七味温阳胶囊镇痛及抗炎作用的实验研究

吕栋，杜雅娟，马迎春，王兰霞，王奕匀

（甘肃省药品检验研究院，甘肃 兰州 730070）

腰膝酸软、畏寒肢冷、头晕耳鸣、夜尿频繁等是肾阳虚的典型症状。七味温阳胶囊是由鹿角胶、鹿角霜、柏子仁、菟丝子、熟地黄、茯苓、补骨脂等七位药材加工制成,具有补肾温和、益精养血的功效。本文通过小鼠的动物实验，研究了七味温阳胶囊对小鼠镇痛及抗炎作用的影响，为临床合理用药提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 动物

昆明种小鼠，体质量18～22 g，雌雄各半[2]，来源：兰州生物制品研究所有限责任公司，实验动物使用号：SYXK（甘）2016-0002，饲养于笼盒中，环境温度18℃，湿度45%，自由饮食饮水。

1.2 药品及仪器

七味温阳胶囊（甘肃陇神戎发制药公司，批号：20160301），36%乙酸（天津市化学试剂一厂，批号：20140923），智能热板仪（宁海白石电子医药仪器厂，型号：GJ8402-型），吲哚美辛肠溶片（临汾宝珠制药有限公司，批号：150701），电子天平，伊文思兰（上海化学试剂公司，批号040503），紫外分光光度计（日本日立公司，型号U-3010），灌胃针，氢化可的松（浙江仙琚制药有限公司，批号：161140，规格5 mg/片），伊文氏蓝（上海麦克林生化科技公司有限，批号：B10089006）。

1.3 实验方法

1.3.1 肾阳虚动物模型的建立参照文献方法[1-2]，采用腹腔注射0.1%氢化可的松的方法建立小鼠肾阳虚模型，具体方法为：实验小鼠腹腔注射0.1%氢化可的松0.5 mL，qd，连续10 d，每天观察并记录小鼠体质量、饮水量、饮食量及温度等指标。

1.3.2 小鼠热板实验取痛阈值在5～30 s以内合格的小鼠60只，随机分为6组：对照组、模型组、阳性对照组及高、中、低3个剂量的给药组，每组10只，除对照组，其他5组按照“1.3.1”项建立肾阳虚模型。对照组及模型组给予等量蒸馏水，阳性对照组给予吲哚美辛肠溶片，19 mg/kg，隔日给药1次，共3次，七味温阳给药3个剂量组分别给予0.31 g/kg，0.62 g/kg，1.24g/kg，按0.5 mL/20 g，灌胃（ig），qd，连续5 d，于末次给药后1 h，2 h，4 h，6 h测定痛阈值，以小鼠舔后足作为疼痛反应指标，记录时间。若痛阈值超过60 s，为防止烫伤小鼠足部，痛阈值记为60 s[3-7]。

1.3.3 小鼠扭体实验取符合“1.1”项小鼠60只，随机分为6组：对照组、模型组、阳性对照组及高、中、低3个剂量的给药组，每组10只，除对照组，其他5组按照“1.3.1”项建立肾阳虚模型。对照组及模型组给予等量蒸馏水；阳性对照组给予吲哚美辛肠溶片，19 mg/kg，隔日给药1次，共3次；七味温阳给药组0.62 g/kg，1.24 g/kg，2.48 g/kg，按 0.5 mL/20 g，灌胃（ig），qd，连续5 d。于末次给药1 h后，每鼠腹腔注射0.8%冰醋酸溶液0.2 mL，由于疼痛使小鼠产生扭体反应，根据文献[2]，该反应在注射后15 min内发生的频率高，因此以注射后15 min内发生的扭体反应次数作为指标。进行t检验，并计算各组小鼠对醋酸刺激造成扭体反应的疼痛抑制率[3-7]。

1.3.4 醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性改变的影响取符合“1.1”小鼠60只，同“1.3.3”方法分组及给药，每组10只。于末次给药1 h后，每鼠腹腔注射0.8%醋酸0.3 mL，并立即尾静脉注射1%伊文氏蓝0.2 mL/只，30 min后处死小鼠，用注射器吸取5 mL生理盐水反复冲洗腹腔，收集洗液，离心（1 500 r/min）10 min，取上清液在590 nm处测定吸光度[6-7]，比较小鼠毛细血管通透性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 10.0软件分析数据，计量资料以“±s”表示，采用独立样本t检验分析，计数资料以百分数（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05，为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 七味温阳胶囊对小鼠热板致痛的影响

阳性组在给药后1 h，2 h，4 h的痛阈值显著高于模型组（P＜0.01），七味温阳给药中剂量组在1 h，2 h，4 h时痛阈值均高于模型组（P＜0.01），七味温阳给药低剂量与高剂量组在2 h时痛阈值均高于模型组（P＜0.01）；七味温阳给药低剂量组在2 h，中剂量在1 h，4 h，高剂量在1 h，2 h时痛阈值显著高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。见表1。

表1 七味温阳胶囊对小鼠热板致痛的影响

2.3 七味温阳胶囊对醋酸致小鼠扭体实验的影响

阳性组与七味温阳给药组（低、中、高剂量）小鼠扭体次数显著低于模型组（P＜0.01）；模型组小鼠扭体次数与对照组比较无统计学差异（P＞0.05），阳性组与七味温阳给药组（低、中、高剂量）小鼠扭体次数显著低于对照组（P＜0.01）；给药组小鼠扭体次数与阳性组比较，无统计学差异（P＞0.05），七味温阳给药组中剂量组的扭体次数明显低于低、高剂量组（P＜0.05），且对炎症的抑制率也高于低、高剂量组（P＜0.05）。见表2。

表2 七味温阳胶囊对醋酸致小鼠扭体实验的影响

2.4 七味温阳胶囊对小鼠毛细血管通透性改变的影响

阳性组与七味温阳给药组（低、中、高剂量）均显著低于模型组（P＜0.01）；给药组与阳性组比较，无统计学差异（P＞0.05）。给药组低、中剂量的通透性显著高于高剂量组（P＜0.05）。

表3 七味温阳胶囊对小鼠毛细血管通透性改变的影响

3 讨论

七味温阳胶囊主要用于肾阳虚引起的腰膝酸软、畏寒肢冷、头晕耳鸣、夜尿频繁等症状。本实验采用小鼠镇痛模型及抗炎模型，实验结果表明，七味温阳胶囊对上述镇痛及抗炎模型均具有一定的作用，既能显著缓解醋酸引起的疼痛，又可以延长热板致痛时间，还能显著降低小鼠毛细血管通透性。其中中剂量抑炎时间最持久，为临床科学合理用药提供参考。

[1] 张宗宝.鹿茸益肾胶囊治疗肾阳虚证阳痿的药效学研究[J].中国执业药师,2014,11(6):20-23.

[2] 何帮剑.肾阳虚证动物模型的研究进展[J].中国中医急症,2012,21(8):1293-1294.

[3] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海科学技术出版社,2006:241-247.

[4] 张庆华,黄贤华,黄敏,等.金英胶囊镇痛抗炎作用实验研究[J].中医药导报,2016,22(11):44-45.

[5] 李华,黄淑凤,邓翀,等.大血藤镇痛作用和抗炎作用研究[J].陕西中医,2013,34(10):1427-1428.

[6] 张婧卓,林喆,律广富,等.鹿角胶的抗炎镇痛作用研究[J].吉林中医药,2014,34,(10):975-977.

[7] 马建秀,高明堂,马迎春.棉丹通肺化淤胶囊镇痛、抗炎的实验研究[J].中药药理与临床,2005,21(3):49-50.