鲁斯可皂苷元制备方法研究

曹青云，李 琦，王 敏，肖顺丽，高荣凯，张宏桂

（北京中医药大学中药学院，北京 100102）

·实验研究·

鲁斯可皂苷元制备方法研究

曹青云，李 琦，王 敏，肖顺丽，高荣凯，张宏桂

（北京中医药大学中药学院，北京 100102）

目的探寻从麦冬中分离、纯化鲁斯可皂苷元的方法。方法80%乙醇提取总皂苷，两相酸水解总皂苷，硅胶柱层析分离，甲醇重结晶，薄层色谱（TLC）法、高效液相色谱（HPLC）法检查纯度。结果鲁斯可皂苷元经TLC检查与对照品一致，无杂质斑点，HPLC法检查纯度达98．58%。结论该试验中建立的制备方法简单、安全、可行性强，成本低，效率高，可用于制备鲁斯可皂苷元。

麦冬；鲁斯可皂苷元；制备；薄层色谱法；高效液相色谱法

麦冬 Ophiopogonis Radix为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus（Linn．f．）Ker－Gawl．的干燥块根，味甘、微苦，归心、肺、胃经，有养阴生津、润肺清心等功效，常用于治疗肺燥干咳、阴虚痨嗽、喉痹咽痛、津伤口渴等症[1]。麦冬中所含化学成分主要有皂苷类、黄酮类、氨基酸类、多糖类及挥发油等。研究表明，麦冬有抗心肌缺血[2－4]、降血糖[2，5－6]、抗炎[7－8]、抗肿瘤[9－11]、增强免疫[12－13]等作用。麦冬甾体皂苷是麦冬的主要活性成分，鲁斯可皂苷元是其药材质量控制的关键性指标，是2015年版《中国药典(一部)》规定的麦冬药材质量检验的化学对照品，现有文献针对鲁斯可皂苷元的提取分离多用制备型高效液相分离仪，但制作成本较高，不适合工业化生产。本试验中采用乙醇提取，两相酸水解，硅胶柱层析分离，甲醇重结晶的方法制备鲁斯可皂苷元，效果满意。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Waters 1525型高效液相色谱仪，Breeze 2色谱工作站，Waters 2489型紫外可见检测器，色谱柱为Waters SunfireTMC18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm）(美国 Waters公司)；FLBP－250型万能高速粉碎机（上海菲力博食品机械有限公司）；SHB－Ⅲ型循环水式多用真空泵（上海振捷实验设备有限公司）；BS223S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；薄层色谱及柱色谱用硅胶（青岛海洋化工厂）。

1．2 试药

鲁斯可皂苷元对照品（中国食品药品检定研究院，批号为111909－201204，质量分数大于98．4%；甲醇（赛默飞世尔科技＜中国＞有限公司）为色谱纯；其他试剂均为分析纯；麦冬药材购自河北安国，经北京中医药大学张贵君教授鉴定为 Ophiopogon japonicus（Linn．f．）Ker－Gawl．的干燥块根。

2 方法与结果

2．1 提取与分离

取麦冬药材2 kg，粉碎，过20目筛，置圆底烧瓶中，用10倍量80%乙醇加热回流提取3次，每次1 h，合并提取液，减压回收乙醇至无乙醇味，得总皂苷浸膏。采用两相酸水解法，将总皂苷浸膏置圆底烧瓶中，加入10倍量5%硫酸（下层），6倍量石油醚与二氯甲烷（3∶1）混合液，加热水解5 h，冷却后得酸水层和有机层，用等体积的二氯甲烷萃取酸水层3次，与有机层合并，用水洗至pH接近7，浓缩至干，得浸膏。将硅胶（200～300目）石油醚湿法装柱。将酸水解得到的浸膏用硅胶（100～200目）拌样，挥干溶剂，干法上样，进行柱色谱分离。用二氯甲烷－石油醚－甲醇（V∶V∶V，10∶10∶1）洗脱，收集馏分，根据薄层色谱检识，合并相同斑点的馏分。含有鲁斯可皂苷元的馏分浓缩后放置，析出白色针晶，即为鲁斯可皂苷元粗品，粗品用甲醇重结晶多次，即得鲁斯可皂苷元纯品。

2．2 结构鉴定

白色针状结晶（甲醇），与鲁斯可皂苷元对照品同条件下薄层层析显示二者保留因子（Rf）值一致；1H－NMR（500 MHz，CDCl3），δ：0．79（3H，s，H－18），0．98（3H，d，H－27），1．05（3H，s，H－19），1．46（3H，d，H－21），3．37（1H，m，H－1），3．56（1H，m，H－3），5．54（1H，d，H－6），与文献[14]研究数据一致，鉴定为鲁斯可皂苷元。

2．3 纯度检查

2．3．1 薄层色谱（TLC）法

将制备的鲁斯可皂苷元和对照品分别点样于硅胶G254板上，分别以石油醚－二氯甲烷－甲醇（10∶10∶1）、环己烷－乙酸乙酯－冰乙酸（6∶2∶0．6）、二氯甲烷－甲醇（12∶1）为展开剂进行硅胶薄层层析，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂，加热，在紫外灯365 nm波长下观察。结果样品与对照品Rf值相同，均无杂质斑点，见图1。

2．3．2 高效液相色谱（HPLC）法

色谱条件：色谱柱为WatersSunfireTMC18柱（150mm× 4．6 mm，5 μm）；流动相为甲醇－水溶液（85∶15），流速为1．0 mL／min；检测波长为205 nm；柱温为35℃。样品与对照品的质量浓度均为1 mg／mL。在此色谱条件下，理论板数按鲁斯可皂苷元峰计应不低于3 000。取鲁斯可皂苷元对照品与样品各10 μL进样，相应的样品与对照品出峰时间一致，按面积归一化法计算，鲁斯可皂苷元的纯度为98．58%，见图2。

3 讨论

本试验中设计的制备工艺主要包括麦冬总皂苷的提取、两相酸水解、硅胶柱层析得粗品、重结晶4个步骤，在较短时间内应用简单的常规提取分离方法，从麦冬中分离出符合2015年版《中国药典（一部）》标准的鲁斯可皂苷元对照品，且较传统方法优势明显。现有文献中关于麦冬中鲁斯可皂苷元的分离纯化较少，且相关文献、专利大多采用制备型高效液相分离仪，试验成本较高，而本试验中采用传统的硅胶柱层析分离，甲醇重结晶的方法制备鲁斯可皂苷元，试验成本低，易于工业化生产。

图1 不同展开剂的薄层色谱图

图2 高效液相色谱图

传统水解总皂苷常用酸水解法，可能破坏苷元结构，且硅胶柱层析分离中多采用含有三氯甲烷的洗脱系统进行洗脱，会对环境造成污染。而本试验中采用两相酸水解法，水解得到的苷元得以迅速进入有机相中，可保护苷元结构不被破坏，且由于采用二氯甲烷，减少了对环境的污染，相对更安全。

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Preparation Method of Ruscogenin

Cao Qingyun，Li Qi，Wang Min，Xiao Shunli，Gao Rongkai，Zhang Honggui
（Beijing University of Chinese Medicine，Beijing，China 100102）

Objective To investigate the method of separating and purifying ruscogenin from Ophiopogon japonicus．Methods 80% ethanol was used to extract the total saponins，two－phase acid hydrolysis of total saponins，silica gel column chromatography separation，methanol recrystallization；TLC，HPLC methods were used to check the purity．Results Ruscogenin was consistent with the control substance by TLC and no impurity spots．The purity was 98．58% by HPLC．Conclusion The preparation method is simple，safe，feasible with low cost and high efficiency．The obtained ruscogenin can be used as a reference substance for qualitative and quantitative analysis of traditional Chinese medicine．

Ophiopogon japonicus；ruscogenin；preparation；TLC；HPLC

R282．4；R282．71

A

1006－4931(2017)04－0006－03

2016－11－07；

2016－11－18)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．04．002

国家自然科学基金[31070328]。

曹青云（1992－），女，硕士研究生，研究方向为中药药效物质基础，（电子信箱）caoqingy＠126．com。

张宏桂（1955－），男，教授，研究方向为中药药效物质应用及体内代谢，（电话）010－84738642（电子信箱）bzy714＠163．com。