离子色谱－积分脉冲安培检测法测定－环糊精中的有关物质

王 淼，靳贵英，王彩媚

（广东省药品检验所，广东 广州 510180）

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离子色谱－积分脉冲安培检测法测定－环糊精中的有关物质

王 淼，靳贵英，王彩媚

（广东省药品检验所，广东 广州 510180）

目的建立测定 －环糊精中有关物质含量的方法。方法采用 Dionex ICS－500型色谱仪，利用糖分离柱、糖保护柱，以水、250 mmol／L NaOH溶液和500 mmol／L NaAC溶液为流动相，以电化学检测器（金为工作电极、Ag／AgCl为参比电极），测定 －环糊精

－环糊精；离子色谱；积分脉冲安培检测；有关物质

β－环糊精是由芽孢杆菌属所产生的葡萄糖基转移酶作用于淀粉而生成的7个葡萄糖以α－1，4糖苷键结合的环状低聚糖，其最显著的分子特征是具有一个外环亲水、内环疏水，并有一定尺寸的立体手型空腔结构，可以包合各种小分子[1－2]。β－环糊精可作为药物的载体材料和缓释材料，适用于乳剂、乳膏剂、微囊剂、栓剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂等多种剂型，增加药物稳定性，提高药物的生物利用度，减少药品不良反应，用于矫味防潮及使液体药物固体化等[3－6]。β－环糊精也应用于食品、化妆品工业。β－环糊精生产中可能会产生6个葡萄糖结合的α－环糊精和8个葡萄糖结合的γ－环糊精杂质，同时还可能产生葡萄糖和麦芽糖等单糖还原糖杂质，因此，有必要对有关物质进行研究及考察。笔者系统地研究了全国6个厂家12批β－环糊精样品，运用离子色谱－积分脉冲安培检测法测定β－环糊精中有关物质，为β－环糊精产品质量控制提供科学依据。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Thermo ICS－5000型色谱仪（美国赛默飞世尔有限公司），配置有安培检测器（金电极为工作电极，Ag／Ag-Cl为参比电极，糖四电位波形），色谱柱（CarPac PA200分析柱，250 mm×3 mm），保护柱（CarPac PA200保护柱，50 mm×3 mm），工作站为Chromeleon 6．8；MS205DU型电子天平（瑞士梅特勒－托利多公司）；醋酸钠（优级纯，美国赛默飞世尔有限公司）；试验用水为超纯水。

1．2 试药

倍他环糊精（安徽山河药用辅料股份有限公司，批号为16050431、160601，曲阜天利药用辅料有限公司，批号为160516、160203，郁南永光集团有限公司，批号为20160101、20160201，山东新大化工有限公司，批号为 160309、160415，孟州华兴有限责任公司，批号为20160562、20160126，湖南尔康制药股份有限公司，批号为109420160403，109420160701）；β－环糊精（中国食品药品检定研究院，批号为100317－201203）；α－环糊精（批号为1507070），γ－环糊精（批号为1529084），均购于阿拉丁试剂有限公司；葡萄糖（批号为110833－201506），果糖（批号为111504－200001），乳糖（批号为10058－201204），半乳糖（批号为100206－200404），麦芽糖（批号为100287－201303），均购于中国食品药品检定研究院。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱仪：Dionex ICS－5000型色谱仪；检测器类型及工作参数：安培检测器，金电极 Ag／AgCl参比模式，糖四电位波形；色谱柱：CarPac PA200型保护柱（50 mm×3 mm）和CarPac PA200型分析柱（250 mm× 3 mm）；柱温：30℃；流速：0．45 mL／min；进样量：10 μL。洗脱程序见表1。

2．2 溶液制备

供试品溶液：取β－环糊精样品适量，加水溶解并稀释成质量浓度为1 mg／mL的溶液，即得。

对照品溶液：取葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、麦芽糖、α－环糊精、β－环糊精和γ－环糊精对照品适量，加水溶解并稀释成葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、麦芽糖、α－环糊精、β－环糊精和γ－环糊精质量浓度分别为1．0，1．0，1．0，1．0，1．0，2．5，2．5，2．5 μg／mL的对照品混合溶液，即得。

表1 洗脱程序表(%)

2．3 方法学考察

系统适用性试验：取对照品混合溶液进样。在此条件下，7种杂质均能较好分离，其色谱图见图1。

线性关系考察：取各杂质对照品，加水制成10，5，2，1，0．5倍于上述质量浓度的对照品溶液，以峰面积对各成分质量浓度进行线性回归。结果见表2。

图1 离子色谱图

表2 线性关系考察结果

精密度试验：取对照品混合溶液，连续进样6次，记录色谱图。结果半乳糖、葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖、α－环糊精、γ－环糊精峰面积的 RSD分别为1．6%，1．4%，1．0%，1．3%，1．0%，1．0%，3．0%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取β－环糊精样品（安徽山河药用辅料股份有限公司，批号为160504），依法制备供试品溶液，重复测定6次。结果均只测得有γ－环糊精杂质，测得值为0．15% ～0．19%（n＝6），说明方法重复性良好。

定量限和检测限：取制备的各杂质对照品溶液，逐步稀释，进样，以信噪比为8～10时的质量浓度为定量限，以信噪比约为3的质量浓度为检测限，半乳糖、葡萄糖、果糖和麦芽糖的定量限为0．05 μg／mL，乳糖的定量限为0．03 μg／mL，α－环糊精的定量限为0．4 μg／mL，γ－环糊精的定量限为1．0 μg／mL，半乳糖、葡萄糖、果糖和麦芽糖的检测限为0．02 μg／mL，乳糖的检测限为0．02 μg／mL，α－环糊精的检测限为0．2 μg／mL，γ－环糊精的检测限为0．5 μg／mL。

回收率试验：取β－环糊精样品（安徽山河药用辅料股份有限公司，批号为 160504，只含 γ－环糊精0．17%）9份，依法制备质量浓度为1 mg／mL的供试品溶液，分别加入10倍浓度的对照品混合溶液0．8，1．0，1．2 mL各3份，依法进样测定。结果各杂质成分的回收率及 RSD详见表3。

表3 回收率试验结果（n＝9）

续表3 回收率试验结果（n＝9）

2．4 样品含量测定

取6个厂家的12批样品，依法制备供试品溶液，按拟订方法进样测定，均未检测到乳糖、半乳糖、果糖和α－环糊精，其余3种杂质的测定结果见表4。

3 讨论

β－环糊精质量标准首次收载于2000年版《中国药典（二部）》，作为赋形剂使用；经《中国药典》2002增补本修订了还原糖限度后，2005年版《中国药典》未作变动，后该品种质量标准经过较大修订和提高，收载于2010年版《中国药典（二部）》，增加了红外、杂质吸光度、残留溶剂（环己烷）、微生物限度，修订了含量测定的限度，并将类别修订为药用辅料，包合剂和稳定剂等。2015年版《中国药典（四部）》收载的β－环糊精质量标准，与2010年版《中国药典（二部）》收载的β－环糊精质量标准一致，未作变动。英国药典(BP2016版)、欧洲药典(EP8．0版)、美国药典(USP39版)均有收载β－环糊精质量标准，与国外药典标准比较，主要缺少有关物质的控制项目[7－9]。

因工艺原因，β－环糊精生产过程中会同时产生6个葡萄糖结合的α－环糊精杂质和8个葡萄糖结合的γ－环糊精杂质，同时淀粉酶解还会产生葡萄糖及麦芽糖等，这些单糖或二糖大多具有还原性，对产品尤其是制剂的相容性有影响。因此，控制β－环糊精中的有关物质的含量意义极大。国外药典采用高效液相色谱法测定α－环糊精和γ－环糊精杂质，所用色谱条件：C18色谱柱，示差检测器，以乙腈和水为流动相。笔者曾尝试该方法，但2种杂质无法有效分离，可能因为α－环糊精和γ－环糊精的极性较相似，用反相高效液相色谱法无法完全分离这2种杂质，故尝试用离子色谱法分离该杂质。国内外药典均对还原糖进行控制，分别采用滴定法和紫外分光光度法，2种方法的专属性不高。故有必要采用新方法对上述杂质进行控制。

表4 样品杂质含量测定结果（%）

积分安培离子色谱法是近年发展起来的一种分析方法，分离机理主要为离子交换，即基于离子交换树脂上可解离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子之间进行可逆交换，不需要进行衍生化，可直接分离测定样品中的糖类物质，具有极高的灵敏度[10－15]。α－环糊精、γ－环糊精和还原糖均为糖类物质，故该方法可对β－环糊精中有关物质进行一次性测定，且该方法灵敏高，精密度好，分离效果良好，且能准确测定β－环糊精中上述7种糖类杂质的含量。

采用离子色谱－积分脉冲安培检测法，对12批β－环糊精样品中的有关物质进行测定，测定结果显示，均含γ－环糊精杂质，甚至有的含量超出了国外药典对该种杂质的限度（0．25%），并说明各厂家产品生产过程中成环工艺控制均需改进。而测定葡萄糖和麦芽糖杂质，则说明淀粉被酶作用后生产的葡萄糖和麦芽糖等原料的去除不完全，亦说明纯化工艺有待改进。由于现行《中国药典》未进行该项目的控制，建议尽快对现有标准进行修订，以更好地对β－环糊精的质量进行控制。

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Determination of Related Substance in Betacyclodextrin by Ion Chromatography with Integral Pulse Amperometric Detection

Wang Miao，Jin Guiying，Wang Caimei
（Guangdong Institute for Drug Control，Guangzhou，Guangdong，China 510180）

Objective To establish a method of ion chromatography with integral pulse amperometric detection for the determination of related substance in betacyclodextrin．M ethods Dionex ICS－500 and CarPac PA200 column were used．The mixtures of pure water，250 mmol／L NaOH solution and 500 mmol／L NaAC solution in different ratio were used as mobile phase in the gradient elution．In the amperometric detection，gold electrode was used as working electrode，Ag／AgCl electrode was used as reference electrode．Results The peaks of different impurities were separated completely．The calibration curve of each solvent of each impurity showed a good liner relationship with good precision and recovery rate．Conclusion The method showed good sensitivity，precision and reproducibility，which can be used to determine the related substance in betacyclodextrin．

betacyclodextrin；ion chromatography；integral impulse amperometric detection；related substance

R927．1；TQ460．4

A

1006－4931(2017)04－0027－05

2016－10－05；

2016－11－24)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．04．007

王淼（1980－），男，硕士研究生，副主任药师，研究方向为药用辅料质量标准，（电子信箱）949319255＠qq．com。

中有关物质含量。结果各杂质峰能较好分离，峰面积与质量浓度线性关系良好，回收率良好。结论该方法灵敏度高，重复性好，可用于－环糊精中有关物质含量的测定。