生普洱茶与熟普洱茶中咖啡因含量的HPLC分析

侯冬岩，刁全平，李铁纯，回瑞华，袁华芳

(鞍山师范学院 化学与生命科学学院,辽宁 鞍山 114007)



生普洱茶与熟普洱茶中咖啡因含量的HPLC分析

侯冬岩，刁全平，李铁纯，回瑞华，袁华芳

(鞍山师范学院 化学与生命科学学院,辽宁 鞍山 114007)

采用高效液相色谱法对生普洱与熟普洱茶中咖啡因的含量进行测定.色谱柱为Kromasil C18；流动相：水-甲醇-乙酸-二甲基酰胺(70∶30∶0.05∶0.25，V/V)；色谱柱温：25 ℃；进样量：5 μL；检测器：紫外检测器；扫描波长：210～400 nm；检测波长：274 nm.方法变异系数小于3.96%，回收率为90.62%～103.8%.生普洱茶和熟普洱茶咖啡因含量分别为19.92 mg/g 和28.58 mg/g.

生普洱茶；熟普洱茶；咖啡因

普洱茶，又名滇青茶，因原运销集散地在普洱市，故名普洱茶.普洱茶以云南大叶种晒青茶为原料，由发酵不同分为生普洱茶和熟普洱茶两种.生普洱茶是指用云南大叶种晒青毛茶为原料，以自然的方式陈放，不经过人工“发酵”“渥堆”处理.熟普洱茶是晒青毛茶经人工快速后熟发酵，“洒水”“渥堆”工序处理.

研究表明，饮用普洱茶具有降脂、改善胰岛素抗拒及预防心血管疾病，可预防动脉粥状硬化及心血管疾病的发生.普洱茶具有明显的抗氧化活性、清除自由基、杀死癌细胞作用，普洱茶还具有多种丰富的维生素，如胡萝卜素、维生素B1、维生素B2、 维生素C、维生素E等[1,2].实验表明，普洱茶含有对人体有很多积极作用的咖啡碱，而对普洱茶中咖啡碱的研究少见报道.本文采用高效液相色谱法对生普洱与熟普洱茶中咖啡因的含量进行测定，为进一步开发利用普洱茶提供科学参考.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters 1525-2996-tcm 液相色谱仪(美国Waters公司)；KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)；色谱柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(迪马公司).

咖啡因标准品：中国药品生物制品检定所.

甲醇、乙酸、二甲基甲酰胺(均为色谱纯)；氧化镁(分析纯)；二次蒸馏水.

1.2 实验样品

样品：生普洱茶和熟普洱茶，均产于云南.

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理 将样品用粉碎机粉碎，过0.45 mm的筛子.精确称取样品1.0 g于50 mL的烧杯中，加入0.5 g氧化镁，再加入30 mL二次水，在沸水浴中浸提20 min，每隔5 min振荡一次，然后立即减压过滤，滤液冷却至室温后移入50 mL的容量瓶中，用二次蒸馏水定容到50 mL.从其中移取10 mL，超声脱气5 min后，再通过0.45 μm的混纤维孔滤膜过滤，弃去最初的5 mL，保留后5 mL[3,4]，待测.

1.3.2 咖啡因标样溶液的配制 精密称取20 mg咖啡因标准品于50 mL的小烧杯中，用少量甲醇-水(70∶30，V/V) 溶解后，置于50 mL容量瓶中，加甲醇-水(70∶30，V/V) 稀释至刻度.1.3.3 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18；流动相：水-甲醇-乙酸-二甲基酰胺[5,6](70∶30∶0.05∶0.25，V/V)；色谱柱温：25 ℃；进样量：5 μL；检测器：紫外检测器；扫描波长：210～400 nm；检测波长：274 nm.

1.3.4 测定方法 将茶样分别按1.3.1处理，按1.3.3色谱条件进行测定，每个样品测定3次.

2 结果与分析

2.1 咖啡因标准品和样品色谱图

采用1.3.3 高压液相色谱条件测得咖啡因标准品与样品的色谱图如图1～3所示.

图1 咖啡因标准品的HPLC色谱图

图2 生普洱茶的HPLC色谱图

图3 熟普洱茶的HPLC色谱图

由图1～3可知，可以采用HPLC法对生普洱茶和熟普洱茶中咖啡因进行定量分析.

2.2 标准曲线的绘制

分别精确移取1.3.2中的咖啡因标样溶液0.5，0.9，1.3，1.7，2.1，2.5 mL于10 mL的容量瓶中，用甲醇∶水(70∶30，V/V) 定容到10 mL.分别超声脱气5 min后，再通过0.45 μm的混纤维孔滤膜过滤.进样量为5 μL，以积分峰面积为横坐标，咖啡因浓度为纵坐标，标准曲线回归方程为：

Y=6×10-8X+0.004 4，r =0.999 7.

2.3 精密度实验

精确称取1.0 g熟普洱茶作为样品，按照1.3.1的方法处理，配制6个系列浓度的溶液，每个浓度溶液测定9次，计算该方法的精密度，结果如表1所示.

表1 方法精密度

2.4 回收率实验

精密称取1.0 g熟普洱茶作为样品，按照1.3.1的方法处理，配成3个系列浓度的溶液，分别精确加入咖啡因标准品的溶液1.0 mL，混合均匀后，超声脱气，通过混合纤维膜处理，进样检测，测定该方法的回收率为90.62%～103.8%.

2.5 样品中咖啡因含量的测定

按照1.3.1节的方法处理各样品，在1.3.3节的色谱条件下每个样品进样3次，求出3次的积分峰面积的平均值，计算各样品的咖啡因含量，结果见表2.

表2 样品中茶多酚的含量

3 结论

采用高效液相色谱法测定了生普洱茶和熟普洱茶样品的咖啡因含量.该方法的变异系数小于3.96%，回收率为90.62%～103.8%.

分析结果表明，生普洱茶和熟普洱茶咖啡因含量分别为19.92 mg/g 和28.58 mg/g.由于生普洱茶和熟普洱茶发酵处理不同，生普洱茶的原料以自然的方式陈放，不经过人工“发酵”“渥堆”处理，而熟普洱茶的原料由人工快速后熟发酵，“洒水”“渥堆”工序处理.可见经人工“发酵”“渥堆”处理后，咖啡因的含量增加.

本实验选用高效液相色谱法测定普洱茶中咖啡因的含量，该法准确、灵敏、快速、简便、专属性强，可作为普洱茶中咖啡因含量的定量测定方法.

[1] 易超然,卫中庆.咖啡因的药理作用和应用[J].医学研究生学报,2005,18(3):270-272.

[2] 侯冬岩,回瑞华,李铁纯.黑茶挥发性化学成分的研究[J].食品科学,2008,29(8):550-552.

[3] 陈忠平,陈君华,黎少君,等.茶叶中提取咖啡因方法的改进[J].安徽技术师范学院学报,2005(1):46-48.

[4] 胡媛,周艳明,刘笑.反相高效液相色谱法测定茶叶和速溶咖啡中咖啡因的含量[J].福建茶叶生产技术,2006(1):25-26.

[5] 关崇新,回瑞华,侯冬岩,等.茶叶中咖啡含量的测定[J].鞍山师范学院学报,2001,3(3):45-47.

[6] 胡媛,周艳明,牛森,等.反相高效液相色谱法测定茶叶和速溶咖啡中咖啡因的含量[J].现代农业科技,2006(9):52.Analysis of caffeine content in raw puer tea and cooked puer tea by HPLC

(责任编辑：陈 欣)

HOU Dongyan，DIAO Quanping，LI Tiechun，HUI Ruihua，YUAN Huafang

(School of Chemistry and Life Science,Anshan Normal University,Anshan Liaoning 114007,China)

The content of caffeine in raw and cooked puer tea were determined by HPLC,with Kromasil C18as Column,methanol-water-acetic acid-dimethyl amide (70∶30∶0.05∶0.05,V/V) as mobile phase,25 ℃ as column temperature,274 nm as the detection wavelength,and 5μL as the injection volume.The coefficient of variation in this paper is less than 3.96%,and the recovery is 90.62%～90.62%.The content of caffeine in raw and cooked puer tea were 19.92 mg/g and 28.58 mg/g respectively.

raw puer tea;cooked puer tea;caffeine

2016-05-16

辽宁省教育厅科学技术基金资助课题(20331079).

侯冬岩(1962-)，男，吉林省吉林市人，鞍山师范学院化学与生命科学学院教授，主要从事天然功能食品科学研究.

O657．3

A

1008-2441(2016)04-0021-03