川崎病患儿血浆吲哚胺2，3双加氧酶含量的研究〔1〕

沈杰，章毅英，解春红，龚方戚

(浙江大学医学院附属儿童医院，浙江 杭州 310051)

川崎病患儿血浆吲哚胺2，3双加氧酶含量的研究〔1〕

沈杰，章毅英，解春红，龚方戚

(浙江大学医学院附属儿童医院，浙江 杭州 310051)

目的：探究川崎病(KD)患儿血浆吲哚胺2，3双加氧酶(IDO)含量变化与其发病的相关性。方法：选取2015年1月—2015年3月心血管内科住院的KD患儿20 例作为观察组，另选择20 例健康体检儿童作为对照组，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测观察组急性期及恢复期血浆IDO含量以及对照组血浆IDO含量，并进行比较。结果：观察组KD患儿急性期IDO含量明显增高，与对照组及恢复期IDO含量比较，差异有统计学意义(P<0.01)。观察组恢复期IDO含量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组内男女不同性别之间血浆IDO含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论：血浆IDO在川崎病患儿急性期含量增高，可能参与了KD患儿急性期免疫性炎症反应。IDO的表达水平与性别无关。

川崎病；吲哚胺2，3双加氧酶；酶联免疫吸附试验

川崎病(KD)，又称黏膜皮肤淋巴结综合征(MCLS)，其病因及发病机制迄今尚未完全阐明。大量临床及流行病学资料提示KD可能是一种或多种广泛分布的感染原在某些遗传易感的个体中引起异常的急性自身免疫性血管炎综合征，但导致免疫异常的调控因素仍不清楚[1]。吲哚胺2，3双加氧酶(IDO)参与色氨酸(Trp)沿犬尿氨酸途径的分解代谢，是这条代谢途径中的限速酶。有研究发现，IDO参与多种疾病的免疫调节，如抗病毒免疫、自身免疫性疾病、肿瘤的免疫逃避以及移植免疫等[2]。本研究通过检测KD患儿急性期及恢复期血浆IDO的含量与正常对照组比较，探讨其临床意义，为探索IDO是否参与KD的免疫性发病提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月—2015年3月心血管内科住院KD患儿20 例作为观察组，其中男女各10 例，年龄7个月～5 岁。入选患者均符合美国心脏病协会定义的KD的诊断标准[3]。急性期定义为发病10 d内。恢复期定义为急性期症状已消失、C反应蛋白(CRP)及血沉已降至正常范围。选取同一时期来我院体检的健康儿童20 例作为对照组，其中男女各10 例，年龄6个月～5 岁。两组病例一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有入选者对本研究均知情同意。

1.2 检测方法

空腹采静脉血3 mL，以EDTA抗凝，混合10～20 min后，2 000～3 000 r/min离心20 min，收集上清，-20 ℃冻存备用。参照人IDO酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒操作步骤进行操作，在450 nm波长测量吸光度(OD值)。以标准物制作标准曲线，样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 观察组KD患儿急性期IDO含量与其恢复期及对照组的比较

观察组KD患儿急性期血浆IDO含量为(776.73±298.32) pg/mL，恢复期血浆IDO含量为(254.39±72.36) pg/mL，对照组儿童血浆IDO含量为(232.09±113.17) pg/mL，结果提示KD患儿急性期血浆IDO含量明显增高，与对照组及恢复期比较，差异均有统计学意义(P<0.01)。KD患儿恢复期IDO含量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 不同性别之间的血浆IDO含量比较

急性期男患儿IDO含量为(809.31±346.28) pg/mL，急性期女患儿IDO含量(744.15±256.15) pg/mL；恢复期男患儿IDO含量(269.05±88.77) pg/mL，恢复期女患儿IDO含量为(239.74±51.92) pg/mL；对照组男孩IDO含量为(235.88±110.62) pg/mL，对照组女孩IDO含量为(228.30±121.52) pg/mL，经统计分析各组内男女不同性别之间IDO含量差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

KD是一种病因不明的急性全身性自身免疫性血管炎，好发于5 岁以下婴幼儿，亚裔发病率最高，病变主要累及中小动脉，尤其是冠状动脉，可形成冠状动脉扩张或冠状动脉瘤，是成年后缺血性心脏病的危险因素之一。目前该病已取代风湿热，成为发达国家或地区小儿后天性心脏病的首要原因。虽然该病自1967年首次报道以来各国已开展40多年的研究，但其病因及发病机制仍不十分清楚。近几年的临床和实验研究一致认为KD是由一种或多种广泛分布的外源性抗原触发在某些遗传易感的个体中引起异常的免疫反应，从而导致KD一系列特征性的临床表现；免疫系统的异常活化及免疫损伤性血管炎是KD的基本病理特征。在KD急性期，各种免疫细胞包括T细胞、B细胞及单核/巨噬细胞等被激活，促发众多炎症因子基因的表达，T细胞介导的异常免疫应答及细胞因子的级联放大效应导致血管内皮功能障碍是KD血管炎性损伤的基础。研究表明，炎症因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6、内皮素、P选择素等的显著升高在KD进展中发挥重要作用。临床上KD急性期经大剂量静脉用免疫球蛋白(IVIG)和口服阿司匹林治疗，KD患儿中仍有5%并发冠状动脉扩张或冠状动脉瘤[1，4]。因此，探索与KD发病相关的免疫性血管炎症反应机制将有助于寻找新的治疗对策，改进治疗方案，提高治愈率，减少并发症，改善预后。

IDO是细胞内一种含亚铁血红素的酶，广泛分布于人和其他哺乳类动物除肝脏以外的组织中，在小肠、肺、肾、脑、胎盘等多种组织中表达，而且特异性地表达在单核巨噬细胞或树突状细胞上。在这些细胞上IDO能够被脂多糖(LPS)、细胞因子(如IFN-α、IFN-γ及TNF-α等)诱导表达。IDO是肝脏以外催化色氨酸分子中的吲哚环氧化裂解，从而沿色氨酸-犬尿氨酸分解代谢的最主要的限速酶，人体内约95%的色氨酸是通过此途径代谢的。IDO通过降解色氨酸，使局部组织中的色氨酸耗竭，色氨酸的代谢产物犬尿氨酸的浓度增加，从而抑制T淋巴细胞的增殖[5-8]。多项研究证实，在炎性反应相关疾病中，IDO的活化可导致血清色氨酸水平降低和犬尿氨酸的水平升高[2，9]。自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。目前，有关学者认为自身免疫性疾病的发生与自身免疫的失耐受相关，即机体产生针对自身抗原的抗体并使自身反应性淋巴细胞的异常活化而致发病。IDO作为免疫平衡的一个重要调节器，通过自身免疫反应，能诱导外周免疫耐受和调控自体免疫反应。IDO诱导的免疫耐受和在自身免疫性疾病中的作用越来越受到重视。最近研究表明，IDO介导的色氨酸代谢异常存在于多种自身免疫性疾病中，如免疫性血小板减少症、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、Graves病等[5，10]。 KD为自身免疫性疾病，急性期存在炎症反应及免疫激活。我们推测随着KD急性期细胞因子的释放，可能会激活异常的IDO表达增加，色氨酸犬尿氨酸代谢途径被上调，继而引起一系列代谢产物的改变，在KD自身免疫性血管炎性反应中起一定的作用。

本研究发现KD患儿急性期血浆IDO含量明显增高，与恢复期及对照组相比差异有统计学意义，说明KD患儿急性期可能存在IDO的异常表达，从而参与异常的免疫性炎症反应。观察组及对照组中不同性别之间IDO含量比较差异无统计学意义，说明IDO表达水平与性别差异可能无关。因本研究样本数量有限，尚有待今后扩大样本量，并进一步检测IDO的生物活性及分子表达水平，以便更确切地阐明IDO活性及表达与KD急性期发病的相关性，为今后探索通过调控IDO的活性及表达来防治KD的新途径提供研究基础。

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Serum indoleamine 2，3 dioxygenase in children with Kawasaki disease

SHEN Jie，ZHANG Yiying，JIE Chunhong，GONG Fangqi

(The Children′s Hospital of Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310051，China)

Objective：To detect the level of IDO in patients with Kawasaki disease and analyze correlation between IDO and Kawasaki disease.Methods：Selected 20 cases of KD hospitalized in January 2015 to March 2015 and 20 cases of healthy volunteers.Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was adopted to detect the serum levels of IDO.The detection results of all those cases were compared and analyzed.Results：The serum IDO level of the acute phase KD group was significantly higher than that of both the normal control group and the recovery phase KD group(P<0.01).There is no significant difference of IDO level between the recovery phase KD group and the normal control group(P>0.05).There is also no significant gender difference of IDO level among all those groups(P>0.05).Conclusion：The serum IDO level increased in the acute phase KD patients.It might was involved in the acute immune reaction of KD.The IDO level might was not affected by gender.

kawasaki disease；indoleamine 2，3 dioxygenase；enzyme linked immunosorbent assay

1671-8631(2017)04-0253-03

〔1〕本课题为浙江省中医药普通项目研究资助项目(项目编号：2009CB048)；浙江省教育厅科研项目(项目编号：Y201017610)

R730.5

A

2016-10-14

(本文编辑：王作利 )

沈杰(1973— )，女，浙江省杭州市人，博士学位，主治医师。研究方向：小儿心血管疾病。