典（四部）》通则0502]试验，吸取各溶液5μL，分别点于同一薄层板上，以正丁醇－冰醋酸－水（7∶1∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同的斑点，阴性无干扰。见图1。

图1 紫菀薄层色谱图

2.1.2 前胡

取3批样品内容物研细，取约5 g，加入乙醚15m L，浸泡静置2 h后滤过，收集滤液并挥干，加入1mL乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液。另取前胡对照药材约0.5 g，置三角瓶中，加入乙醚10m L，同法制得前胡对照药材溶液[3－4]。再取白花前胡甲素对照品，加甲醇制成每1 mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。取不含前胡提取物的阴性样品5 g，与供试品溶液同法制备阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2015年版《中国药典（四部）》通则0502]试验，吸取各溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯（3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。在与对照药材溶液色谱和对照品溶液色谱相应位置上，供试品溶液色谱显相同颜色荧光斑点，阴性无干扰。见图2。

图2 前胡薄层色谱图

2.1.3 五味子

取3批样品内容物研细，取约5 g，加入三氯甲烷30mL，处理超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1m L使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加甲醇制成每1m L含1mg的溶液，作为对照品溶液。取不含五味子药材的阴性样品约5 g，与供试品溶液同法制备阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2015年版《中国药典(四部)》通则0502]试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶 GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。在与对照药材溶液色谱和对照品溶液色谱相应位置上，供试品溶液色谱显相同颜色荧光斑点，阴性无干扰。见图3。

2.2 黄芪甲苷[5－7]含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Symmetry C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－水（32∶68）；奥泰2000S型蒸发光散射检测器，气化温度95℃；流速：1.0 mL／min，柱温：35℃。

图3 五味子薄层色谱图

2.2.2 溶液制备

取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.7mg的溶液，作为对照品溶液。

取样品(批号为5J03)内容物适量，研细，取约10 g，精密称定，精密加入甲醇100mL，称定质量，超声处理（功率250W，频率33 kHz）1 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失质量，滤过，精密吸取续滤液50mL，蒸干，残渣加水15 mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次30m L，合并正丁醇提取液，用1%氢氧化钠溶液洗涤2次，每次30 m L，合并碱液，用水饱和的正丁醇20 m L振摇提取，分取正丁醇提取液，与上述正丁醇液合并，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次40 mL（乳化时可放置过夜），每次洗涤液用同一水饱和的正丁醇20mL提取，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液[8]1245。

称取缺黄芪药材的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备成阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验：取阴性对照品溶液，按拟订色谱条件进样，色谱中未出现与对照品溶液色谱中黄芪甲苷保留时间相同的色谱峰，表明阴性无干扰，见图4。

图4 黄芪甲苷高效液相色谱－蒸发光散射检测图

线性关系考察：称取黄芪甲苷对照品（含量为95.8%）9.88mg，精密称定，置20m L容量瓶中，加流动相至刻度，得质量浓度为0.473 g／L的溶液。分别精密吸取该溶液2，4，5，8，10，15，20μL，按拟订色谱条件进样，测定。以对照品实际进样量（μg）的对数值为横坐标、对应峰面积积分值的对数值为纵坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝1.53X＋5.66，r＝0.999 5（n＝7）。结果表明，黄芪甲苷进样量在0.946～9.46μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液5μL，按拟订色谱条件重复进样6次，测定峰面积。结果其积分值的 RSD为2.67%(n＝6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：称取样品（批号为5J03）粉末适量，依法制备供试品溶液，分别于配制后0，5，10，15，20 h时进样，测定。结果峰面积的平均值为77 381.7，RSD为1.90%(n＝5)，表明供试品溶液在20 h内稳定。

重复性试验：取样品（批号为5J03）适量，研细，共6份，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样，测定。结果样品含量的平均值为 1.232 mg／g，RSD为5.67%(n＝6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取样品(批号为5J03)适量，研细，称取5.0 g，精密称定，分别精密加入质量浓度为0.936 4 g／L的黄芪甲苷对照品溶液各8mL，依法制备供试品溶液并进样测定。结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收试验结果

2.2.4 样品含量测定

按拟订方法进样测定，结果批号为160701，5L02，5J03的 3批样品中黄芪甲苷的含量分别为 1.500，1.080，1.260mg／g。

2.3 苦杏仁苷含量测定

2.3.1 色谱条件

色谱柱：Waters Symmetry C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇－0.05%醋酸溶液（20∶80），流速：1.0mL／min；检测波长：210 nm。

2.3.2 溶液制备

称取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加入甲醇适量使溶解，定容，制成每1mL中约含0.2mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。

取样品(批号为160701)内容物适量，研细，取约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，称定质量，超声处理40 min，放冷，再称定质量，加甲醇补足丢失的质量，摇匀，取续滤液，作为供试品溶液[9－11]。

称取缺苦杏仁的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3.3 方法学考察

系统适用性试验：考察了2根不同品牌的色谱柱[Waters Symmetry C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）和资生堂MGⅡC18柱（250mm×4.6mm，5μm）]，分别设定流速为1.0mL／min和1.2mL／min，在不同色谱条件下测定同一供试品溶液的含量。结果的 RSD为2.30%，表明系统适用性良好。

专属性试验：取缺苦杏仁的阴性对照品溶液，按拟订色谱条件进样，色谱中未出现与对照品溶液色谱中苦杏仁苷保留时间相同的色谱峰，阴性无干扰。见图5。

图5 苦杏仁苷高效液相色谱图

线性关系考察：称取苦杏仁苷对照品9.88mg，精密称定，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，质量浓度折纯度93.6%后为0.185 0 g／L；再称取苦杏仁苷对照品10.35 mg，精密称定，置25 m L容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，质量浓度折纯度93.6%后为0.387 5 g／L。分别精密吸取质量浓度为0.185 0 g／L的溶液2μL和10μL，质量浓度为0.387 5 g／L的溶液5，10，20μL，注入液相色谱仪，进样量分别为0.370 0，0.775 0，0.925 0，1.850 0，1.937 5，3.100 0，3.875 0，5.813 0μg，按拟订色谱条件进样测定，以对照品实际进样量（μg，X）为横坐标、对应峰面积积分值（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝9.6×105X＋8.02×104，r＝0.999 6（n＝8）。结果表明，苦杏仁苷进样量在0.370～5.813μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10μL，按拟订色谱条件操作，重复进样6次，测定峰面积。结果其积分值的 RSD为0.53%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：称取样品(批号为160701)粉末适量，依法制备供试品溶液，分别于配制后0，4，8，12，16 h时进样测定。结果峰面积的平均值为2 236 046，RSD为3.01%(n＝5)，表明供试品溶液在16 h内稳定。

重复性试验：按拟订方法，取样品(批号为160701)粉末6份，进样，测定。结果样品含量平均值为6.125mg／g，RSD为2.55%(n＝6)。

加样回收试验：称取已知含量的样品(批号为160701)内容物适量，研细，取约0.7 g，精密称定，分别精密加入质量浓度为0.767 1 g／L的对照品溶液（精密称取苦杏仁苷对照品16.39 mg，加甲醇溶剂并稀释至20 mL，折纯度93.6%后质量浓度为0.767 1 g／L）各2m L（共加入1.534 2mg），依法制备供试品溶液并进样测定。结果见表2。

表2 苦杏仁苷加样回收试验结果

2.3.4 样品含量测定

按拟订方法进样测定，结果批号为160701，5L02，5J03的 3批样品中苦杏仁苷的含量依次为 6.125，1.801，1.267mg／g。

3 讨论

除文中所列薄层色谱外，还对处方中白果、苦杏仁药材进行了薄层色谱试验，在多个色谱条件下，斑点均不明显或专属性不符合要求，可能因工艺提取条件影响所致，需与生产企业合作进行更进一步的考察和研究。另外，因显微鉴别项下鉴别了黄芪的显微特征，含量测定项下也测定了黄芪甲苷的含量，出于节约检验检测成本和时限考虑，黄芪甲苷的薄层色谱鉴别未列入标准。

复方蛤青胶囊有补气敛肺、止咳平喘、温化痰饮作用，方中黄芪有补气升阳、利水消肿等功效[8]302，苦杏仁有降气、止咳、平喘等功效[8]201，加之两者含量在制剂中很大，故选择黄芪甲苷和苦杏仁苷作为含量测定的指标性成分，以合理控制制剂的质量。黄芪甲苷的含量测定方法中，较常用的还有通过D101大孔吸附树脂[8]302处理样品。研究过程中考察了是否通过树脂及超声时间、用正丁醇溶液提取的次数对制剂含量的影响，结果不通过D101大孔吸附树脂、超声处理60 min及水饱和正丁醇提取4次时，黄芪甲苷的含量测定结果较高，重复性较好。

关于苦杏仁苷的流动相，考察了甲醇－水（20∶80）[12]、水－甲醇－乙腈（75∶20∶5）[13]和甲醇－0.05%醋酸溶液（20∶80），结果以甲醇－0.05%醋酸溶液（20∶80）为流动相时分离较好，苦杏仁苷色谱峰附近无干扰峰，故选择列入标准。

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Quality Standard of Fufang Haqing Capsu le

Wu Fang，Yang Yanzi，Fan Baojuan，Luo Dingqiang，Dai Yong
（Shaanxi Institute for Food and Drug Control，Xi′an，Shaanxi，China 710061）

Ob jective To establish the quality standard for Fufang Haqing Capsule.M ethods TLC method was used to identify Aster Tataricus，Radix Astragali，Peucedanum Praeruptorum，Schisandrae Chinensis Fructus.HPLC was used to determine the content of astragaloside and amygdalin.Resu lts The methods of TLC were scientific and strong specificity.The linear range of astragaloside was 0.946－9.46μg（r＝0.999 5）.The average recovery was 101.12% with the RSD of 4.17%(n＝7).The linear range of amygdalin was 0.370－5.813μg（r＝0.999 6）.The average recovery was 96.83% with the RSD of 3.08%(n＝8).Conclusion The method is scientific，simple and strong specificity，which can be used for quality control of Fufang Haqing Capsule.

Fufang Haqing Capsule；Aster Tataricus；Peucedanum Praeruptorum；Schisandrae Chinensis Fructus；astragaloside；amygdalin；quality standard

R286.0；R284.1

：A

：1006－4931(2017)12－0030－05

2017－03－15；

2017－04－05)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.12.008

吴芳，女，大学本科，副主任药师，研究方向为中药检验及质量，（电话）029－62288444（电子信箱）8681070＠qq.com。