CXCR4在皮肤基底细胞癌中的表达及意义

史春艳 王 舒 李福秋

(长春市中心医院，吉林 长春 130051)



CXCR4在皮肤基底细胞癌中的表达及意义

史春艳 王 舒1李福秋1

(长春市中心医院，吉林 长春 130051)

目的 研究CXCR4在皮肤基底细胞癌中的表达及其在皮肤基底细胞癌发生、发展中的作用。方法 收集168例皮肤基底细胞癌组织、癌旁组织及癌旁正常组织标本，应用组织/细胞RNA快速提取试剂盒和RIPA裂解液分别提取组织RNA，制备组织蛋白。采用RT-PCR和Western印迹方法检测CXCR4 mRNA和蛋白的表达。结果 与癌旁正常组织对比，基底细胞癌和癌旁组织CXCR4 mRNA表达均显著增加(P=0.003，0.027)，基底细胞癌组织CXCR4 mRNA的表达高于癌旁组织(P=0.037)；基底细胞癌和癌旁组织CXCR4蛋白的表达均显著增加(P=0.005，0.025)，基底细胞癌组织CXCR4蛋白的表达高于癌旁组织(P=0.039)。结论 CXCR4在皮肤基底细胞癌组织中高表达，参与基底细胞癌的增殖、存活。

皮肤基底细胞癌；CXCR4

细胞趋化因子CXCL12通过其受体CXCR4诱导细胞信号途径，调控细胞的动员、迁移、增殖及存活，从而参与胚胎发育、细胞分化和器官重建。CXCR4不仅广泛存在于正常组织细胞，在许多肿瘤组织也有表达，并且是过表达〔1〕。研究表明CXCR4与其特异性配体CXCL12结合形成CXCL12/CXCR4轴启动肿瘤细胞的迁移、侵袭、血管形成及诱导转移〔2〕。但是CXCR4在基底细胞癌的表达少有报道。本文通过检测皮肤基底细胞癌BCC及其癌旁组织中CXCR4的表达，探讨BCC发病的分子机制。

1 材料和方法

1.1 标本收集 收集吉林大学第二医院2012年12月至2015年6月168例皮肤BCC患者癌组织、癌旁组织及癌旁正常组织标本，男98例，女70例，年龄35～80岁，平均63.1岁，所选样本均经过病理明确诊断。

1.2 试剂 组织/细胞RNA快速提取试剂盒(广州美基生物技术有限公司)、反转录试剂盒(北京鼎国生物技术有限公司)、TaqDNA聚合酶、M-MLV、Olig(dT)、RNA酶抑制剂、dNTP、DM2000(宝生物工程(大连)有限公司)、兔抗人CXCR4多克隆抗体(武汉三鹰生物技术有限公司)、抗兔的二抗HRP-IgG、ECL化学发光显色液(上海七海复泰生物技术有限公司)。CXCR4引物：上游：5′-AGCTGTTGGTGAAAAGGTGGTCTATG-3′，下游：5′-GCGCTTCTGGTGGCCCTTGGAG-3'，扩增片段260 bp。β-actin引物：上游：5′-CGGGAAATCGTGCGTGAC-3′，下游：5′-TGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′，扩增片段434 bp。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.3 方法

1.3.1 RT-PCR检测CXCR4 mRNA的表达 称取20 mg组织充分研磨后，用试剂盒提取组织总RNA，紫外分光光度计检测RNA浓度。取1 μg RNA进行逆转录反应，反应体系：M-MLV 1 μl，Olig(dT)1 μl，RNA酶抑制剂 0.5 μl，dNTP 1 μl，RNAse free water补足至20 μl。37℃孵育60 min。取1 μl cDNA，配制PCR反应体系：10×PCR缓冲液2.5 μl，dNTP 1 μl，上、下游引物各1 μl，Taq DNA Polymerase 0.25 μl，ddH2O补足至25 μl。按94℃ 1 min；94℃ 30 s，56℃ 30 s，72℃ 30 s，30个循环；72℃ 5 min的条件进行PCR。1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，凝胶成像系统下观察并照相。应用Quantity one软件分析CXCR4和β-actin基因PCR产物，计算mRNA相对表达量。

1.3.2 Western印迹检测CXCR4的表达 用RIPA裂解液裂解组织制备蛋白，12%SDS-PAGE电泳后转膜1.5 h，4℃封闭过夜。加1∶500稀释的兔抗人CXCR4多克隆抗体37℃孵育1 h，TBST洗3次，再加抗兔的二抗HRP-IgG(1∶1 000)37℃孵育1 h，PBS洗三次，ECL显色。

1.4 统计学处理 应用SPSS13.0软件行χ2检验。

2 结 果

2.1 皮肤基底细胞癌组织CXCR4 mRNA的表达 与癌旁正常组织对比，基底细胞癌和癌旁组织CXCR4 mRNA的表达均显著增加(P=0.003，0.027)，基底细胞癌组织CXCR4 mRNA的表达高于癌旁组织(P=0.037)，见图1。

2.2 皮肤基底细胞癌组织CXCR4蛋白的表达 与癌旁正常组织对比，基底细胞癌和癌旁组织CXCR4蛋白的表达均显著增加(P=0.005，0.025)，基底细胞癌组织CXCR4蛋白的表达高于癌旁组织(P=0.039)，见图2。

1.DNA marker(DM2000);2.癌旁正常组织;3.癌旁组织;4.癌组织图1 CXCR4 mRNA在皮肤基底细胞癌组织的表达

图2 CXCR4蛋白在皮肤基底细胞癌组织的表达

3 讨 论

紫外线照射包括太阳辐射、电离辐射(包括放射治疗、原子弹爆炸)及免疫抑制剂的应用等是皮肤BCC发生的高危因素，因此，其发病率具有年龄特点，发病部位多位于皮肤暴露处。绝大多数患者的早期治疗是有效的，局部疗法如手术切除、放疗、局部用药或光动力疗法可以防止BCC进展〔3〕。但是，手术和放疗又成了复发的高危因素〔4〕。Epstein〔5〕研究发现BCC的Hedgehog(Hh)信号传导途径异常活跃，其中PTCH1和SMO蛋白的突变最常见。SMO的抑制剂vismodegib于2012年和2013年分别获得FDA和EMA的批准，已进入Ⅱ期临床试验〔6，7〕。

越来越多的证据表明，趋化因子不只通过刺激免疫系统诱导抗肿瘤，还通过直接影响肿瘤转化、存活、增殖及迁移、浸润、转移而激活肿瘤细胞〔8〕。因此，CXCR4/CXCL12相互作用指导

CXCR4+的肿瘤细胞转移至特定的位点，如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、肾癌、前列腺癌和神经母细胞瘤〔9〕。肿瘤内部处于低氧，低氧诱导因子(HIF)-1α上调，可诱导肿瘤细胞上的CXCR4高表达，使表达CXCR4的肿瘤细胞可优先扩散至CXCL12高表达的组织，如肺、肝脏、淋巴结和骨髓〔10〕。除了趋化性，CXCL12结合于CXCR4诱导特异的信号通路并启动与增殖和存活相关的细胞级联反应，增加细胞内钙离子水平，参与基因转录的调控〔11〕。

本研究证实了BCC癌组织高表达CXCR4，提示CXCR4参与了BCC癌的增殖、存活。

1 Liekens S，Schols D，Hatse S，etal.CXCL12-CXCR4 axis in angiogenesis，metastasis and stem cell mobilization〔J〕.Curr Pharm Des，2010；16(35)：3903-20.

2 Teicher BA，Fricker SP.CXCL12(SDF-1)/CXCR4 pathway in cancer〔J〕.Clin Cancer Res,2010；16(11)：2927-31.

3 Rubin AI，Chen EH，Ratner D.Basal-cell carcinoma〔J〕.N Engl J Med,2005；353(21)：2262-9.

4 Telfer NR，Colver GB，Morton CA.British association of dermatologists.Guidelines for the management of basal cell carcinoma〔J〕.Br J Dermatol,2008；159(1)：35-48.

5 Epstein EH.Basal cell carcinomas：attack of the hedgehog〔J〕.Nat Rev Cancer,2008；8：743-54.

6 Dreno B，Kunstfeld R，Grob JJ，etal.Vismodegib，a Hedgehog pathway inhibitor，in advanced basal cell carcinoma：an interim analysis of the STEVIE study in 500 patients〔C〕.11th International Congress of the Society for Melanoma Research,2014.

7 Sekulic A，Migden MR，Oro AE，etal.Efficacy and safety of vismodegib in advanced basal-cell carcinoma〔J〕.N Engl J Med,2012；366(23)：2171-9.

8 Lombardi L，Tavano F，Morelli F，etal.Chemokine receptor CXCR4：role in gastrointestinal cancer〔J〕.Crit Rev Oncol Hematol,2013；88(3)：696-705.

9 Meads MB，Hazlehurst LA，Dalton WS.The bone marrow microenvironment as a tumor sanctuary and contributor to drug resistance〔J〕.Clin Cancer Res,2008；14(9)：2519-26.

10 Schioppa T，Uranchimeg B，Saccani A，etal.Regulation of the chemokine receptor CXCR4 by hypoxia〔J〕.J Exp Med,2003；198(9)：1391-402.

11 Roland J，Murphy BJ，Ahr B，etal.Role of the intracellular domains of cxcr4 in sdf-1-mediated signaling〔J〕.Blood,2003；101(2)：399-406.

〔2015-11-19修回〕

(编辑 李相军)

李福秋(1963-)，女，主任医师，教授，博士生导师，主要从事真菌性皮肤病临床研究。

史春艳(1963-)，女，主任医师，主要从事抗皮肤老化研究。

R73

A

1005-9202(2016)20-4980-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.017

1 吉林大学第二医院皮肤科