五味子酸枣仁软胶囊改善动物睡眠功能的研究

白丽婷，王莹，高卓林，赵麟萱，汪平，李萍，董艺霖，金向群，李海燕

（1.吉林大学药学院，长春 130021；2.长春中医药大学，长春 130117）

睡眠是保障人们的正常生活和学习的重要活动之一，良好的睡眠有助于消除疲劳，增强免疫力。然而，随着社会的飞速发展，失眠已逐渐成为困扰人们工作生活的难题之一。近年来，改善睡眠的药物层出不穷，但是其效果良莠不齐，给患者造成很多困扰。该试验中所用样品是一种纯中药制剂，所用原料安全无毒，绿色环保，且廉价易得，具有一定程度的现实意义和良好的应用前景。

五味子酸枣仁软胶囊具有改善睡眠功能的作用。该软胶囊配方是以中医中药理论为依据，根据中医对失眠病因的分析以及中医中标本兼治思想进行筛选，配方主要为五味子和酸枣仁。五味子是木兰科植物五味子〔Schisandra chinensis (Turcz.) Baill〕的干燥成熟果实，药用价值极高，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效。酸枣仁为鼠李科植物酸枣〔Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa (Bunge) Hu ex H.F.Chou〕的干燥成熟种子，具有养心补肝、宁心安神、敛汗、生津之功效[1]。二者结合使用，可达到全方位补心气、安心神的功效。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试材 五味子酸枣仁软胶囊，规格：0.5 g/粒，由长春中医药大学提供，吉林标普生物工程有限公司生产，成人建议摄入量为0.033 3 g/（kg·d），每次4 粒，每天1 次；密封保存于阴凉干燥处。样品配制：称取该样品胶囊内容物10.0 g，加玉米胚芽油定容至200 mL为高剂量；称量该样品胶囊内容物3.3 g，加玉米胚芽油定容至200 mL为中剂量；称量该样品内容物1.7 g，加玉米胚芽油定容至200 mL 为低剂量。置于4 ℃冰箱储存。

1.1.2 试剂 戊巴比妥钠（Sigma公司，批号：12k1005）；巴比妥钠（天津市申泰化学试剂有限公司，批号20130326）；玉米胚芽油（山东西王食品有限公司，批号20160128）。

1.1.3 主要仪器 DT100 型电子天平、FA2204B型电子天平、计时器（Sartorius 公司）。

1.1.4 实验动物与分组 KM 小鼠，SPF 级，雌性，体重18.0～22.0 g，48 只，长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供，生产许可证号：SCXK-（吉）2011-0004，实验动物使用许可证号：SYXK-（吉）2015-0009。饲养环境为清洁级，实验动物环境设施合格证：SYXK-（吉）2015-0009，实验室温度21～24℃；相对湿度39%～69%。

本试验分别以成人日建议摄入该受试样品的5、10、30 倍设置剂量，低、中、高剂量组分别为 0.17、0.33、1.00 g/kg，玉米胚芽油作为阴性对照组。各实验组动物每天给予受试样品1 次，连续30 d，灌胃体积为20 mL/kg。

1.2 试验方法

1.2.1 动物直接睡眠试验 将3 个剂量的受试样品分别给予受试组动物，观察实验动物睡眠现象。睡眠指标为翻正反射消失。翻正反射：当小鼠处于背卧位时，能立即翻正身位。翻正反射消失：超过30～60 s 不能翻正者，即认为动物进入睡眠状态，也就是翻正反射消失。翻正反射恢复即为动物睡醒，翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间。统计给予受试物后1h 内各实验组入睡动物数及睡眠时间。

1.2.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间试验 各实验组每日1 次准时摄入不同剂量受试样品，灌胃体积为20 mL/kg，阴性对照组给予同体积玉米胚芽油，连续30d。在实验组小鼠末次摄入受试物30 min之后，各实验组小鼠经腹腔注射47.5 mg/kg 戊巴比妥钠，注射量为0.01 mL/g，观察小鼠状态，以翻正反射消失为依据，观察受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。

1.2.3 戊巴比妥钠阈下剂量睡眠试验 各组动物每天1 次按时给予不同剂量受试样品，灌胃体积为20mL/kg，阴性对照组给予同体积玉米胚芽油，连续30 d。实验组小鼠末次摄入受试物30 min后，各实验组小鼠经腹腔注射27.5mg/kg戊巴比妥钠，注射量为0.01mL/g，在安静且温度为24～25 ℃的条件下，观察实验组小鼠情况，以翻正反射消失达1 min以上为入睡动物，记录30 min内每组入睡动物数。

1.2.4 巴比妥钠睡眠潜伏期试验 各组动物每天1 次按时灌胃不同剂量受试样品，灌胃体积为20 mL/kg，阴性对照组给予同体积玉米胚芽油，连续30 d。实验组小鼠末次摄入受试物20 min 后，将体积为0.01mL/g的巴比妥钠（250 mg/kg），以腹腔注射方式给予各实验组小鼠。以翻正反射消失为依据，观察受试物能否延长巴比妥钠睡眠潜伏期。

1.3 数据统计

在戊巴比妥钠睡眠时间延长试验和巴比妥钠睡眠潜伏期试验中，一般采用方差分析。分析程序如下：先进行方差齐性检验，方差齐，计算F 值，F 值＜F0.05，则各组均数间差异无显著性；F 值＞F0.05，P≤0.05，用多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。

在戊巴比妥钠阈下剂量睡眠试验和直接睡眠试验中，以入睡动物数为计数资料，用X2检验（确切概率法）。

2 结果与分析

2.1 对小鼠体重的影响

由表1～3 可见，在延长戊巴比妥钠睡眠时间试验、戊巴比妥钠阈下剂量睡眠试验、巴比妥钠睡眠潜伏期试验中，各组动物每天1 次按时给予不同剂量受试样品，连续30 d。结果发现，该样品3 个剂量组在给予受试样品期间，小鼠的体重增长与阴性对照组比较无显著性差异（P＞0.05），由此说明，五味子酸枣仁软胶囊在这3 项试验中对小鼠增重无影响。

表1 对延长戊巴比妥钠睡眠时间试验小鼠体重的影响Table 1 Effect of prolonged pentobarbital sodium sleep time experiment on body weight of mice

表2 对戊巴比妥钠阈下剂量睡眠试验小鼠体重的影响Table 2 Effect of pentobarbital sodium subthreshold dose sleep experiment on body weight of mice

表3 对巴比妥钠睡眠潜伏期试验小鼠体重的影响Table 3 Effect of barbital sodium sleep latency experiment on body weight of mice

2.2 对直接睡眠试验的影响

在直接睡眠试验中，高、中、低3 个剂量组的睡眠动物和睡眠发生率皆为0，与阴性对照组的睡眠动物只数和睡眠发生率相同，说明五味子酸枣仁软胶囊对各剂量组小鼠直接睡眠无明显影响。见表4。

表4 对直接睡眠试验的影响Table 4 Effect on direct sleep experiments

2.3 对延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响

由表5可见，在延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的试验中，中、低剂量组小鼠睡眠时间与阴性对照组比较无差异（P＞0.05），而高剂量组小鼠睡眠时间与阴性对照组比较有显著性差异（P＜0.05），具有统计学意义。由此表明，五味子酸枣仁软胶囊能延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间，该项试验结果呈阳性。

表5 对延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响Table 5 Effect of prolonging the sleep time of mice induced by pentobarbital sodium

2.4 对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量睡眠的影响

在戊巴比妥钠阈下计量睡眠试验中，高、中、低3个剂量组的睡眠发生率与阴性对照组比较差异不显著（P＞0.05）。表明，五味子酸枣仁软胶囊对戊巴比妥钠阈下剂量小鼠睡眠发生率影响不明显，该项试验结果呈阴性。见表6。

表6 对戊巴比妥钠阈下剂量小鼠睡眠发生率的影响Table 6 Effect of sleep on the incidence of sodium pentobarbital in subthreshold mice

2.5 对小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期的影响

在小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期试验中，低剂量组小鼠的睡眠潜伏期与阴性对照组比较无差异（P＞0.05），而高、中剂量组小鼠的睡眠潜伏期与阴性对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。表明，五味子酸枣仁软胶囊能缩短小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期，试验结果呈阳性。见表7。

表7 对小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期的影响Table 7 Effect of mouse barbital sodium sleep latency

3 讨论

本试验将五味子酸枣仁软胶囊按照试验要求处理后，各实验组动物每天按相对应的剂量给予受试样品1 次，连续30 d，灌胃体积为20 mL/kg。共进行4 项实验，其中，延长戊巴比妥钠睡眠时间试验和巴比妥钠睡眠潜伏期试验的结果均呈阳性；戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验的结果呈阴性，无直接催眠作用。按照《保健食品检验与评价技术规范》中改善睡眠功能检验方法，可判定五味子酸枣仁软胶囊具有改善睡眠功能。