miRNA-21与高血压并腔隙性梗死的相关性及预测价值

孙继红 张卫国 张 娟 李贵琦 孙慎杰 宋恒良 万大国

郑州大学第二附属医院心血管内科，河南 郑州 450014

·论著 临床诊治·

miRNA-21与高血压并腔隙性梗死的相关性及预测价值

孙继红 张卫国 张 娟 李贵琦 孙慎杰 宋恒良 万大国△

郑州大学第二附属医院心血管内科，河南 郑州 450014

目的 探讨微小RNA-21(miR-21)与高血压伴腔隙性梗死(腔梗)的相关性及诊断预测作用。方法 将67例高血压患者根据是否合并腔梗分为高血压组31例和高血压并腔梗组36例，收集各项临床和实验室指标，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测量血清miR-21；绘制受试者工作曲线(ROC)，评价miR-21对高血压并腔梗的诊断预测价值，通过Pearson相关分析了解miR-21与颈动脉IMT的相关性。结果 高血压并腔梗组miR-21表达(2.08±0.61)，显著高于高血压组(1.25±0.37，P<0.05)。miR-21对高血压发生腔梗的ROC曲线下面积(AUC)为0.871，95%可信区间(CI)0.787～0.954(P<0.05)。Pearson相关分析发现miR-21与颈动脉IMT呈正相关(R=0.763，P<0.05)。结论 miR-21在高血压并腔隙性脑梗死患者中高表达，是高血压发生腔梗的独立预测因素，可作为高血压发生腔梗的一个简便、无创、有效的血清学诊断预测指标。

高血压；腔隙性梗死；miRNA；miRNA-21

发现miRNA是一类高度保守的内源性非编码小RNA，一般由20～23个核苷酸组成，在转录后水平调控目的基因的表达水平[1]。本研究旨在验证miR-21对高血压发生腔梗的预测价值，以期为今后在诊断和治疗高血压发生腔梗提供一定的指导意义。

1 对象与方法

1．1 研究对象 选择2014-09—2016-09在郑州大学第二附属医院就诊的初诊高血压患者67例，男43例，女24例，年龄(61.6±13.7)岁，其中高血压患者无腔梗组31例和高血压合并腔梗组36例。高血压诊断符合《中国高血压防治指南2010》标准[2]。排除标准：继发性高血压；合并冠心病、糖尿病；正在或已经服用了降压药物；肝肾功能异常；不配合随访和不签知情同意者。

1．2 研究方法

1．2．1 血标本采集与处理：受检者空腹12 h后，抽取前臂静脉血3 mL共2管，用于由奥林巴斯AU5800全自动生化分析仪进行化验分析，包括：血生化、血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白；另一管，4 ℃ 3 000 r/min离心10 min，取血清于无RNA酶管中，-80 ℃保存供后续实验使用。

1．2．2 qRT-PCR：采用Trizol法常规提取外周血血浆样品的总RNA，放-80 ℃备用。按照逆转录试剂盒说明书进行逆转录，RNA浓度通过nanodrop紫外分光光度计测量，用于实时荧光定量PCR的检测。按SYBR Premix Ex TaqTM(Tli RNaseH Plus)试剂盒说明书进行操作，反应条件：95 ℃变性5 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，重复35个循环用于qRT-PCR检测。采用2-△△CT 法表示目的基因的相对表达量。1．3 统计学方法 采用SPSS 17.0软件包进行数据处理，计量资料以均数±标准差表示，两组间比较用独立样本t检验，分类变量资料采用卡方检验。通过受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-21对高血压发生腔梗的预测价值，通过Pearson相关分析了解miR-21与颈动脉IMT的相关性，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2．1 入选人群一般资料和临床血生化指标 见表1。

表1 患者一般资料和临床生化资料

注：GLU：葡萄糖；TG：甘油三酯；TC：总胆固醇；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇

2．2 qRT-PCR结果 如图1所示，通过qRT-PCR检测，miR-21在腔梗组患者中的相对表达量分别为(2.08±0.61)，显著高于无腔梗组(1.25±0.37)，差异有统计学意义(P<0.05)。

2．3 miR-21对高血压腔隙性脑梗塞的预测价值 以miR-21为检测变量，以是否出现腔隙性脑梗塞为状态变量，定义状态变量为1，利用ROC曲线分析miR-21对腔隙性梗死的预测价值。结果显示：曲线下面积(AUC)为0.871，95%CI0.787～0.954，(P<0.05)。miR-21对腔隙性梗死有较好的预测价值，相应结果见图2。

2．4 miR-21表达水平与2组患者颈动脉IMT的关系 我们对临床上经常采用的反应动脉硬化的颈动脉IMT和miR-21进行Pearson相关分析，发现miR-21与颈动脉IMT呈正相关(R=0.763，P<0.05)。

图1 2组人群中miR-21的相对表达量 图2 血清miR-21水平诊断腔隙性梗死的ROC曲线

3 讨论

腔隙性梗死是高血压患者中常见的脑血管疾病，发病率约占缺血性脑卒中的24%，而造成腔隙性梗死最常见的原因是脑小动脉的粥样硬化。在其病理变化中，血管管壁基底膜增厚，深部白质动脉粥样硬化，微血管内皮细胞功能失调，血管狭窄闭塞，进而引起脑动脉远端的血流减少。

自从miRNAs被发现以来，越来越多的研究揭示循环miRNAs可能在动脉粥样硬化的各个发病环节起着非常重要的作用，特定miRNA可能是血管病理生理过程中的关键调节基因[3]，包括血管的增殖、迁移、氧化应激和血管炎症反应[4]。miR-21可促进血管平滑肌细胞增殖，抑制凋亡，具有促生长作用。而血管平滑肌细胞的增殖、凋亡、去分化和迁移等行为已被证实在动脉粥样硬化的发展和血管再狭窄中起着重要的作用[5]。此外，miR-21可以促进内皮细胞向间充质的转化，进而影响血管内皮的稳态。因此我们推测miR-21有可能在腔隙性脑梗塞的发病过程中发挥了重要的作用。

大量的研究表明颈动脉IMT与动脉粥样硬化存在良好的线性关系，能较早反应动脉粥样硬化的发生，是缺血性卒中独立的危险因素。在本项研究中，我们参照2010中国高血压病防治指南所提出的IMT大于0.9 mm为颈动脉内膜IMT增厚，IMT大于1.3 mm为颈动脉内膜粥样斑块形成。我们的研究发现，miR21在高血压合并腔梗的患者外周循环中表达显著高于单纯高血压患者，进一步的相关研究发现，miR-21表达水平与颈动脉IMT厚度呈正相关，提示miR-21表达水平的升高同时可能会促进颈动脉IMT的增厚。

本研究发现，miRNA-21在高血压并腔梗患者中表达水平显著上调，对高血压发生腔梗预测的ROC曲线下面积为0.871，对高血压左心室发生腔梗有很好的预测价值，有望成为一个具体敏感的，非侵入性的诊断工具。

[1] Condorelli G，Latronico MV，Cavarretta E，et al．microRNAs in cardiovascular diseases：current knowledge and the road ahead[J]．J Am Coll Cardiol，2014，63(21)：2 177-2 187．

[2] 中国高血压防治指南修订委员会．中国高血压防止指南[J]．中华高血压杂志，2011，39(7)：579-616．

[3] Fichtlscherer S，De Rosa S，Fox H，et al．Circulating microRNAs in patients with coronary artery disease[J]．Circulation research，2010，107(5)：677-684．

[4] Fish JE，Srivastava D．MicroRNAs：opening a new vein in angiogenesis research[J]．Science signaling，2009，2(52)：pe 1．

[5] Kwangho Kim，Sunghwan Kim，Sang Hyun Moh，et al．Kaempferol inhibits vascular smooth muscle cell migration by modulating BMP-mediated miR-21 expres-sion[J]．Mol Cell Biochem，2015，407(1-2)：143-149．

(收稿2017-07-10)

责任编辑：王喜梅

Relation and diagnosis of miRNA-21 for being used as a prediction target molecular marker of lacunar infarction with hypertension

SunJihong，ZhangWeiguo，ZhangJuan，LiGuiqi，SunShenjie，SongHengliang，WanDaguo

DepartmentofCardiology，TheSecondAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity，Zhengzhou450014，China

Objective To investigate the expression and diagnosis of miRNA-21 for being used as a prediction target molecular marker of lacunar infarction with hypertension．Methods 67 cases of patients with hypertension was divided into hypertension group (31 cases) and hypertension with lacunar infarction group (36 cases)．Then measured serum miR-21 using real-time fluorescent quantitative PCR (qRT-PCR) and collected the clinical and laboratory indexes；evaluated miR-21 predictive value to the diagnosis of hypertension with lacunar infarction through receiver operator characteristic curve (ROC)．Then studied the pertinence of miR-21 and the carotid artery intima-media thickness (IMT) using Pearson correlation analysis．Results The expression of miR-21 in serum of hypertension with lacunar infarction patients was significantly higher than that of the hypertension group(2.08±0.61VS．1.25±0.37，P<0.05．ROC analysis results showed that the area under the ROC(AUC) was 0.871，and 95% confidence interval(95%CI)was 0.787～0.954．Pearson correlation analysis found that miR-21 and carotid IMT were positively correlated (R= 0.763，P<0.05)．Conclusion The serum level of miR-21 in hypertension with lacunar infarction was significantly higher than that in hypertension patients．The miR-21 has certain predictive value of lacuncar infarction in hypertension．

Hypertension；Lacunar infarction；miRNA；miRNA-21

R743

A

1673-5110(2017)13-0044-03

△通信作者：万大国(1965-)，教授，主任医师，研究方向：冠心病的介入治疗，心内电生理检查及射频消融术，永久起搏器置入术，先心病及瓣膜病的介入，Email：wandaguo@hotmail.com