郁福来胶囊质量标准研究

倪玉佳，瞿发林

（中国人民解放军第102医院制剂中心，江苏 常州 213003）

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郁福来胶囊质量标准研究

倪玉佳，瞿发林

（中国人民解放军第102医院制剂中心，江苏 常州 213003）

目的制订郁福来胶囊的质量控制标准。方法采用薄层色谱法对郁福来胶囊中贯叶金丝桃药材、金丝桃苷进行定性鉴别，并采用高效液相色谱法测定郁福来胶囊中金丝桃苷的含量。结果供试品色谱中，在与对照品贯叶金丝桃药材、金丝桃苷相应位置上有相同的斑点，且分离效果好；金丝桃苷进样量在 0．173～1．73 g范围内与峰面积线性关系良好，r＝0．999 9(n＝6），平均加样回收率为99．65%，RSD＝1．00%(n＝6)。结论该研究中建立的定性和定量分析方法操作简便，结果准确可靠，可用于控制郁福来胶囊的质量。关键词：郁福来胶囊；贯叶金丝桃；金丝桃苷；质量标准

郁福来胶囊为医院非标准制剂，是由中药材贯叶金丝桃经现代制剂工艺制备而成，具有清心明目、安神之功效，主要用于轻、中度抑郁症的治疗，已在临床应用10余年，疗效确切[1]。贯叶金丝桃，又名贯叶连翘，为藤黄科金丝桃属植物，广泛分布于我国西南与西北地区，含丰富的金丝桃苷。笔者对郁福来胶囊质量标准进行过研究，当时由于2005年版《中国药典（一部）》未收载贯叶金丝桃，故参考文献采用薄层色谱（TLC）法对郁福来胶囊中槲皮素及芦丁进行定性分析，采用紫外分光光度（UV）法测定了郁福来胶囊的金丝桃素含量，但因槲皮素及芦丁并不是贯叶金丝桃中代表性物质，且金丝桃素对光和热不稳定，其对照品无法从法定单位购买，故原质量标准存在不足。为保证制剂质量，参照2010年版《中国药典（一部）》[2]再次修订郁福来胶囊的质量标准，采用TLC法对其中贯叶金丝桃药材、金丝桃苷进行了薄层鉴别，并采用高效液相色谱（HPLC）法测定郁福来胶囊中金丝桃苷的含量。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Waters 2487型高效液相色谱仪，Waters CapLC 2487型双 λ吸光度检测器，Empower2数据处理系统（美国Waters公司）；FA1004型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂）；XS105型电子分析天平（梅特勒－托利多仪器有限公司）；KH2200DB型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；ZF－20D型暗箱式紫外分析仪（巩义市英峪予华仪器厂）；HHS型恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）。

1．2 试药

金丝桃苷对照品（批号为111521－201406，供含量测定用，含量为92．5%），贯叶金丝桃（批号为121506－200501），均购于中国食品药品检定研究院；郁福来胶囊（解放军第102医院制剂中心，批号分别为20150422，20150506，20150617，规格为每粒0．3 g）；甲醇与乙腈为色谱纯，水为纯化水，磷酸为分析纯。

2 薄层鉴别[2]

2．1 贯叶金丝桃

2．1．1 溶液制备

供试品溶液：取郁福来胶囊内容物0．1 g，加甲醇10mL，超声处理10min，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

对照品溶液：取贯叶金丝桃对照品0．1 g，加甲醇10 mL，超声处理10 min，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇定容至1 mL，作为对照品溶液。

阴性对照品溶液：按处方组成取不含贯叶金丝桃的其他成分，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2．1．2 展开及检视

照TLC法试验，吸取对照品溶液4 μL，供试品溶液2 μL，阴性对照品溶液2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸（25∶1）为展开剂，展开，取出，置紫外灯（365 nm）下检视。结果，供试品溶液色谱中，在与贯叶金丝桃药材色谱相应位置上有相同的斑点，且阴性无干扰。详见图1。

图1 贯叶金丝桃薄层色谱图

2．2 金丝桃苷

2．2．1 溶液制备

对照品溶液：取金丝桃苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。

供试品溶液：取本品内容物0．3 g，加甲醇10 mL，超声处理10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

阴性对照品溶液：按处方组成取不含贯叶金丝桃的其他成分，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2．2．2 展开及检视

照TLC法试验，吸取金丝桃苷对照品溶液2 μL，供试品溶液、阴性对照品溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－水（8∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，置紫外灯（365 nm）下检视。结果，供试品溶液色谱中，在与对照品溶液相应的位置上有相同的斑点，且阴性无干扰。详见图2。

3 含量测定(HPLC法)

3．1 色谱条件

色谱柱：Lichrospher C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－0．025 mol／L磷酸（50∶50）；流速：1．0 mL／min；检测波长：360 nm；进样量：20 μL；柱温：20℃。

图2 金丝桃苷薄层色谱图

3．2 溶液制备

对照品贮备液：精密称取金丝桃苷对照品10．82 mg，置50 mL容量瓶中，加55%乙醇定容，即得。

对照品溶液：精密量取对照品贮备液1 mL，置10 mL容量瓶中，加55%乙醇定容，用有机滤膜（0．45 μm）滤过，弃初滤液，即得。

供试品溶液：取郁福来胶囊10粒，精密称定，倒出其内容物，研细混匀，精密称取胶囊内容物0．2 g，置50 mL容量瓶中，加55%乙醇30 mL，密塞，超声处理10 min，取出，放冷，加55%乙醇稀释至刻度，摇匀，用有机滤膜（0．45 μm）滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：按处方组成，取除贯叶金丝桃以外的其他成分，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

3．3 方法学考察

专属性试验：取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，按拟订色谱条件进样测定，结果处方中其他成分对金丝桃苷测定无干扰，详见图3。

线性关系考察：分别精密量取对照品贮备液0．4，0．5，1，2，3，4 mL，置10 mL容量瓶中，加 55%乙醇定容，制成不同浓度的对照品溶液。按拟订色谱条件依次进样，以进样量（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标，以最小二乘法进行线性回归，得金丝桃苷回归方程 Y＝2．08×107X－2．62×105，r＝0．9999（n＝6）。结果表明，金丝桃苷进样量在0．173～1．73 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取对照品溶液，按3．1项下色谱条件重复进样5次，测得金丝桃苷峰面积分别为767 729，770 010，751 318，767 139，766 775，结果的 RSD为0．98%（n＝5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，3，6，9，12 h时按拟订色谱条件进样，测定峰面积，测得金丝桃苷峰面积分别为 763 336，767 729，781 383，773 173，766 698，结果的 RSD为0．88%(n＝5)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

图3 高效液相色谱图

表1 金丝桃苷加样回收试验结果（n＝6）

重复性试验：取同一批（批号为20150422）样品，按供试品溶液制备方法平行制备5份，依法进样测定。结果金丝桃苷含量分别为1．38，1．39，1．43，1．42，1．40 mg／粒，RSD为1．48%(n＝5)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已知含量的供试品（批号为20150422）6份，每份约0．1 g，精密称定，依法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率。结果见表1。

3．4 样品含量测定

取3批（批号分别为20150422，20150506，20150617）样品，依法制备供试品溶液，同法进样测定，记录峰面积，计算金丝桃苷含量。结果见表2。

4 讨论

4．1 鉴别

原质量标准[1]中，以槲皮素及芦丁为参照鉴别郁福来胶囊中贯叶金丝桃，但这2种物质并非贯叶金丝桃中代表性物质，特征性不强，故参照2010年版《中国药典(一部)》[2]，以贯叶金丝桃药材及金丝桃苷为参照进行鉴别，经验证，方法简便，结果可靠。

表2 样品含量测定结果（n＝3）

4．2 含量测定

4．2．1 质控指标确定

金丝桃苷为黄酮醇苷类化合物，具有较强的镇痛，护心、脑、肝脏，抗心肌缺氧损伤和保护脑缺血损伤等作用[3－6]，为贯叶金丝桃的活性成分之一，且其对照品能从法定单位购买；而原质控指标中的金丝桃素，对光和热不稳定[7]，且无法从法定单位购买，故选择金丝桃苷替代金丝桃素作为郁福来胶囊含量测定的质控指标。

4．2．2 提取溶剂选择

金丝桃苷极性较大，常采用甲醇、乙醇进行提取，笔者通过预试验比较了甲醇、乙醇作溶剂时金丝桃苷的提取率，发现乙醇提取效率高于甲醇，且毒性较低，故选用乙醇作为金丝桃苷的提取溶剂。又通过正交试验，优选用55%的乙醇30 mL超声提取样品10 min，金丝桃苷提取结果满意。

4．2．3 测定波长选择

对一定浓度的金丝桃苷对照品溶液进行光谱扫描，结果在360 nm波长处有较大吸收，同时考虑其他杂质干扰最小，故确定在此波长下进行测定。

4．2．4 流动相选择

本试验中参考2010年版《中国药典(二部)》及相关文献，比较了不同体系和不同比例的流动相，如乙腈－0．1% 磷酸（16∶84）[2]，乙腈－水（其中含0．3%柠檬酸和2%四氢呋喃）（25∶75）[8]，乙腈－0．2% 磷酸（15∶85）[9]，水－乙腈－磷酸（82．5∶17．5∶1）[10]，甲醇－0．5%磷酸（45∶55，V／V，用三乙胺调pH至3．0）[11]，甲醇－0．1%磷酸水溶液（40∶60，V／V）[12]等，结果以甲醇－0．025 mol／L磷酸（50∶50）[13]为流动相时保留时间适宜，峰形好，分离效果好，故以此为流动相。

本研究中采用TLC法对郁福来胶囊中贯叶金丝桃药材、金丝桃苷进行定性鉴别，采用HPLC法测定郁福来胶囊中金丝桃苷含量，并进行了方法学考察，发现建立的方法具有操作简单、重复性好、结果可靠等优点。经检测，3批样品中金丝桃苷含量均稳定，故可用于郁福来胶囊中金丝桃苷的质量控制。

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Quality Control Standard of Yufulai Capsules

Ni Yujia，Qu Falin
（PLA 102nd Hospital，Changzhou，Jiangsu，China 213003）

Objective To study the quality control standard of Yufulai Capsules．Methods Herba hyperici perforati and hyperoside in Yufulai Capsules were identified by thin－layer chromatogram（TLC）．An HPLC method was used for the determination of hyperoside in Yufulai Capsules．Results Herba hyperici perforati and hyperoside were separated from other components well．The linear ranges of hyperoside was 0．173－1．73 μg，r＝0．999 9(n＝6）．The average recovery of hyperoside was99．65%，RSD＝1．00%(n＝6）．Conclusion The method is simple，sensitive and reliable，which can be applied in the quality control of Yufulai capsules．

Yufulai Capsules；herba hyperici perforati；hyperoside；quality standard

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2017)04－0016－04

2016－10－14)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．04．004

军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题[13ZJZ16－3]。

倪玉佳（1990－），女，江苏常州人，硕士研究生，药师，研究方向为药物分析，（电子信箱）523869088＠qq．com。

瞿发林（1965－），男，上海人，硕士研究生，主任药师，研究方向为生药学，（电话）0519－83064780。