芳香新塔花茶对小鼠镇静催眠、生长发育及免疫器官指数的影响研究

沙爱龙，孟庆艳，郝海燕

(1 西南医科大学 生理学教研室，泸州 646000；2 塔里木盆地生物资源保护利用兵团重点实验室，阿拉尔 843300；3 西南医科大学 药物与功能性食品研究中心，泸州 646000)



芳香新塔花茶对小鼠镇静催眠、生长发育及免疫器官指数的影响研究

沙爱龙1，孟庆艳2，郝海燕3

(1 西南医科大学 生理学教研室，泸州 646000；2 塔里木盆地生物资源保护利用兵团重点实验室，阿拉尔 843300；3 西南医科大学 药物与功能性食品研究中心，泸州 646000)

目的：研究芳香新塔花茶对小鼠的镇静催眠、生长发育及免疫器官指数的影响. 方法：用不同剂量的芳香新塔花茶灌胃，用自发活动记录法记录60 min内小鼠自发活动次数，利用阈剂量戊巴比妥钠睡眠实验法和阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠实验，观察芳香新塔花茶镇静催眠作用. 用称重法，观察法及计量法研究芳香新塔花茶对小鼠生长发育及免疫器官指数的影响. 结果：芳香新塔花茶低、中、高剂量组对小鼠走动次数、举双前肢数、入睡时间、体重，免疫器官指数作用差异显著(p<0.05)或差异极显著(p<0.01)，且呈剂量依赖效应；给药组小鼠的生长发育状况更加良好. 结论：芳香新塔花茶具有显著的镇静催眠、促进生长发育及免疫增强作用.

芳香新塔花茶；镇静催眠；免疫器官指数；生长发育

当今社会中，失眠、免疫力低下的患者呈上升趋势，普通的药物治疗往往因为口感等原因，治疗体验效果不佳. 开发一种具有镇静催眠、增强免疫力作用的保健茶是一个不错的思路.

新疆特色药用植物芳香新塔花(ZiziphoraclinopodioidesLam.)，是维吾尔族和哈萨克族常用药材,又名小叶薄荷或唇香草，属唇形科(Labiatate)新塔花属，一般分布于我国新疆天山、阿尔泰山、准噶尔西部山地、帕米尔高原和昆仑山的山地草原及砾石质坡地 ，中亚、蒙古、前苏联、伊朗及西亚至巴尔干半岛也有分布[1]. 在新疆维吾尔医药中称为续则或苏则，具有疏散风热、清利头目、宁心安神、利水清热、壮骨强身、清胃消食之功效，主治感冒发热、目赤肿痛、头痛咽痛、心悸失眠等症[2]. 维吾尔族民间用其全草煎汤内服或煎茶饮，可缓解胸闷、头晕等症状，临床用于治疗冠心病、高血压及调节心血管系统功能等疾病[3]. 近年来国内外已有关于芳香新塔花药理学方面的研究报道[4,5]. 笔者发现芳香新塔花具有明显的抗炎镇痛作用且无明显毒副作用,其对小鼠离体十二指肠平滑肌收缩具有抑制作用[6,7]. 目前，关于芳香新塔花镇静催眠作用、免疫作用的研究尚未见报道，本实验拟将芳香新塔花制备成口感好、茶香味纯正的保健茶，观察对小鼠镇静催眠作用、免疫器官指数及生长发育的影响，为进一步拓展芳香新塔花临床新用途奠定基础.

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物

96只昆明种小鼠，雌雄各半，体重26～29 g，许可证号SCXK(新)2003-0001，由塔里木大学动物科学学院动物实验站提供.

1.1.2药品与仪器

芳香新塔花(ZiziphoraclinopodioidesLam.)叶，2012年7月采于新疆伊犁州巩留野核桃沟，经鉴定为唇形科新塔花属植物的干燥叶片. 红茶为市售红茶，蜂蜜为市售枣花蜂蜜. 戊巴比妥钠(佛山市化工实验厂)，地西泮(北京益民药业有限公司)，蔗糖、柠檬酸为国产分析纯. 精密电子天平(上海精科天平)，电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司).

1.2实验方法

1.2.1芳香新塔花茶的制备

芳香新塔花叶片在70℃条件下烘干，然后研磨成粉，过80 目筛，低温干燥储存备用. 称取叶片粉末，在100℃下，按照液料比(液为蒸馏水)85∶1，浸提27.5 min，获得浸提液(浓度为0.86～1.28 g 生药/100 mL). 然后按照浸提液6.5 g/L、蔗糖74 g/L、柠檬酸0.65 g/L、魔芋精粉0.66 g/L 和蜂蜜4.4 g/L 比例制成芳香新塔花茶. 将保健茶浓缩至含芳香新塔花浓度为2 g/kg 高剂量芳香新塔花茶(含生药0.1 g/mL). 后稀释两次，各稀释一倍，得1 g/kg 中剂量(含生药0.05 g/mL)和0.5 g/kg 低剂量(含生药0.025 g/mL)芳香新塔花茶，装入磨口瓶中，均放入冰箱中冷藏备用.

1.2.2芳香新塔花茶对小鼠自发活动率的影响

将小鼠随机分为正常对照组、阳性对照组(地西泮，5 mg/kg)、低剂量组(0.5 g/kg)、中剂量组(1 g/kg)、高剂量组(2 g/kg)，共5组，每组12只. 给药前称量小鼠体重并观察小鼠在5 min内的走动次数及举双前肢次数. 各组小鼠连续灌胃(0.20 mL/10 g)15 d，1次/d，其中正常对照组给等体积生理盐水，阳性对照组给予地西泮. 于末次给药前8 h禁食不禁水. 准确记录末次给药后15，30，45，60 min时的5 min内小鼠走动次数和举双前肢次数.

1.2.3芳香新塔花茶对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的影响

分组、灌胃同1.2.2. 末次给药30 min后，小鼠腹腔注射戊巴比妥钠30 mg/kg(按每10 g体重注射0.3%戊巴比妥钠0.10 mL. 戊巴比妥钠阈下催眠量，即90%小鼠不入睡的戊巴比妥钠最大剂量，由预试验确定，观察并记录入睡动物数(注射后15 min内小鼠翻正反射消失达1 min以上者记为入睡)，计算各组入睡率.

1.2.4芳香新塔花茶对阈剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡时间和睡眠时间的影响

分组、灌胃同1.2.2. 末次给药30 min后，小鼠腹腔注射戊巴比妥钠阈剂量45 mg/kg(按每10 g体重注射0.3%戊巴比妥钠0.15 mL)，记录睡眠出现(翻正反射消失)和消失的时间，计算睡眠潜伏期(睡眠出现时间-记录开始时间)，睡眠持续时间(睡眠消失时间-睡眠出现时间).

1.2.5芳香新塔花茶对小鼠生长发育与体重的影响

分组、灌胃同1.2.2. 比较观察各组小鼠毛色光泽，手握小鼠背部感受肌肉张力. 于末次给药后称量小鼠体重.

1.2.6芳香新塔花茶对小鼠免疫器官指数的影响

各组末次给药后，第2 日处死小鼠. 取脾脏、胸腺、肝脏，剔除黏附组织并用滤纸吸干脏器血污后称量，计算脾脏指数、胸腺指数、肝脏指数.

脾脏指数(mg/g)=脾脏重量(mg)/体重(g)，

胸腺指数(mg/g)=胸腺重量(mg)/体重(g)，

肝脏指数(mg/g)=肝脏重量(mg)/体重(g).

1.2.7数据统计分析

所有实验结果的数据以均数±标准差(x±s)表示，所有数据分析在SPSS 13.0软件上进行.

2　结果

2.1芳香新塔花茶对小鼠走动次数作用的影响

对照组和实验组小鼠走动次数见表1. 与正常对照组比较，芳香新塔花茶低、中、高剂量组和地西泮组对小鼠走动次数均有抑制作用，且随剂量的增高小鼠走动次数减少，表明不同剂量的芳香新塔花茶均能减少小鼠走动次数，随着剂量的升高，芳香新塔花茶抑制作用显著(p<0.01).

表1　芳香新塔花茶对小鼠走动次数作用的影响

2.2芳香新塔花茶对小鼠举双前肢的影响

对照组和药物组小鼠举双前肢次数见表2. 与正常对照组比较，地西泮组和芳香新塔花茶低、中、高剂量组对小鼠举双前肢数均有抑制作用，且随剂量的增高小鼠举双前肢次数减少，表明不同剂量的芳香新塔花茶均能减少小鼠举双前肢数，随着剂量的升高，芳香新塔花茶有极显著的抑制作用(p<0.01).

表2　芳香新塔花茶对小鼠举双前肢次数作用的影响

2.3对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡率的影响

对照组和药物组对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡率的影响见表3. 与正常对照组比较，给药组能增加小鼠入睡只数，且随剂量升高入睡只数明显增加.

表3　芳香新塔花茶对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡率的影响

2.4对阈剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠潜伏时间、持续时间的影响

对照组和药物组对阈剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠潜伏时间、持续时间作用的影响见表4. 与正常对照组比较，芳香新塔花茶低、中、高剂量组和地西泮组小鼠睡眠潜伏时间缩短、睡眠持续时间延长；随芳香新塔花茶剂量的增大睡眠潜伏期显著减少(p<0.05或p<0.01)，且显著延长小鼠睡眠持续时间(p<0.05或p<0.01).

表4　芳香新塔花茶对阈剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠潜伏时间、持续时间作用的影响

2.5芳香新塔花茶对小鼠体重、外观及毛色作用的影响

对照组和药物组对小鼠体重的影响见表5. 与正常对照组比较，芳香新塔花茶低、中、高剂量组对小鼠均有增重作用，且呈剂量依赖效应，中、高剂量组差异显著(p<0.05，p<0.01)，给药组小鼠的生长发育状况更加良好，肌肉收缩更有力，外观毛色较对照组更有光泽.

表5　芳香新塔花茶对小鼠体重的影响

2.6芳香新塔花茶对小鼠免疫器官指数的影响

对照组和药物组对小鼠免疫器官指数的影响见表6. 与正常对照组比较，芳香新塔花茶低、中、高剂量组免疫器官指数均增大(p<0.05或p<0.01)，且具剂量依赖效应，说明芳香新塔花茶能增强小鼠的免疫器官指数.

表6　芳香新塔花茶对小鼠免疫器官指数的影响

3　讨论

常用西药类镇静催眠药物在治疗失眠的同时会产生一定的依赖性[8]，而一些中药镇静催眠药物有效且不产生依赖性. 自发活动实验是评价中枢神经系统兴奋状态的一项重要指标，动物的自发活动情况反映其中枢神经系统的功能状态，兴奋时活动次数增加，抑制时活动次数减少. 本实验结果表明，芳香新塔花茶高、中剂量组小鼠自发活动次数明显低于正常对照组(p<0.05或0.01)；同时，与对照组比较，高剂量的芳香新塔花茶可使小鼠走动次数、举双前肢数明显减少(p<0.05或0.01)，表明芳香新塔花茶对小鼠自发活动有抑制作用. 戊巴比妥类药物是典型的中枢性抑制药，凡是对中枢神经有抑制作用的药物，一般都能增强其中枢抑制作用. 本实验研究表明，与正常对照组比较，高低剂量芳香新塔花茶与阈下剂量戊巴比妥钠合用分别可以使小鼠睡眠潜伏时期缩短(p<0.05或0.01)和睡眠持续时间(p<0.05或0.01)延长且增加小鼠入睡只数，从而认为芳香新塔花茶有明显的镇静催眠作用.

胸腺和脾脏是动物体内主要的免疫器官，肝脏是动物机体重要的代谢器官，同时也是动物的免疫器官之一. 胸腺、脾脏、肝脏等免疫器官的重量变化，是反映动物体免疫功能的重要指标[5]. 本实验结果表明，给予不同浓度的芳香新塔花茶，小鼠的体重、免疫器官指数有明显的变化，且随着浓度的升高体重有明显的增加(p<0.05或0.01)，免疫器官指数也明显增大(p<0.05或0.01).

结果预示芳香新塔花茶具有明显的镇静催眠、增强免疫力的作用，经常饮用具有很好的保健作用，其镇静催眠作用、免疫增强作用机理有待于进一步研究.

[1] 米吉提·胡达尔拜地，潘晓玲．新疆植物志·第4卷[M]．乌鲁木齐：新疆科学技术出版社，2004：327．

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[4] Belyaev N F, Demeubaeva A M. Chromatographic study of the composition of the essential oil ofZiziphoraclinopodioides, a vicarious form of Origanum vulgare [J]. Chemistry of Natural Compounds, 1999, 35(1): 52-54.

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Effects of theZiziphoraclinopodioidesLam Tea on Sedative-hypnotic,Immune Organ Index, Growth and Development of Mice

ShaAilong1,MengQingyan2,HaoHaiyan3

(1 Department of Physiology, Southwest Medical University, Luzhou, 646000, China; 2 Key Laboratory of Biological Resource Protection and Utilization of Tarim Basin, Xinjiang Production & Construction Group, Alar, 843300, China; 3 Drug Discovery Research Center, Southwest Medical University, Luzhou, 646000, China)

Objective: To study the effects of different doses of the tea fromZiziphoraclinopodioidesLam on sedative-hypnotic, immune function, growth and development of mice. Methods: Compared with the physiological saline groups, the effects of theZiziphoraclinopodioidesLam tea on spontaneous activity of mice，dormancy-number and dormancy-time of mice induced by pentobarbital sodium were observed，and the spleen index, thymus index, liver index, growth and development with three doses ofZiziphoraclinopodioidesLam tea were determined. Results: Compared with the physiological saline groups, the three doses of theZiziphoraclinopodioidesLam tea could inhibit the spontaneous activity，increase dormancy-number and dormancy-time of mice induced by pentobarbital sodium, and it could also obviously increase the spleen index, thymus index, liver index and strengthen the growth and development of mice. Conclusions: TheZiziphoraclinopodioidesLam tea has obviously sedative and hypnotic effects in mice and there is a synergistic effect between them and pentobarbital sodium, and the tea could also obviously strengthen the immune function, growth and development of mice.

ZiziphoraclinopodioidesLam tea; sedative-hypnotic; immune organ index; growth and development

2016-06-11

沙爱龙(1981-)，男，副教授，博士，研究方向：免疫药理学，E-mail: lyshaailong@163.com

国家自然科学基金资助项目(31360635)；西南医科大学人才引进科研启动金(2014YJRC04)；新疆生产建设兵团青年科技创新资金专项(2012CB028)

R285.5; R967

A

1672-4321(2016)03-0057-05