小蜡叶民间药用物质基础提取模式探索

伍丹 关润霞 姚秋萍

摘要：以小蜡叶片为原料，通过超声辅助提取，减压浓缩的粗提物，经大孔吸附树脂D101依次用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和水洗脱分离的五段极性不同的部分，并对甲醇段进行薄层层析检测，通过展开剂的优化实验，获得甲醇段展开剂的最优配比为甲醇∶氯仿∶氨水∶水=7∶5∶0.4∶3。在365nm处紫外检测可清晰看到层析分离出四个点，说明甲醇段洗脱部分至少有四种成分可在365nm处显绿色荧光。

关键词：柱层析；薄层色谱；化学成分；小蜡

中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2018）38-0082-02

一、绪论

（一）前言

小蜡，俗称毛白蜡、水白蜡，与小叶女贞同属木犀科女贞属植物。常绿乔木或半常绿灌木，可高达15米。小蜡树在我国南部地区都有分布，生长迅速，喜湿润，多分布于山洞溪流旁，播种扦插均可，耐修剪，可用做庭院树、行道树栽植，也是一种名贵天然药物原料。中医学上用为清热药。

（二）选题背景及研究现状

据《陕西中草药》收载，水白蜡功用主治清热解毒；治烫伤、外伤；叶夏、秋采收，晒干或鲜用；性味归经：苦，凉[1]。植物的树皮（水白蜡树皮）亦供药用。据《四川常用中草药》收载，水白蜡功用主治清热，降火；治吐血，牙痛，口疮，咽喉痛，湿热黄水痒疮；春、秋季采树皮及叶，晒干备用；性味：淡微苦，平；入肺、心二经[2]。

口腔溃疡（口疮）是一种最常见的口腔粘膜疾病，在人群中患病率一般超过10%，可以自愈，可发生于口腔粘膜的任何部位，以唇、颊、舌部多见，严重者可以波及咽部粘膜。口腔溃疡虽不是什么重病，但却给患者的生活时时带来不便与痛苦。口腔内经久不愈的溃疡，由于经常受到咀嚼、说话的刺激，日久也有可能会发生癌变。之前许多的口腔溃疡用药的液体制剂几乎都会用乙醇做辅料，会在用药时产生刺激导致疼痛，这势必给患者造成用药的不适应性。

据调查，小蜡叶它已经成为广东恩平侗族民间常用来治疗口舌溃烂的一个验方，已使用多年。在贵州铜仁地区的侗族聚集地也用来治疗口舌溃烂、口腔溃疡、咽喉肿痛，用法是取新鲜叶片5—10枚放入口中嚼烂，将其汁液含于口中逐渐吞咽，每日2—3次，一般第二天就会有明显好转。作者通过模拟民间药用模式，模拟在口腔溃疡时pH6.58的情况下，对小蜡叶极性成分提取进行初步探索。

（三）小蜡的研究意义及研究思路设计

中药民族药是中华民族的宝贵财富，历史悠久，应用广泛，独具特色，通过历代学者的继承、整理、发掘、提高，特别是现代科学技术方法的引入，中药民族药正生机勃发，发扬光大[3]。中药民族药和天然药物的预防、治疗和保健作用比较明确，通过中药民族药和天然药物研制新药的成功率比较高。有些中药药效物质的疗效好，毒副作用小，在中药中含量较高，可以从其原植物中提取分离出来供临床使用，或用植物的其他部位替代。再有民族药、民间用药、民间验方，经过多年民间临床实践已证明有效，只是缺乏活性作用的物质基础、质量标准和现代化的剂型等。特别是民族药本身具有其独特的用药医理，因而要开展民族药的二次开发，民族药的药用基础物质研究显得更加重要。

中药民族药和天然药物所含化学成分复杂。植物中的多种有效成分需要从复杂的均相或非均相体系中提取出来[4]。有效成分的提取国内很多药用植物做的多是脂溶性部分，对水溶性部分重视不够，但是很多植物民间药常用水煮等方法，所以提示活性部位可能存在于水溶性部分。有些植物生長的环境特殊，例如土壤、气候，这种植物很可能与同属其他环境下的植物不仅从形态上，还从功效、化学成分上都有很多区别。

本文设计根据其民族药独特的用药医理，用药形式模拟，对小蜡叶的水溶性部分进行提取。

二、实验

（一）实验材料与仪器设备

小蜡叶（新鲜叶片，干叶，采收于铜仁地区石阡县）；大孔树脂 D101（天津市光复精细化工研究所）；薄层层析硅胶板（100×200mm，100×100mm，青岛海洋化工厂分厂）；超声波清洗机（SB-100DT，宁波新芝生物科技股份有限公司）；旋转蒸发器（RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂）；低温恒温槽（DC-0504B，上海恒平科学仪器有限公司）；循环水式真空泵（SHZ-DIII，浙江黄岩黎明实业有限公司）；三用紫外仪（ZF-2，上海市安亭电子仪器厂）

（二）实验提取

目前木犀科女贞属植物中以小叶女贞为例，其主要的化学成分是一些三萜类化合物、挥发油类化合物、黄酮类化合物、甾醇类化合物、裂环环烯醚萜类化合物等[1]。这些化合物之间的极性差异较大，本文通过模拟在口腔溃疡时的pH6.58情况下，拟采用超声波提取法对小蜡叶的水溶性部分进行模拟提取，选用柱层析色谱分离直接洗脱的实验方案，通过薄层层析色谱检测方法进行探讨。

（三）小蜡叶水溶性成分的分离

大孔吸附树脂能选择性的吸附有机物，已广泛应用于中草药成分的分离纯化。本文采用的大孔树脂D-101，用湿柱法进行初步分离。提取物依次使用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和水五种溶剂作为洗脱剂来分段分离，分段收集极性相近的化合物，洗脱液用西林瓶接收。洗脱分段情况，鲜叶：石油醚段A，乙酸乙酯段丙酮段1-22，甲醇段23-31，水段32-49；干叶：石油醚段、乙酸乙酯段、丙酮段1-23，甲醇段24-33，水段34-46。

（四）提取物极性成分的薄层检测

在展开条件相同时，样品点移动距离与展开剂移动距离之比是一定的，也就是说Rf值是样品的物理常数，只与样品的结构有关，因此Rf值可以用来鉴别样品。

将过柱分离的甲醇段进行薄层色谱检测，于365nm处紫外灯下进行标示，并计算迁移率Rf值。

展开剂的选择对样品分离的影响很大，通过优化实验，确定甲醇段展开剂为甲醇∶氯仿∶氨水∶水=7∶5∶0.4∶3，分离效果最佳。

毛白蜡干叶和鲜叶甲醇段薄层检测分别分离出的点其Rf值为干叶：24 0.71 0.79 0.87，25 0.72 0.83 0.89，26 0.73 0.83，27 0.79 0.81 0.89，28 0.90 0.88，29 0.78 0.89，30 0.72 0.80 0.90，31 0.70 0.81 0.90，32-33 0.72 0.80。鲜叶：23-24 0.77 0.89，25 0.56 0.75 0.80 0.88，26 0.59 0.74 0.87 0.82 0.88，27 0.76 0.87，28 0.76，29 0.79 0.88，30 0.78 0.87，31。

三、结论及建议

1.通过展开剂优化实验，获得甲醇段展开剂的最优配比为甲醇∶氯仿∶氨水∶水=7∶5∶0.4∶3。

2.通过对新鲜毛白蜡叶的甲醇段洗脱部分进行薄层层析，在365nm处紫外检测可清晰看到分离出四个点，说明甲醇段洗脱部分至少有四种成分可在365nm处显荧光。

3.对于毛白蜡干叶的甲醇段洗脱部分，通过其Rf值计算结果可粗略看出有四个点，其中干叶有两个点和新鲜叶的Rf值不同，以此初步判断干叶与新鲜叶至少有两个不同的成分存在。

通过对毛白蜡叶的民间药用模式探讨，完成了毛白蜡叶粗提浸物的柱层析分离和甲醇段洗脱部分的薄层检测，但其中还有很多化学成分需要进一步的研究和探讨。

参考文献：

[1]陕西省革命委员会卫生局商业局.陕西中草药[M].科学出版社，1971.

[2]四川省中药研究所.四川常用中草药[M].成都：四川人民出版社，1971.

[3]贵州省中药民族药“十一五”科技发展规划[Z].贵州省科技厅，2006.

[4]陈梅，赵鑫，沈舒，等.中药药效物质基础研究思路与方法概述[J].海峡药学，2010，03（22）：11-13.