分光光度法测定两种开封菊花总黄酮含量

王 桥，金月珍，朱凌佳，潘新迪，陈芳芳，王 震

河南大学 药学院，河南 开封475004



分光光度法测定两种开封菊花总黄酮含量

王 桥，金月珍，朱凌佳，潘新迪，陈芳芳，王 震

河南大学 药学院，河南 开封475004

〔目的〕 建立测定开封菊花中总黄酮含量的测定方法。〔方法〕 利用可见分光光度法测定开封菊花中总黄酮的含量。〔结果〕 总黄酮含量在0.02～0.10 mg/mL范围内，线性关系良好，平均加样回收率为95.95%，RSD为1.02%。黄飞舞和白线菊总黄酮含量分别为7.87%和10.37%。〔结论〕该方法简便、准确，可用于菊花中总黄酮的含量测定。

开封；菊花；可见分光光度法；总黄酮

菊花系菊科植物(ChrysanthemummorifoliumRamat.)的干燥头状花序，具有散风清热、清肝明目之功效，临床用于治疗风热感冒、头晕目眩、眼目昏花等症。2015年版《中国药典》收载了亳菊、杭菊、滁菊、怀菊、贡菊等5种菊花[1]。《神农本草经》中将菊花列为上品，《本草纲目》谓其能“除风热，益肝补阴”。现代研究表明，菊花中主要含有黄酮类、挥发油类、三萜类、氨基酸、多糖和有机酸等成分，具有抗脂肪肝、抗氧化、抗肿瘤、镇痛等作用[2-6]，其中的黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、舒张血管、改善心肌缺血、保肝护肝等多种药理作用[7-12]。开封菊花具有悠久的栽培观赏历史，但关于其活性成分的研究较少。本文利用可见分光光度法测定两种开封菊花中的总黄酮含量，为其进一步开发提供参考。

1　材料与仪器

1.1实验材料

黄飞舞、白线菊，采摘于开封市通许县开封菊花种植基地，经开封市农科所赵艳莉副研究员鉴定为菊科植物菊的栽培品种，标本存放于河南大学药物研究所。怀菊，购自新乡恒天药业有限公司。

1.2试剂与仪器

乙醇(安徽安特食品股份有限公司)，亚硝酸钠(天津市德恩化学试剂有限公司)，硝酸铝(北京化工厂)，氢氧化钠(天津市德恩化学试剂有限公司)。以上试剂皆为分析纯。芦丁标准品(中国药品生物制品检定所，1000800-201408，含量≥92.8%)。

电热套、冷凝管、BT-25S电子天平(德国Sartorius公司)、TP-114电子天平(美国Danver公司)、UV-2600型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)。

2　实验方法与结果

2.1供试品溶液的制备

精密称取菊花粗粉(过一号筛)1.0 g，加入70%的乙醇30 mL，80 ℃回流提取2 h，放冷、滤过；滤液置100 mL容量瓶中，用70%的乙醇定容至刻度，振荡摇匀，备用。

2.2对照品溶液的制备

精密称取芦丁标准品5 mg，置25 mL容量瓶中，加70%的乙醇溶解，定容至刻度，振荡摇匀，即得0.2 mg/mL对照品溶液。

2.3测定方法

精密吸取若干对照品或供试品溶液，置10 mL容量瓶中，加入5%的NaNO2溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min；然后加入10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min；再加入4%的NaOH溶液4 mL，摇匀，最后用70%的乙醇定容至刻度；放置20 min后，于一定波长下以试剂空白为对照测定其吸光度。

2.4测定波长的选择

精密量取空白试剂、芦丁对照品溶液、供试品溶液各2 mL，精密量取供试品溶液0.4 mL。按第2.3节所述方法，显色后在紫外可见分光光度计上进行全波长扫描。发现对照品和供试品溶液在400～600 nm波长范围内512 nm处有最大吸收，空白试剂在此处无吸收。最终确定，最大吸收波长512 nm(见图1-图3)。

2.5稳定性考察

精密量取5份对照品溶液2 mL，分别置10 mL容量瓶中。按第2.3节所述方法，于512 nm波长下分别在10，20，30，40，50，60，90，120 min时测定吸光度。结果显示，在20～120 min范围内吸光度基本稳定，最终确定显色后放置20 min后再进行测定。

2.6标准曲线的制备

精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5 mL，分别置10 mL容量瓶中。按第2.3节所述方法，于512 nm波长下测定吸光度。绘制标准曲线，得线性方程：

A=9.235 0 C+0.060 3，

R2=0.999 5。

结果显示(见图4)，芦丁对照品在0.02～0.10 mg/mL之间具有良好的线性关系。

图1　空白试剂吸光图谱

图2　标准品吸光图谱

图3　供试液吸收光谱

图4　标准曲线

2.7精密度实验

精密量取对照品溶液2 mL，置10 mL容量瓶中。按第2.3节所述方法，于512 nm波长下测定吸光度。测量5次，计算得，平均吸光度=0.428 8，RSD=1.30%，表明本方法具有良好的精密度。

2.8重复性实验

精密称取白线菊1.0 g，共6份，分别按第2.1节所述方法制备供试品溶液。精密吸取0.4 mL供试品溶液，按第2.3节所述方法，于512 nm波长下测定吸光度。平均含量为10.28%，RSD为2.05%，表明该显色反应稳定、重复性良好。

2.9加样回收率实验

精密称取菊花0.5 g(已知含量7.93%)，共6份，分别加入芦丁对照品若干克，按第2.1节所述方法制备加样供试品溶液。按第2.3节所述方法，于512 nm波长下测定吸光度，并计算回收率，结果见表1。

表1　加样回收率实验

由表1得，平均回收率=95.95%，RSD=1.02%。

2.10样品含量测定

分别精密称取黄飞舞、白线菊、怀菊各1.0 g，按第2.1节所述方法制备供试品溶液。按第2.3节所述方法，于512 nm波长下测定吸光度，得出总黄酮含量(见表2)。

表2　开封菊花部分品种与怀菊总黄酮含量比较

3　结论

本文对开封产菊花黄飞舞、白线菊与怀菊总黄酮含量进行了测定研究。实验结果表明：白线菊的总黄酮含量最高，且开封产菊花黄飞舞、白线菊的总黄酮含量均高于药用菊花怀菊，具有潜在的开发价值。通过对开封菊花中总黄酮含量的测定，可为其质量评价提供依据，也为进一步的活性研究提供参考。

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[责任编辑李麦产]

Determination of total flavonoids from two kinds of Chrysanthemums in Kaifeng by spectrophotometry

WANG Qiao, JIN Yuezhen, ZHU Lingjia, PAN Xindi, CHEN Fangfang, WANG Zhen

Pharmacy College of Henan University, Henan Kaifeng 475004, China

〔Objective〕Thesis aims to develop a method to determine the total flavonoids content of Chrysanthemum in Kaifeng.〔Methods〕Spectrophotometry is used to determine the total flavonoids content in two Chrysanthemums in Kaifeng.〔Results〕The result shows the total flavonoids content is a linear range of 0.02～0.10 mg/mL. The averagerecoveryis 95.95%,RSD is 1.02%. The total flavonoids content of Huang feiwu and Bai xian ju are 7.87% and 10.37% respectively.〔Conclusion〕The method is simple and accurate, which could be used for the determination total flavonoids content.

Kaifeng; Chrysanthemum; spectrophotometry; total flavonoids

1672-7606(2016)03-0172-03

2016-05-16

开封市菊花药食功效开发重点实验室项目(FX2224F03751)

王桥(1989-)，男，河南开封人，硕士研究生，从事药物质量研究与评价工作。

R927.2

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